具有二萜合酶活性的多肽制造技術

本發明專利技術特別地涉及具有二萜合酶活性的新多肽、編碼所述多肽的核酸分子，以及源自Clitopilus?passeckerianus的基因簇，此基因簇被認為參與生產截短側耳素的生物合成途徑。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本申請特別地涉及具有二萜合酶活性的新多肽、編碼所述多肽的核酸分子，以及源自Clitopilus passeckerianus的基因簇,此基因簇被認為參與生產二職，更準確地截短側耳素的生物合成途徑。
技術介紹
萜烯類和類萜類都是多種多樣并且非常大的類的通常天然存在的有機化學物，它們源自五碳異戊二烯單位，所述異戊二烯單位被組裝然后以多種方式修飾。萜烯類和類萜類都可在其碳骨架和官能團上彼此不同。大部分萜烯類和類萜類包含一個或多個環狀結構。類萜類通常也稱為類異戊二烯類。可根據其骨架的部分的萜烯單位(C5)的數量對萜烯類和類萜類分類。因此，單萜類由兩個異戊二烯單位組成(C10，10個碳原子的骨架)，倍半萜烯類由三個異戊二烯單位組成(C15，15個碳原子的骨架)，二萜類由四個異戊二烯單 位組成(C20，20個碳原子的骨架)，諸如此類。二萜類和類二萜類通常源自櫳牛兒基櫳牛兒焦磷酸(GGPP)。二萜合酶是本領域技術人員熟知的酶，它通常催化使用櫳牛兒基櫳牛兒焦磷酸(GGPP)作為底物來分別形成二萜或類二萜的反應。在此，GGPP通常被轉化為包含一個或多個碳環的環狀化合物。因此，二萜合酶通常稱為二萜環化酶。二萜合酶通常參與生產二萜或類二萜的生物合成途徑。基因簇通常被認為是構成功能單位(例如通過編碼參與一個特別的生物合成途徑的多肽(如生產次級代謝物的途徑的多肽))的相鄰基因的組。次級代謝物是通常由某生物在特定條件下生產的物質。與初級代謝物相反，它們對于生產它們的生物通常不是必要的。光譜抗生素截短側耳素是類萜，更準確地類二萜，是真菌次級代謝物的一個實例。它于 1951 年從 Pleurotus mutilus (Fr.) Sacc.和 Pleurotuspasseckerianus Pil 首次被分離。首先，截短側耳素抑制革蘭氏陽性細菌和支原體的生長。截短側耳素與核糖體50S亞基的肽基轉移酶組分結合并抑制細菌中蛋白質合成。截短側耳素只是截短側耳素抗生素類組的一個成員，該組還包含多種半合成衍生物，包括已說明在治療豬痢疾和肺炎中有效的硫姆林、伐奈莫林和瑞他莫林(參見Yao, 2007),硫姆林(2)O I 伐奈莫林(3)f' 3XY Λ 0 :士必 酬2ο權利要求1.分離的多肽， 該多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含 與SEQ ID NO : I具有至少50%序列同一性的序列， 與SEQ ID NO :2具有至少40%序列同一性的序列，和 至少I個選自以下的序列 i)與SEQID NO 7具有至少15%序列同一性的序列； ii)與SEQID NO 4具有至少25%序列同一性的序列； iii)與SEQID NO 5具有至少45%序列同一性的序列；和 iv)與SEQID NO :6具有至少45%序列同一性的序列， 其中SEQ ID NO : 1-2和4-7源自Clitopiluspasseckerianus,并且其中所述多妝是二萜合酶。2.根據權利要求I的分離的多肽，其中所述氨基酸序列還包含與SEQIDNO 3具有至少 50%序列同一性的序列，其中 SEQ ID N0:3 源自 Clitopilus passeckerian us。3.