一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法技術

本發明專利技術公開了一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，試樣經提取液提取后低溫高速離心，上清液經液相色譜分離、二極管陣列檢測器檢測，保留時間定性、外標法定量。步驟一：制備標準工作溶液、加標用標準使用液和模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油；步驟二：采用高效液相色譜對步驟一的三種溶液分別進行液相色譜測定；以標準工作溶液中葉綠素銅鈉的濃度x為橫坐標，以對應測得的峰面積y為縱坐標，繪制標準工作溶液回歸曲線，根據曲線得到的線性方程y=ax+b，計算出回歸曲線的斜率a和截距b；步驟三：根據標準曲線方程，計算橄欖油葉綠素銅鈉濃度。本發明專利技術的方法采用通用型的液相色譜柱和紫外檢測器對葉綠素銅鈉進行高效液相色譜測定，并能排除其他物質測定的干擾。本發明專利技術的方法可以準確測量出橄欖油中葉綠素銅鈉含量，定量準確可靠，且重現性良好。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了，試樣經提取液提取后低溫高速離心，上清液經液相色譜分離、二極管陣列檢測器檢測，保留時間定性、外標法定量。步驟一：制備標準工作溶液、加標用標準使用液和模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油；步驟二：采用高效液相色譜對步驟一的三種溶液分別進行液相色譜測定；以標準工作溶液中葉綠素銅鈉的濃度x為橫坐標，以對應測得的峰面積y為縱坐標，繪制標準工作溶液回歸曲線，根據曲線得到的線性方程y=ax+b，計算出回歸曲線的斜率a和截距b；步驟三：根據標準曲線方程，計算橄欖油葉綠素銅鈉濃度。本專利技術的方法采用通用型的液相色譜柱和紫外檢測器對葉綠素銅鈉進行高效液相色譜測定，并能排除其他物質測定的干擾。本專利技術的方法可以準確測量出橄欖油中葉綠素銅鈉含量，定量準確可靠，且重現性良好。【專利說明】
本專利技術涉及一種測定橄欖油中葉綠素銅鈉的方法。
技術介紹
橄欖油以其獨特理化指標與保健功能，逐步成為新世紀理想的食用油，富含豐富的單不飽和脂肪酸，即油酸及亞油酸、亞麻酸,還有維生素A、維生素B、維生素D、維生素E、維生素K及抗氧化物等，被認為是迄今所發現的油脂中最適合人體營養的油。美國農業部2013年9月發布的報告顯示，2012年10月至2013年9月，美國市場葵花籽油的平均價格是每噸約合人民幣9000元；大豆油每噸的平均價格是約合人民幣6500元；而正品特級初榨橄欖油的價格在每噸3.2萬-3.6萬元人民幣。即便以成本較高的葵花籽油計算，每噸食用油的成本也只有正品特級初榨橄欖油的1/3左右。巨大的利益誘惑下，有些不法商家會在葵花籽油和大豆油等油品中加葉綠素銅鈉冒充橄欖油銷售。由于市場上銷售的很多未充分精煉的初榨橄欖油含有部分葉綠素，看上去都是黃綠色，導致人們以為黃綠色的橄欖油才是純正的橄欖油，這也成了人們選擇橄欖油的一個重要依據。不法商家就利用消費者的這一心理，在大豆油、葵花籽油等低廉油加葉綠素銅鈉冒充橄欖油。2013年，臺灣的味全橄欖油事件就是一起典型的橄欖油摻假事件，引起社會的廣泛重視。葉綠素銅鈉，是葉綠素的一類衍生物銅葉綠素的鈉鹽，在食品工業中常做著色劑使用，也就是我們通常所說的色素，常用的還有葉綠素銅鉀。葉綠素是地球上分布最廣的天然色素，主要存在于綠色植物中。由于葉綠素極不穩定，導致葉綠素在食品工業中難以得到應用。故在食品工業中常采用葉綠素銅鈉作為著色劑廣泛使用。除此之外，葉綠素銅鈉還被人們應用在醫藥領域。在我國食品添加劑標準GB2760-2011及GB26406-2011中，葉綠素銅鈉可用于冷凍飲品、蔬菜罐頭、熟制豆類、加工堅果、糖果、烘烤食品、果蔬汁以及配制酒食品中，最大使用量一般不得超過0.5克/千克。但是，葉綠素銅鈉鹽在食品中的應用范圍并不包括食用油，因為人類每天都會攝入大量的食用油，尤其是食用油在高溫烹調過程中會釋出銅及氧化，將會導致人體肝腎受損，危害健康。人體吸收過量，會傷肝腎或造成貧血，長期食用會危害健康。聯合國糧農組織和世界衛生組織下的食品添加劑聯合專家委員會(JECFA)對葉綠素銅鈉進行安全評估認為，葉綠素銅鈉的半數致死量(LD)50>10000毫克/千克(小鼠經口)，每日允許攝入量(ADI)為0-15毫克/千克。因此，葉綠素銅鈉用于食用油中，無論是否有害，都是違反了食品安全國家標準的規定(GB2760-2011)。2013年臺灣橄欖油摻假事件使得葉綠素銅鈉以及橄欖油摻假問題成為公眾高度關注的領域。目前尚無關于葉綠素銅鈉含量的檢測方法及標準，因此迫切需要制定橄欖油中葉綠素銅鈉的標準檢測方法來填補國內外空白，以加強市場上橄欖油的檢驗監管。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供所述的，其特征在于:。