一種新的多肽——人Yip44和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種新的多肽－人Ｙｉｐ４４，編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)ＤＮＡ重組技術(shù)產(chǎn)生這種多肽的方法。本發(fā)明專利技術(shù)還公開(kāi)了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發(fā)明專利技術(shù)還公開(kāi)了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明專利技術(shù)還公開(kāi)了編碼這種新的人Ｙｉｐ４４的多核苷酸的用途。（*該技術(shù)在2019年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生物
，具體地說(shuō)，本專利技術(shù)描述了一種新的多肽——人Yip44，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術(shù)還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。囊泡運(yùn)輸是生物體內(nèi)各細(xì)胞間物質(zhì)傳輸?shù)某Ｒ?jiàn)方式，真核細(xì)胞就是通過(guò)囊泡運(yùn)輸在不同的亞細(xì)胞組成物間進(jìn)行物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。來(lái)自供體膜的囊泡芽與受體膜的一些成分融合以完成將物質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)到另一細(xì)胞。其中還涉及一些與囊泡及目標(biāo)膜形成整合蛋白的蛋白復(fù)合物，如Sec蛋白及Rab蛋白，它們調(diào)節(jié)著囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn)，指導(dǎo)囊泡正確地將物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到目的細(xì)胞膜表面。人們已從酵母中克隆得到了多個(gè)編碼整合膜蛋白的基因，如SEC22,BET1,BOS1及YIP1等，這些基因所編碼的蛋白均參與將物質(zhì)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體的過(guò)程。這些基因所編碼的均是一些小分子量的蛋白，分子量從16KDA-28KDA不等。它們的氨基末端及中心區(qū)域均為親水的；而C末端含有一橫跨膜的固定結(jié)構(gòu)。人們?cè)谑笾幸驳玫搅藘蓚€(gè)與Sec22p and Bet1同源的蛋白，分別被命名為prsec22及rbet1。prsec22及rbet1均為整合膜的組成成分，它們的C末端均含有一橫跨膜結(jié)構(gòu)域。研究發(fā)現(xiàn)，這兩個(gè)蛋白均存在與高爾基體膜表面，并在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜到高爾基體的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中表現(xiàn)出活性。本專利技術(shù)的新的人Yip44蛋白與Saccharomyces cerevisiae的Yip1蛋白在蛋白水平上有38％的同一性和59％的相似性。Yip1蛋白為高爾基體結(jié)合蛋白，是囊泡運(yùn)輸所必需的一種蛋白，而Ypt/Rab GTPase是分泌及內(nèi)吞轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)因子；Yip1在生物體內(nèi)與兩種不同的GTPase,Ypt1p及Ypt31p特異地結(jié)合，以調(diào)節(jié)生物體內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。研究發(fā)現(xiàn)，這些與囊泡物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的蛋白可用來(lái)診斷、預(yù)防及治療一些與細(xì)胞增殖及炎癥相關(guān)的疾病。由于如上所述人Yip44蛋白在機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人Yip44蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人Yip44蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術(shù)的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人Yip44以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供含有編碼人Yip44的多核苷酸的重組載體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供含有編碼人Yip44的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人Yip44的方法。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本專利技術(shù)的多肽——人Yip44的抗體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本專利技術(shù)多肽——人Yip44的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人Yip44異常相關(guān)的疾病的方法。本專利技術(shù)涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本專利技術(shù)還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO:1中530-964位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1284位的序列。本專利技術(shù)另外涉及一種含有本專利技術(shù)多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本專利技術(shù)多肽的方法。本專利技術(shù)還涉及一種能與本專利技術(shù)多肽特異性結(jié)合的抗體。本專利技術(shù)還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人Yip44蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術(shù)的多肽。本專利技術(shù)還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術(shù)還涉及一種體外檢測(cè)與人Yip44蛋白異常表達(dá)相關(guān)的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測(cè)生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測(cè)生物樣品中本專利技術(shù)多肽的量或生物活性。本專利技術(shù)也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術(shù)多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學(xué)上可接受的載體。本專利技術(shù)還涉及本專利技術(shù)的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發(fā)育性疾病或免疫性疾病或其它由于人Yip44表達(dá)異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術(shù)的其它方面由于本文的技術(shù)的公開(kāi)，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的下列術(shù)語(yǔ)除非特別說(shuō)明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術(shù)語(yǔ)“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質(zhì)序列及其片段或部分。當(dāng)本專利技術(shù)中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質(zhì)分子的氨基酸序列時(shí)，這種“多肽”或“蛋白質(zhì)”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質(zhì)分子相關(guān)的完整的天然氨基酸。蛋白質(zhì)或多核苷酸“變體”是指一種具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)，如用亮氨酸替換異亮氨酸。變體也可具有非保守性改變，如用色氨酸替換甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改變導(dǎo)致與天然存在的分子相比，一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸的增加。“替換”是指由不同的氨基酸或核苷酸替換一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的結(jié)構(gòu)、調(diào)控或生物化學(xué)功能的蛋白質(zhì)。類似地，術(shù)語(yǔ)“免疫學(xué)活性”是指天然的、重組的或合成蛋白質(zhì)及其片段在合適的動(dòng)物或細(xì)胞中誘導(dǎo)特定免疫反應(yīng)以及與特異性抗體結(jié)合的能力。“激動(dòng)劑”是指當(dāng)與人Yip44結(jié)合時(shí)，一種可引起該蛋白質(zhì)改變從而調(diào)節(jié)該蛋白質(zhì)活性的分子。激動(dòng)劑可以包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或任何其它可結(jié)合人Yip44的分子。“拮抗劑”或“抑制物”是指當(dāng)與人Yip44結(jié)合時(shí)，一種可封閉或調(diào)節(jié)人Yip44的生物學(xué)活性或免疫學(xué)活性的分子。拮抗劑和抑制物可以包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或任何其它可結(jié)合人Yip44的分子。“調(diào)節(jié)”是指人Yip44的功能發(fā)生改變，包括蛋白質(zhì)活性的升高或降低、結(jié)合特性的改變及人Yip44的任何其它生物學(xué)性質(zhì)、功能或免疫性質(zhì)的改變。“基本上純”是指基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化人Yip44。基本上純的人Yip44在非還原性聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。人Yip44多肽的純度可用氨基酸序列分析。“互補(bǔ)的”或“互補(bǔ)”是指在允許的鹽濃度和溫度條件下通過(guò)堿基配對(duì)的多核苷酸天然結(jié)合。例如，序列“C-T-G-A”可與互補(bǔ)的序列“G-A-C-T”結(jié)合。兩個(gè)單鏈分子之間的互補(bǔ)可以是部分的或全本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種分離的多肽－人Ｙｉｐ４４，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：毛裕民，謝毅，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海博容基因開(kāi)發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：31[中國(guó)|上海]