本發明專利技術涉及一種雙酶分步水解制備甜高粱籽蛋白ACE抑制肽，其制備方法為：將甜高粱籽粉碎后配制成懸浮液，利用淀粉酶輔助提取甜高粱籽蛋白，然后將甜高粱籽蛋白配成溶液，調其pH后依次分別用α-胰凝乳蛋白酶和中性蛋白酶進行酶解，酶解產物經濃縮和噴霧干燥后，即得到粉末狀甜高粱籽蛋白ACE抑制肽產品。本發明專利技術具有生產時間短、操作方便、原料來源廣泛及價格低廉、甜高粱籽蛋白ACE抑制肽抑制活性高等優點，產品符合功能食品要求。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物工程領域，可用于功能性食品添加劑的開發，具體涉及一種雙酶分步水解制備甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法及其產品和應用。
技術介紹
甜高粱是高粱的一個變種，它起源于非洲，具有抗旱、耐澇、耐鹽堿、耐瘠薄等特性，因此在我國各地都有種植。中國甜高粱分布較廣泛，主要分布在西北、華北、東北、東南、華東和華中地區，從云南到黑龍江，從上海到新疆都有栽培。甜高粱秸桿含有大量糖類物質，主要用于制備生物能源一酒精，該生產過程中的副產物甜高粱穗沒有得到有效利用(專利“用甜高粱秸桿制取乙醇的方法，公開號CN101024848A”和“一種用甜高粱秸桿制備乙醇的方法，公開號CN101343647A”)。甜高粱穗中的籽粒含有較高的蛋白質，蛋白質含量約為13% (w/w)，必需氨基酸在總氨基酸含量中約占41% (w/w)，蛋白營養價值較高，另外，甜高粱籽蛋白中脯氨酸、芳香族氨基酸和疏水性氨基酸含量高，分別占到總氨基酸約4.4% (w/w),9.0% (w/w)和39.2% (w/w)左右，根據ACE抑制肽的構效關系，這些氨基酸在ACE抑制肽活性方面起到重要作用。由此可知，甜高粱籽蛋白能被用于生產高活性ACE抑制肽。ACE是血管緊張素轉化酶，ACE抑制肽是一種生物活性肽，能夠調節高血壓病人的血壓，且無毒副作用，是近年來天然藥物研究領域的熱點之一，現已有大量的食源ACE抑制肽被發現，如:草魚蛋白ACE抑制肽(Chen J, Wang Y，Zhong Q, et al.Purification andcharacterization of a novel angiotensin-1 converting enzyme (ACE) inhibitorypeptide derived from enzymatic hydrolysate of grass carp protein.Peptides,2012，33(1): 52-58.)、魷魚明膠 ACE 抑制肽(Alemdn A, Gimenez B, Perez-Santin E,et al.Contribution of Leu and Hyp residues to antioxidant and ACE-1nhibitoryactivities of peptide sequences isolated from squid gelatin hydrolysate.Food Chemistry, 2011, 125(2): 334-341.)和乳清蛋白 ACE 抑制肽(Pan D, Cao J, GuoH,et al.Studies on purification and the molecular mechanism of a novel ACEinhibitory peptide from whey protein hydrolysate.Food Chemistry, 2012,130(1): 121-126.)等。而利用甜高粱籽蛋白制備ACE抑制肽的鮮見報道，特別是利用雙酶分步水解制備甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的研究未見報道。
技術實現思路
專利技術目的:本專利技術的目的是提供一種雙酶分步水解制備甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法，本專利技術能夠克服單酶水解位點不足，混合酶水解相互干擾以及ACE抑制肽不能有效釋放等缺點，而該方法國內外尚無報道。 技術方案:為了實現上述目的，本專利技術的一種雙酶分步水解制備甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于包括以下步驟:1)將甜高粱籽進行粉碎，然后用蒸餾水配制成甜高粱籽粉的質量百分數為5% 10%的懸浮液； 2)將5000 10000U/g淀粉酶加入懸浮液中50°C 70°C酶解3h 4h，酶解結束后，將懸浮液的PH調至8.0 9.5，攪拌30min后離心，取上清液，調其pH至4.0 4.5，靜置30min后離心，收集沉淀，將沉淀溶于蒸餾水中，調pH至中性后經真空濃縮裝置濃縮和噴霧干燥得到甜高粱籽蛋白粉； 3)將甜高粱籽蛋白粉配成質量百分數為1% 4%的溶液，調pH至7.0 8.0，加入2000 4000U/ga -胰凝乳蛋白酶，在40°C 50°C下第一次酶解20 30min，第一次酶解結束后沸水浴滅酶得到混合液，將混合液的PH調至6.0 7.0，加入2000 4000U/g中性蛋白酶，在50°C 60°C下第二次酶解40 60min，第二次酶解結束后沸水浴滅酶，離心收集上清液，上清液經真空濃縮裝置濃縮至固型物的質量百分數為5%-15%，用噴霧干燥后，得到粉末狀甜高粱籽蛋白ACE抑 制肽。