根據權利要求I和2中任一項的分離的多肽，其中多肽的分子量在90kDa和140kDa之間，特別地在IOOkDa和130kDa之間，特別地在105kDa和120kDa之間； 和/或 其中多肽包含這樣的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含與SEQ IDNO 9具有至少70%的序列同一性，更優選地與SEQ ID NO :9具有至少80%，甚至更優選地至少85%，或甚至至少90%，例如甚至更優選地至少95%的序列同一性的序列。4.根據權利要求I至3中任一項的分離的多肽，其中所述多肽能催化櫳牛兒基櫳牛兒焦磷酸轉化為截短側耳素前體，特別地轉化為根據式(I)的化合物。5.分離的核酸分子，其包含 A)編碼根據權利要求I至4中任一項的多肽或SEQID NO 9的多肽的核苷酸序列， B)核苷酸序列，所述核苷酸序列是 a)SEQ ID NO 8的序列；或 a，)SEQ ID NO :15的序列或與其互補的序列；或 b)a’)中限定的序列的部分序列，所述部分序列編碼二萜合酶；或 c)編碼二萜合酶并與a’)中限定的序列具有至少40%的序列同一性，或與a)中限定的序列或b)中限定的部分序列具有至少60%的序列同一性的序列；或 d)編碼二萜合酶并由于a)、a’)、b)和c)中任一項限定的序列的遺傳編碼導致退化的序列；或 e)編碼二萜合酶并能與SEQID N0:8和/或SEQ ID NO :13在嚴格條件下雜交的序列， C)如項B中限定的核苷酸序列的至少18個連續核苷酸， 和/或 D)至少18個連續核苷酸并且能與具有如項A或項B中限定的核苷酸序列的核酸分子在嚴格條件下雜交。6.根據權利要求I至4中任一項的分離的多肽或根據權利要求5的分離的核酸分子，其中所述多肽或核酸分子能夠源自真菌宿主，特別是來自擔子菌門(basidomycota),更特別地來自傘菌目(agaricales),甚至更特別地來自粉裙菌科(entolomataceae)_的真菌，特別地其中所述多肽或核酸分子能夠源自Clitopilus pinsitus或Clitopiluspasseckerian us。7.包含如權利要求5A或5B中限定的核酸序列的載體。8.選自細胞、組織和非人生物的非天然存在的宿主，所述宿主包含至少一個含有如權利要求5A或5B中限定的核苷酸序列的核酸分子和/或根據權利要求7的載體， 特別地，其中所述宿主是真菌宿主，更特別地是來自擔子菌門，更特別地來自傘菌目，更特別地來自粉褶菌科的真菌。9.生產根據權利要求I至4中任一項的多肽的方法，所述方法包括 (i)將至少一個根據權利要求5A或5B的核酸分子和/或至少一個根據權利要求7的載體引入選自細胞、組織和非人生物的宿主，和( )在適于生產多肽的條件下培養宿主， 特別地其中該方法還包括步驟(iii)從宿主回收多肽。10.生產截短側耳素的方法，該方法包括 (i)將根據權利要求5Ba ‘的核酸分子和/或包含根據權利要求5Ba’的核酸分子的載體引入選自細胞、組織和非人生物的宿主，和 ( )在適于生產截短側耳素的條件下培養宿主。11.改變選自細胞、組織和非人生物的宿主中截短側耳素生產的方法，其中所述宿主能生產截短側耳素并且包含至少一個含有如權利要求5A或5B中限定的核苷酸序列的核酸分子，所述方法包括操縱所述至少一個核酸分子的i)表達、ii)身份或iii)表達和身份。特別地其中所述方法是 a)增加截短側耳素生產的方法，或 b)減少截短側耳素生產的方法，特別地包括破壞或下調所述至少一個核酸分子； 特別地，其中所述宿主是真菌宿主，更特別地是來自擔子菌門，甚至更特別地來自傘菌目，甚至更特別地來自粉褶菌科的真菌。12.根據權利要求5A或5B的分尚的核酸分子 a)在生產截短側耳素中的用途，其中所述核酸分子序列的2至50個核苷酸與由能生產截短側耳素的野生型生物包含的參與生產截短側耳素的生物合成途徑的基因簇的序列不同；或 b)在生產截短側耳素前體本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：R·米特鮑爾，T·施佩希特，
申請(專利權)人：桑多斯股份公司，
類型：
國別省市：