本專利技術所述的的技術問題可通過以下步驟得以解決: 1)制備葉綠素銅鈉標準工作溶液、加標用標準使用液以及模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油并提取其中的葉綠素銅鈉，制備葉綠素銅鈉提取液； 2)采用高效液相色譜對I)中的3種溶液進行檢測，采用保留時間定性、峰面積定量； 3)根據標準曲線方程，對橄欖油中葉綠素銅鈉的含量進行準確定量分析。所述的一種用高效液相色譜方法對橄欖油中葉綠素銅鈉進行定性、定量分析方法，包括以下步驟: 步驟一:制備標準工作溶液、加標用標準使用液和模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油并提取其中的葉綠素銅鈉，制備葉綠素銅鈉提取液；所述標準工作溶液為由葉綠素銅鈉配備而成的標準工作溶液和橄欖油標準工作溶液；所述模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油由空白橄欖油樣品添加加標用葉綠素銅鈉使用液獲得；所述空白橄欖油樣品為未受葉綠素銅鈉污染的橄欖油；步驟二:采用高效液相色譜對步驟一的溶液分別進行測定；以標準工作溶液中葉綠素銅鈉的濃度X為橫坐標，以對應的測得的峰面積y為縱坐標，繪制標準工作溶液回歸曲線，根據曲線得到的線性方程y^aA+bi和y2=a2x2+b2，分別計算出回歸曲線的斜率和截距；步驟三:根據公式X= (y-b) /a，計算待測橄欖油中葉綠素銅鈉的濃度；其中y為測得的葉綠素銅鈉(a和b)的峰面積之和。所述步驟一中，模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油和空白試液均平行制備兩份，然后進行步驟二和步驟三，若兩次獨立測試結果的絕對差值不超過其算術平均值的20%，則測試準確。所述步驟一中，標準工作溶液的制備方法具體為:準備葉綠素銅鈉標準儲備溶液:準確稱取葉綠素銅鈉的標準品0.lg，加入優級純的亞硫酸氫鈉2g，加入15mL超純水溶解混勻后，分別加入50mL甲醇、20mL丙酮，最后用甲醇定容至刻度。該儲備液在4 °〇下密封避光儲存。所述步驟一中，模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油的制備方法為:(a)由空白橄欖油添加入加標用葉綠素銅鈉標準使用液作為模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油；(b)加標用葉綠素銅鈉制備:根據葉綠素銅鈉易溶于水不溶于油的特點以及四氫呋喃既溶于甲醇又溶于油的特點，固體標準品用盡可能少的甲醇溶解，再用四氫呋喃定容，即為樣品加標用標準溶液。(c)提取:取2g油樣于15mL離心管中，加入混合提取液5mL，充分混勻，渦旋振提5min ;在40C、10000轉/min離心5min，取ImL的上清液做為測試液，進HPLC分析測試。所述的葉綠素銅鈉含量的測定方法，其色譜條件為: 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱或性能相當者；柱溫:20-40 0C ； 檢測波長:400-410 nm ； 流動相:有機相和醋酸鹽緩沖液組成； 所述流動相中醋酸鹽緩沖液的濃度為0.1-0.2mol/L, pH為7.0-8.0，有機相為甲醇或 丙酮。所述步驟一中，標準工作溶液的制備方法具體為:準備葉綠素銅鈉標準儲備溶液:準確稱取葉綠素銅鈉的標準品并利用合適的溶劑配置標準溶液，并在溶液中加入適量保護劑，避光、4°c保存。 有益效果 采用上述技術方案后，本專利技術具有積極的效果: 由于本專利技術是采用了保留時間定性、峰面積定量的色譜分離分析技術，從而保證了檢測結果的準確性。本專利技術的新穎之處在于專利技術了橄欖油中葉綠素銅鈉的液相色譜檢測方法，保持檢測技術直觀、快速、方便、成熟、廉價等優點。本專利技術的方法采用普通高效液相色譜，儀器成本低，易于推廣使用，且操作簡單。本專利技術的方法可以廣泛用于葉綠素銅鈉成分的鑒定，在食品安全檢測領域都有廣泛的應用前景。本專利技術目的在于提供一種橄欖油中摻入本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法,其特征在于，包括以下步驟：1）制備葉綠素銅鈉標準工作溶液、加標用標準使用液以及模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油并提取其中的葉綠素銅鈉，制備葉綠素銅鈉提取液；2）采用高效液相色譜對待測溶液進行檢測，采用保留時間定性、峰面積定量；3）根據標準曲線方程，對橄欖油中葉綠素銅鈉的含量進行準確定量分析。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：婁婷婷，葛寶坤，陳其勇，章驊，趙孔祥，
申請(專利權)人：天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心，
類型：發明
國別省市：天津;12