一種三七皂苷類成分的分析方法技術

本發明專利技術提供了一種三七皂苷類成分的分析方法，包括三七皂苷的含量測定和指紋圖譜測定，具體包括供試品溶液的制備、對照品溶液的制備以及采用超高效液相色譜測定復方丹參滴丸中三七皂苷類成分的含量和指紋圖譜。本發明專利技術采用相同的色譜條件，可以同時測定三七皂苷類成分的含量與指紋圖譜，具有很好的線性、重復性、穩定性和回收率，有助于更加全面控制復方丹參滴丸的質量。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術提供了，包括三七皂苷的含量測定和指紋圖譜測定，具體包括供試品溶液的制備、對照品溶液的制備以及采用超高效液相色譜測定復方丹參滴丸中三七皂苷類成分的含量和指紋圖譜。本專利技術采用相同的色譜條件，可以同時測定三七皂苷類成分的含量與指紋圖譜，具有很好的線性、重復性、穩定性和回收率，有助于更加全面控制復方丹參滴丸的質量。【專利說明】
本專利技術屬于中藥領域，具體涉及一種三七皂苷含量測定及指紋圖譜分析的檢測方法。
技術介紹
復方丹參滴丸是由丹參、三七和冰片制成的滴丸劑，在臨床上廣泛用于冠心病、心絞痛的預防、治療、急救，現已成為國內心血管市場上的主導品牌之一。復方丹參滴丸的主要成分為丹參素(danshensu, Da)、原兒茶醒(protocatechuic aldehyde, Pra)和丹酹酸B(salvianolic acid B, Sal B)。目前藥典中復方丹參滴丸的含量測定方法為:以丹參素鈉為對照品，采用高效液相色譜法測定丹參素的含量，具體方法為:(1)對照品溶液的制備:取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.16mg (相當于丹參素0.14mg)的溶液，即得；(2)供試品溶液的制備:取復方丹參滴丸5丸,置IOml量瓶中，加甲醇適量適量,超聲處理2小時,放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取濾液即得；(3)分別精密吸取對照品溶液5 μ I與供試品溶液5-10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。中藥指紋圖譜是目前能夠為國內外廣泛接受的全面評價中藥質量模式的一種方法。美國FDA在植物藥制品指導原則中允許申報者提供產品的色譜指紋圖譜資料，德國藥用植物學會、英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學會也都把指紋圖譜作為質量控制標準的內容之一。國內學者謝培山也認為，中藥質量需綜合評價，指紋圖譜分析是對中藥及制劑進行綜合宏觀分析的可行手段之一。但有關于復方丹參滴丸中的三七皂苷類成分的指紋圖譜方面的研究在國內外尚未見報道。復方丹參滴丸上市十余年中逐步建立了完善的工藝質量控制體系，目前正在以藥品的形式進行FDA申報研究。但是，復方丹參滴丸組分中含量測定組分仍然較低，提升產品工藝質量控制水平，需要針對其中更多的中藥化學成分進行深入研究，從而更加準確地把握產品質量，降低用藥風險，同時為國際注冊提供支持。復方丹參滴丸中，臣藥三七的主要活性成分是三七皂苷和人參皂苷，而三七皂苷是三七區別于人參的特有活性成分。但是目前對于復方丹參滴丸中的三七皂苷類成分還沒有有效的專屬性的分析方法。為了更好地控制復方丹參滴丸的質量，需要，包括三七皂苷類成分的含量測定和指紋圖譜測定方法，尤其是對三七皂苷R1、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的指紋圖譜鑒別方法及定量方法。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供，包括三七皂苷的含量測定和指紋圖譜測定。根據本專利技術所述的三七皂苷類成分的分析方法，包括以下步驟:(I)供試品溶液的制備:取復方丹參滴丸，精密稱定，加入氨水溶液，超聲；Sods柱，依次用水、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，過濾，即得；(2)對照品溶液的制備:分別精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，用甲醇溶解并稀釋，即得；(3)三七皂苷的含量測定:取所述供試品溶液和對照品溶液，采用超高效液相色譜進行分析，測定三七皂苷的含量；(4)三七皂苷的指紋圖譜測定:取所述供試品溶液，采用超高效液相色譜進行分析，得到指紋圖譜。 根據本專利技術的實施方式之一，所述供試品溶液的制備為:取復方丹參滴丸10-30丸，精密稱定后置于15ml刻度管中，加入0.5%-10%的氨水溶液l_10ml，超聲至溶解；過1.0cm內徑的ODS小柱，用50ml水洗后用100%甲醇洗脫至IOml容量瓶并定容，搖勻過0.22 μ m有機濾膜，即得。