所述步驟I)中甜高粱籽粉的質量百分數為8%。所述步驟2)中將7500U/g淀粉酶加入懸浮液中60°C酶解3.5h，酶解結束后，將懸浮液的PH調至9.0，攪拌30min后離心，取上清液，調其pH至4.2，靜置30min后離心，收集沉淀，將沉淀溶于蒸餾水中，調PH至中性后經真空濃縮裝置濃縮和噴霧干燥得到甜高粱籽蛋白粉。所述步驟3)中取20g甜高粱籽蛋白粉，質量百分數為2%的溶液，調pH至7.5，加入3000U/ga -胰凝乳蛋白酶在45°C下第一次酶解25min，第一次酶解結束后沸水浴滅酶得到混合液，將混合液的pH調至6.5，加入3000U/g中性蛋白酶，在55°C下第二次酶解50min，第二次酶解結束后沸水浴滅酶，離心收集上清液，上清液經真空濃縮裝置濃縮至固型物質量百分數為10%，用噴霧干燥，得到粉末狀甜高粱籽蛋白ACE抑制肽。所述甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的IC5tl值為0.261 0.552mg/mL。所述的雙酶分步水解制備的甜高粱籽蛋白ACE抑制肽在抑制肽活性研究方面的應用。采用乙酸乙酯萃取一比色法測定甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的抑制活性(MuguerzaB, Ramos M, Sanchez E, et al.Antihypertensive activity of milk fermented byEnterococcus faecalis strains isolated from raw milk .1nternational DairyJournal, 2006，16(1): 61 _69.)，具體方法如下: 將10 μ L甜高粱籽蛋白ACE抑制肽溶液與10 μ L ACE溶液在37 °C下預熱5 min,加Λ 45 yL 5 mmol/L HHL (馬尿酰-組氨酰-亮氨酸)溶液，在37 °C反應30 min，反應結束后立即加入85 μ L lmol/L HCl溶液終止反應；在反應液中加入I mL乙酸乙酯，振蕩2min后,4 000 r/min離心10 min,取出800 μ L有機相溶液轉入玻璃管中，在100 °C下蒸發30 min,蒸發后的殘洛中加入800 μ L雙蒸水,混勻后在228 nm下測定吸光度,每個樣品重復3次。另以雙蒸水代替樣品作為空白。按下式計算ACE抑制活性:I =(A — C)/ (A - B) X 100% 式中，I一甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的抑制率;A—空白組的吸光度出一反應體系中沒有加入甜高粱籽蛋白ACE抑制肽時的吸光度；(:一反應體系中有甜高粱籽蛋白ACE抑制肽和樣品時的吸光度。有益效果:與現有技術相比，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種雙酶分步水解制備甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于包括以下步驟：1）將甜高粱籽進行粉碎，然后用蒸餾水配制成甜高粱籽粉的質量百分數為5％～10％的懸浮液；2）將5000～10000U/g淀粉酶加入懸浮液中50℃～70℃酶解3h～4h，酶解結束后，將懸浮液的pH調至8.0～9.5，攪拌30min后離心，取上清液，調其pH至4.0～4.5，靜置30min后離心，收集沉淀，將沉淀溶于蒸餾水中，調pH至中性后經真空濃縮裝置濃縮和噴霧干燥得到甜高粱籽蛋白粉；3）將甜高粱籽蛋白粉配成質量百分數為1％～4％的溶液，調pH至7.0～8.0，加入2000～4000U/g的α?胰凝乳蛋白酶，在40℃～50℃下第一次酶解20～30min，第一次酶解結束后沸水浴滅酶得到混合液，將混合液的pH調至6.0～7.0，加入2000～4000U/g中性蛋白酶，在50℃～60℃下第二次酶解40～60min，第二次酶解結束后沸水浴滅酶，離心收集上清液，上清液經真空濃縮裝置濃縮至固型物的質量百分數為5%?15％，用噴霧干燥后，得到粉末狀甜高粱籽蛋白ACE抑制肽。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳瓊英，賈俊強，顏輝，
申請(專利權)人：江蘇科技大學，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。