一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株，其保藏編號為：CCTCC?NO：V201662，分類命名為：Ⅰ群4型禽腺病毒WZ株，保藏日期為：2016年12月14日，活性成分包括滅活的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒毒株的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒疫苗，禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株在制備禽腺病毒Ⅰ群4型病毒診斷用瓊擴抗原、HI抗原和陽性血清試劑抗原試劑中以及治療用卵黃抗體、抗血清中的應用。利用本發明專利技術提供的Ⅰ群4型禽腺病毒毒株制備的疫苗免疫后，對于Ⅰ群4型禽腺病毒毒株WZ株的攻毒保護率達到90%?100%。本發明專利技術作為制造效果良好的疫苗毒株，可預防禽包涵體肝炎和心包積液綜合征，也可用于病毒的鑒定和流行病學的調查。

【技術實現步驟摘要】
一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株及其應用
本專利技術屬于獸醫生物制品
，具體涉及一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株及其應用。
技術介紹
禽腺病毒根據抗原特性可以分為Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群3個群，不同群之間的抗原性存在顯著差異。Ⅰ群腺病毒在養禽場中廣泛分布，擁有一種共同的群特異性抗原；可以從雞、鴨、鵝、火雞等多種禽類中分離到，能感染雞的Ⅰ群腺病毒有12種血清型。Ⅱ群禽腺病毒包括火雞出血性腸炎病毒、雉雞大理石脾病病毒、雞大脾病病毒。Ⅲ群禽腺病毒僅包含產蛋下降綜合征病毒。Ⅰ群禽腺病毒中，血清4型（FAdV4）可引起雞包涵體肝炎和心包積液綜合征（IBH-HPS）。FAdV4引起的包涵體肝炎和心包積液綜合征則是2014年以來嚴重困擾我國養雞業健康發展的最突出的一個疫病，因該病1987年首先報道于巴基斯坦高斯的安卡拉地區而得名“安卡拉病”。FAdV4是引起雞包涵體肝炎和心包積液綜合征的病原，該病毒主要感染3-7周齡長勢良好的雞，也可感染產蛋雞。強毒力毒株感染時，則不表現任何臨床癥狀，而突然出現死亡高峰。死亡率30-70%不等。主要的病理變化是心包增厚、不透明；包涵體肝炎和心包腔積有草黃色透明的、或呈膠凍樣液體；肝臟腫大、顏色變黃或有斑駁狀土黃色不規則條紋、質脆；腎臟充血，腎葉腫大，分界清晰，輸尿管有尿酸鹽沉積；脾臟腫大、充血；嚴重者心臟及心冠脂肪有出血點；腺胃乳頭或腺胃和肌胃交界處有時有出血。FAdV4為線性雙鏈DNA，無囊膜，呈二十面體對稱結構，直徑為70-80nm，病毒衣殼由240個六鄰粒和12個五鄰粒，共252個殼粒組成；病毒在宿主細胞核內復制，產生嗜堿性包涵體，中和抗原位于六鄰粒和纖突，六鄰粒含有主要的屬和亞屬特異性抗原決定簇和次要的種特異性抗原決定簇，是中和抗體的靶目標和主要的保護性抗原基因，與致病性密切相關。病毒的基因組從26kb-45kb不等。FAdV4主要通過眼、上呼吸道及消化道等途徑感染雞。病毒主要在消化道、呼吸道、肝臟、腎臟等部位復制。感染病毒后，當天即可分離到病毒，但是通常發病雞在3周齡以后開始大量排毒。其中，肉雞排出病毒的高峰期是4-6周；產蛋雞是5-9周。值得注意的是Ⅰ群禽腺病毒在感染后8周還可使雞重復受到感染；在雞體內有循環抗體存在的同時，該群病毒仍能在雞體內復制和排毒。安卡拉病正在我國從北到南爆發流行，其給我國養禽業造成了巨大的打擊。預防安卡拉病的疫苗已經在巴基斯坦、俄羅斯、緬甸、埃及、日本、秘魯、尼泊爾、韓國、越南、菲律賓、墨西哥等國家和地區商業化應用。在中國，目前尚無商業化的相關制品。因此，分離、鑒定、篩選中國雞群感染流行的FAdV4致病毒株，經雞胚絨毛尿囊膜、雞胚肝細胞（CEL）或傳代細胞培養，得到一株優良的、抗原性優異的疫苗毒株，制備相應的疫苗，將對預防Ⅰ群4型禽腺病毒感染及其他亞型禽腺病毒的感染具有重要的現實意義和經濟價值。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株及其應用，從而彌補現有技術中的不足。本專利技術的目的是以下述方式實現的：一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心，保藏單位簡稱：CCTCC，保藏單位地址：中國.武漢.武漢大學，其保藏編號為：CCTCCNO：V201662，分類命名為：Ⅰ群4型禽腺病毒WZ株，保藏日期為：2016年12月14日。一種包含權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株的病毒液。如上述的包含權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株的病毒液的制備方法，包括以下步驟：將禽腺病毒Ⅰ群4型病毒毒株WZ株雞胚傳代后的種毒接種SPF雞，收獲感染死亡雞的肝臟組織，研磨、凍融、離心，得到的上清液即為病毒液；或接種雞胚肝細胞進行培養，凍融后收獲細胞上清液即為病毒液。如上述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株在制備Ⅰ群4型禽腺病毒疫苗中的應用。一種禽腺病毒Ⅰ群4型病毒疫苗，所述疫苗的活性成分包括滅活的權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒毒株。如上述的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒疫苗制備方法，將權利要求2所述的病毒液用β丙內酯滅活，再與吐溫-80混合均勻，得到水相；將注射用白油和吐溫-80混合均勻，得到油相，水相與油相混合乳化，水相與油相的混合比例為1:3，制成Ⅰ群4型禽腺病毒滅活疫苗。