根據本專利技術的另一實施方式，所述對照品溶液的制備為:分別精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，用甲醇溶解并稀釋，制成含三七皂苷R1濃度為0.01-0.lmg/ml、人參皂苷Rg1濃度為0.1-0.5mg/ml、人參皂苷Re濃度為0.01-0.06mg/ml、人參皂苷Rb1濃度為0.1-0.5mg/ml的混合對照品溶液。根據本專利技術的再一實施方式，所述超高效液相色譜的色譜條件為:色譜柱為C18色譜柱，流動相A相為乙腈或甲醇，流動相B相為水，梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為200_210nm。優選的，所述流動相A相為乙腈，所述梯度洗脫的梯度為:【權利要求】1.，包括三七皂苷的含量測定和指紋圖譜測定，其特征在于，包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:取復方丹參滴丸，精密稱定，加入氨水溶液，超聲；SODS柱，依次用水、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，過濾，即得； (2)對照品溶液的制備:分別精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，用甲醇溶解并稀釋，即得； (3)三七皂苷的含量測定:取所述供試品溶液和對照品溶液，采用超高效液相色譜進行分析，測定三七皂苷的含量； (4)三七皂苷的指紋圖譜測定:取所述供試品溶液，采用超高效液相色譜進行分析，得到指紋圖譜。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述供試品溶液的制備為:取復方丹參滴丸10-30丸，精密稱定后置于15ml刻度管中，加入0.5%-10%的氨水溶液1-1Oml，超聲至溶解；過1.0cm內徑的ODS小柱，用50ml水洗后用100%甲醇洗脫至IOml容量瓶并定容，搖勻過0.22 μ m有機濾膜，即得。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對照品溶液的制備為:分別精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，用甲醇溶解并稀釋，制成含三七皂苷R1濃度為0.01-0.lmg/ml、人參皂苷Rg1濃度為0.1-0.511^/1111、人參皂苷1^濃度為0.01-0.06mg/ml、人參皂苷 Rb1 濃度為 0.1-0.5mg/ml 的混合對照品溶液。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色譜的色譜條件為:色譜柱為C18色譜柱，流動相A相為乙腈或甲醇，流動相B相為水，梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為 200-210nm。5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述流動相A相為乙腈，所述梯度洗脫的梯度為: 6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述檢測波長為203nm。7.—種通過權利要求1-6任一項所獲得的三七皂苷的指紋圖譜。8.根據權利要求7所述的指紋圖譜，其特征在于，所述指紋圖譜是由8個共有指紋峰構成的。9.根據權利要求7所述的指紋圖譜，其特征在于，所述指紋圖譜是由5個共有指紋峰構成的。10.根據權利要求9所述的指紋圖譜，其特征在于，所述5個共有峰相對于參比峰的相對保留時間和相對峰面積分別為: I號峰,相對保留時間為0.77min，相對峰面積為0.19 ； S號峰,相對保留時間為1.0Omin，相對峰面積I ; 2號峰,相對保留時間為1.04min，相對峰面積0.11 ； 3號峰,相對保留時間為1本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種三七皂苷類成分的分析方法，包括三七皂苷的含量測定和指紋圖譜測定，其特征在于，包括以下步驟：（1）供試品溶液的制備：取復方丹參滴丸，精密稱定，加入氨水溶液，超聲；過ODS柱，依次用水、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，過濾，即得；（2）對照品溶液的制備：分別精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，用甲醇溶解并稀釋，即得；（3）三七皂苷的含量測定：取所述供試品溶液和對照品溶液，采用超高效液相色譜進行分析，測定三七皂苷的含量；（4）三七皂苷的指紋圖譜測定：取所述供試品溶液，采用超高效液相色譜進行分析，得到指紋圖譜。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：闞紅玉，葛丹丹，侯春蓮，邊寧，孫玉俠，曹鳳蘭，
申請(專利權)人：天士力制藥集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：天津;12