本發明專利技術涉及蛋白質工程、基因工程和生物醫藥領域，具體涉及一種基于DC細胞的乙肝病毒T表位肽。本發明專利技術采用的技術方案是：一種基于DC細胞的乙肝病毒T表位肽，其特征在于：所述基于DC細胞的乙肝病毒T表位肽由9個氨基酸殘基組成，其氨基酸序列為：QLFHLCLII。本發明專利技術以堿性氨基酸為骨架，采取固相合成技術，同步在該骨架上同時合成相同的預設氨基酸序列，并以乙肝病毒為設計靶標，并采用合成技術生產基于DC細胞的乙肝病毒特異性表位肽；通過DC細胞體外負載該表位肽，并將成熟的DC細胞輸注特定人群體內，特異性的產生針對乙肝病毒感染所帶來的危害，尤其是針對慢性乙肝的所產生的清除體內病毒和改善臨床癥狀的作用。
【技術實現步驟摘要】
—種基于00細胞的乙肝病毒了表位肽本申請是申請日為2011年3月25日、申請號為201110073862.3、專利技術名稱為《一種基于IX:細胞的乙肝病毒I表位肽》的分案申請。
本專利技術涉及蛋白質工程、基因工程和生物醫藥領域，具體涉及一種基于IX:細胞的乙肝病毒7表位肽。
技術介紹
全世界有超過4億人感染乙型肝炎病毒，每年有1百萬人死于感染綜合癥，包括肝硬化、肝細胞癌或者其他并發癥。現有技術大多采用中藥或者西藥治療乙肝，雖然有一定療效，但是不能根治乙肝或其他并發癥，尤其不能有效阻斷因乙型肝炎病毒感染所造成的肝臟纖維化和硬化、阻斷乙肝病毒通過胎盤傳染給胎兒、阻斷乙肝病毒通過乳汁傳染給母乳喂養的新生兒。 肽合成技術目前在國內外有一些機構都有開展，組織相容性復合體(冊10 I類限制性細胞毒性I細胞(011)在控制胞內病原體和腫瘤細胞生長中起極為重要的作用。通過蛋白質基本性質分析，疏水性分析，跨膜區預測，信號肽預測，亞細胞定位預測，抗原性位點預測，可以對基因編碼蛋白的性質作出初步判斷和預測。尤其通過疏水性分析和跨膜區預測可以預測基因是否為膜蛋白。將該212個氨基酸與從數據庫中的蛋白片段進行81^1結果顯示100條肽與目標肽有同源性，其中16條同源性100%，84條為99%，而這100條肽均為的即600；1^6八0；^6蛋白。利用13611011軟件對該212個氛基酸的分析，可以得到該蛋白質片段的一般生物學特性。 細胞免疫反應在免疫應答過程中起著關鍵的作用。當外源性抗原被抗原呈遞細胞捕獲后，蛋白質抗原在內吞系統被降解成多肽片段，其中的免疫原性多肽即I細胞表位與冊扣I類分子結合，被轉運至八?表面供I細胞受體識別，從而激發細胞免疫應答，發揮免疫調節作用，對其氨基酸序列特征的了解將有助于亞單位疫苗分子的設計與研制以及增加對免疫系統的更進一步理解。因此，對I細胞表位的預測以及在此基礎上進行結構改造具有重要的理論價值和實際意義。
技術實現思路
為了克服現有技術的缺陷，本專利技術的目的是提供一種能有效治療乙肝及其各種并發癥，阻斷阻斷乙肝病毒通過胎盤傳染給胎兒、阻斷乙肝病毒通過乳汁傳染給母乳喂養的新生兒的一種基于IX:細胞的乙肝病毒I表位肽及其類似物。 為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案為:一種基于IX:細胞的乙肝病毒I表位肽，其特征在于:所述基于IX:細胞的乙肝病毒丁表位肽由9個氨基酸殘基組成，其氨基酸序列為:亂？見111 (谷氨酰胺-亮氨酸-苯丙氨酸-組氨酸-亮氨酸-半胱氨酸-亮氨酸-異亮氨酸-異亮氨酸選擇乙型肝炎病毒核心蛋白作為目的抗原。 相對于現有技術，本專利技術以堿性氨基酸為骨架，采取固相合成技術，同步在該骨架上同時合成相同的預設氨基酸序列，并以乙肝病毒為設計靶標，并采用合成技術生產基于00細胞的乙肝病毒特異性表位肽；通過IX:細胞體外負載該表位肽，并將成熟的IX:細胞輸注特定人群體內，特異性的產生針對乙肝病毒感染所帶來的危害，尤其是針對慢性乙肝的所產生的清除體內病毒和改善臨床癥狀的作用；阻斷因乙型肝炎病毒感染所造成的肝臟纖維化和硬化；阻斷乙肝病毒通過胎盤傳染給胎兒；阻斷乙肝病毒通過乳汁傳染給母乳喂養的新生兒。 【附圖說明】 圖1是表位肽的質譜圖，圖2是九肽中各位點氨基酸殘基結合八2分子優先順序，圖3是九肽中與結合或不結合有關的氨基酸殘基，圖4是多項式系數表八2),圖5是患者數據表，圖6是患者數據表，圖7是慢性乙肝患者單核細胞的表型，圖8是培養天數，圖9是肽沖擊后樹突狀細胞形態的改變(八-10，6為陰性對照，圖10是患者治療效果表，圖11是治療48周血漿耶乂 0嫩的水平，圖12是治療48周血漿八II的水平。 