如上述的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒疫苗，所述疫苗為禽腺病毒滅活疫苗、雞新城疫-禽腺病毒二聯滅活疫苗、雞新城疫-傳染性支氣管炎-禽腺病毒病三聯滅活疫苗、雞新城疫-禽流感-禽腺病毒病三聯滅活疫苗或雞新城疫-傳染性支氣管炎-減蛋綜合征-禽腺病毒病四聯滅活疫苗。如上述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株在制備禽腺病毒Ⅰ群4型病毒診斷用瓊擴抗原試劑或HI抗原試劑中的應用。如上述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株在制備禽腺病毒Ⅰ群4型病毒診斷用陽性血清試劑中的應用。如上述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株在制備病毒治療用卵黃抗體、抗血清中的應用。相對于現有技術，本專利技術的有益效果是：本專利技術提供的一種Ⅰ群4型禽腺病毒毒株WZ株具有良好的特異性和免疫原性，免疫雛雞能產生對Ⅰ群4型禽腺病毒特異性的中和抗體，一次免疫后7-14天產生抗體，在21天血清瓊擴抗體水平達到1:16，49天血清瓊擴抗體水平達到1:64。利用本專利技術提供的Ⅰ群4型禽腺病毒毒株制備的疫苗免疫后，對于Ⅰ群4型禽腺病毒毒株WZ株的攻毒保護率達到90%-100%。本專利技術作為制造效果良好的疫苗毒株，可預防禽包涵體肝炎和心包積液綜合征，也可用于病毒的鑒定和流行病學的調查。附圖說明圖1是FAdV4WZ株間接凝集人O型血紅細胞結果，其中1為FAdV4WZ株病毒雞胚液；對為空白雞胚液。圖2是瓊脂免疫擴散試驗（AGID）的結果，其中I：FadV4WZ株細胞培養液；1：FAdV4WZ株制備的標準陽性血清；2：Ⅰ群4型標準株AV211制備的陽性血清；3：陰性SPF雞的血清；4：PBS液；5：雙蒸餾水；6：抗EDS-76HE02株血清。圖3是分離株DNA聚合酶基因片段PCR擴增結果，其中M：DL2000Mark，1：病毒雞胚肝細胞培養液。圖4是Ⅰ群4型禽腺病毒分離毒株WZ株聚合酶片段的核苷酸遺傳進化樹分析圖。圖5是SPF雞胚肝細胞（40×）。圖6是感染FAdV4WZ株的雞胚肝細胞（40×）。圖7是FAdV4WZ株感染死亡SPF雞的病理變化：肝臟色淺變黃。圖8是FAdV4WZ株感染死亡SPF雞的病理變化：心包積液。圖9是FAdV4WZ株感染死亡SPF雞的病理變化：腎臟腫大，腎葉分界清晰。圖10是FAdV4WZ株感染死亡SPF雞的病理變化：心肌出血。圖11是FAdV4WZ株感染死亡SPF雞的病理變化：腺胃乳頭出血。圖12是FAdV4WZ株感染死亡SPF雞的病理變化：肺臟出血。具體實施方式為了使本專利技術更容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本專利技術。這些實例僅用于說明本專利技術，但不用來限制本專利技術的范圍。一種Ⅰ群4型禽腺病毒毒株，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心，保藏單位簡稱：CCTCC，保藏單位地址：中國.武漢.武漢大學，其保藏編號為：CCTCCNO：V201662，分類命名為：Ⅰ群4型禽腺病毒WZ株，保藏日期為：2016年12月14日。一種包含權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株的病毒液。如上述的包含權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株的病毒本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株，其保藏編號為：CCTCC?NO：V201662，分類命名為：Ⅰ群4型禽腺病毒WZ株，保藏日期為：2016年12月14日。

【技術特征摘要】
1.一種禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株，其保藏編號為：CCTCCNO：V201662，分類命名為：Ⅰ群4型禽腺病毒WZ株，保藏日期為：2016年12月14日。2.一種包含權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株的病毒液。3.如權利要求2所述的包含權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株的病毒液的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：將禽腺病毒Ⅰ群4型病毒毒株WZ株雞胚傳代后的種毒接種SPF雞，收獲感染死亡雞的肝臟組織，研磨、凍融、離心，得到的上清液即為病毒液；或接種雞胚肝細胞進行培養，凍融后收獲細胞上清液即為病毒液。4.如權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型毒株WZ株在制備Ⅰ群4型禽腺病毒疫苗中的應用。5.一種禽腺病毒Ⅰ群4型病毒疫苗，其特征在于：所述疫苗的活性成分包括滅活的權利要求1所述的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒毒株WZ株。6.如權利要求5所述的禽腺病毒Ⅰ群4型病毒疫苗制備方法，其特征...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李新生，黃宗梅，崔保安，周云飛，周薇帆，趙玉杰，王潔瓊，高文明，張劍，劉琳，陳盼盼，王莉，
申請(專利權)人：河南農業大學，
類型：發明
國別省市：河南,41