【具體實施方式】 本專利技術所述的基于IX:細胞的乙肝病毒了表位肽，其氨基酸序列為:亂冊1X111，分子量為1150。 表位肽采用標準方案進行合成，經純化后，其純度大于98%，參見圖1，質譜分析并證實其分子量符合理論值。 本專利技術基于IX:細胞的乙肝病毒I表位肽的合成方法為:一、表位肽的設計和篩選1、乙型肝炎病毒抗原乙型病毒抗原的核心抗原為乙肝病毒在體內引起反應的主要抗原，核苷酸序列為639恥，編碼蛋白為 212 氨基酸， 8081^2800.0611613811^^1)0448622]；來源于中國人群 861101:7？6 8,血清學分型―舊。.2、同源性分析將該212個氨基酸與從:81數據庫中的蛋白片段進行81%七，以確定該段蛋白質的特異性。 3、耶乂核心抗原的一般特性預測 應用軟件〔IX ？^01:6111 101-^136110113版本和31即511 ？3? 0軟件對耶乂核心抗原的編碼蛋白質進行預測，包括疏水性、親水性、抗原性、跨膜結構域、等電點及信號肽潛在切割位點。 4、利用3冊?￡11?進行表位初步預測5、？即02？？方案預測6、基序法(1)不同的冊扣1類對所結合的肽的組成有不同的要求，但其中起主要作用進而對肽鏈與冊扣1類分子的結合有重要影響的是肽鏈的兩個主要錨點殘基，他們在多肽與冊扣1類分子的高親和力結合中是必需的。對于八2，九肽的兩個錨點分別位于肽鏈的第2位氨基酸殘基和羧基末端(第9位氨基酸殘基):且第2位氨基酸殘基應是亮氨酸(1)或蛋氨酸(1),第9位氨基酸殘基應是纈氨酸…)、異亮胺酸(1)或匕參見圖2，符合這些條件的多肽與八-八2限制性表位的可能性較大。 (2) 二級錨點殘基的作用除了兩個主要錨點殘基的必需因素外，多肽鏈中的其他氨基酸殘基對多肽與八2分子的高或中等親和力結合也有不可忽視的影響。參見圖3，在九肽其他位置上，不同氨基酸殘基對多肽與八2分子的結合有著不同的影響，有的氨基酸殘基有利于結合，而有的則不利于結合。理想的與八2結合的表位(即有高的或中等親和力)應不包含不利于結合的氨基酸殘基，或有利于結合的殘基多于不利于結合的殘基。 7、多項式方案預測表位肽多項式方案是指當某殘基8出現在某肽的第I位時，不考慮其他肽序列的情況下，該殘基對于整個肽與冊扣1類分子的結合自由能提供了一常量虹，用在第I位為殘基I？的大量多肽的1匕。的負1000值的平均值來估計此常量。1匕。被定義為待測肽將對照肽復合物中50%的對照肽置換下來的濃度。20種氨基酸殘基分別在1-9位的值列于圖4給定某一九肽，將其所有氨基酸殘基對應的虹值相加，選擇分值大于選定閾值的抗原肽為可能的后選肽。參見圖4，本專利技術選擇22。 二、表位肽的鑒定、修飾及合成 從軟件預測的5條表位肽中尋找到具有較高的抗原結合性能，并將其用8細胞表位，1?表位和棕櫚酰基團修飾，？11100方案合成，為進一步探討外源性小分子表位肽進入細胞激發冊扣1類反應奠定基礎。多肽的固相化學合成主要有兩種策略:8%固相合成策略和固相合成策略。在80(3法中氨基酸的0-氨基的保護基團選擇弱酸敏感基團，側鏈活性基團的保護基團選用強酸敏感基團。1?%法中氨基酸的0 -氨基的保護基團選擇弱堿敏感基團，側鏈活性基的保護基團選用弱酸敏感基團。 1、抗原肽的法固相合成與標記(按照抗原肽的序列從羧端向氨端依次合成 ( 1)第一個氨基酸與樹脂的連接:將2-01101*01:1*11:71 01101*1(16 068111樹本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種基于DC細胞的乙肝病毒T表位肽，其特征在于：所述基于DC細胞的乙肝病毒T表位肽由9個氨基酸殘基組成，其氨基酸序列為：QLFHLCLII。
【技術特征摘要】
1.一種基于DC細胞的乙肝病毒T表位肽，其特征在于:所述基于DC細胞的乙...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅進，閆小君，
申請(專利權)人：江蘇安泰生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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