一種能同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度的分子標記方法，它涉及分子標記方法。方法：一、設計引物對提取綿羊基因組DNA進行擴增，然后酶切，得酶切產物；二、酶切產物電泳分離，根據電泳分離結果進行基因型判定；三、進行關聯分析，并估計性狀的最小二乘均值，結果為3種基因型中具有AA、GA基因型群體的羊毛細度顯著低于GG基因型群體；具有AA基因型群體的羊毛卷曲度顯著高于GG基因型個體；四、將實驗群體分為三種類型，即完成。本發明專利技術能同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度，為綿羊羊毛的品質性狀改良、標記輔助選擇提供了一個更為有效、簡便易行的分子標記方法，可有效的應用于超細毛綿羊的分子輔助育種領域。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及動物分子遺傳學領域，特別是涉及一種用分子標記同時檢測綿羊羊毛細度和卷曲度的方法。
技術介紹
細毛羊在我國畜牧產業中占有重要地位，細毛羊的主要產品是羊毛。細羊毛作為重要的紡織原料，有較高的經濟價值。細毛羊的生產不僅關系到產區的經濟發展和社會穩定，而且關系到我國毛紡行業的發展以及進出口貿易平衡。隨著國內外對羊毛需求的增加，高品質細毛羊的培育已成為羊毛業生產以及綿羊育種領域中亟待解決的問題。中國美利奴羊(新疆軍墾型)培育從1972年開始，先后培育出六個品系，分別為軍墾A型品系、軍墾B型品系、超細型品系、肉用多胎品系、毛用多胎品系和U品系。截止2002年已向全國23個省、自治區推廣優質羊12萬只，為我國細毛羊事業的發展和改良工作做出了重大貢獻。但是，如何進一步提供羊毛細度，培育超細毛種羊，以及快速擴大種群規模仍然是一個重要問題。羊毛細度是一種高遺傳力的性狀，遺傳力達0.59。分子標記技術能夠在種羊選育中避免年齡、性別、環境的干擾，實現早期、快速、準確的選擇優質細毛羊，組建并擴大優質細毛羊種群。因此，尋找羊毛細度相關基因及分子標記，應用現代分子育種新技術快速培育超細毛羊、快速擴大優質細毛羊種質規模勢在必行。MTR基因編碼合成甲硫氨酸合成酶，這個酶可以催化同型半胱氨酸(Hcy)合成甲硫氨酸，同時也能夠使5-甲基四氫葉酸轉化為四氫葉酸，因此該基因與機體內葉酸的循環代謝密切相關。人類遺傳病研究表明，MTR基因突變與甲基谷氨酸G型缺失癥密切相關，這是一種常染色體隱性遺傳病，常引起智力低下、大細胞性貧血以及同型半胱氨酸尿癥等相關疾病。然而，關于M TR基因在畜禽的研究鮮有報道。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供。按以下步驟進行:一、根據綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點設計一對引物MTRFl和MTRRl，然后對綿羊基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物，再用內切酶MspI酶切PCR擴增產物，獲得酶切產物；二、使用濃度為2% 3%的瓊脂糖凝膠對酶切產物進行電泳分離，然后根據電泳分離結果進行基因型判定，判定的標準:①電泳呈現兩條帶，大小為269bp和209bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點未突變時，PCR擴增產物可以被MspI酶完全切開，將其命名為GG基因型；②電泳呈現一條帶，大小為478bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點突變時，PCR擴增產物不能被MspI酶切，將其命名為AA基因型；③電泳呈現三條帶，大小為478bp、269bp和209bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點處于雜合狀態，PCR擴增產物不能被MspI酶完全切開，將其命名為GA基因型；三、根據中國美利奴羊實驗群體的特點，構建基因型效應統計模型:Y =μ+G+L+A+GXL+GXA+LXA+e，其中，Y為性狀的觀測值，μ為群體均值，G為基因型效應，L為品系效應，A為年齡效應,GXL為基因型和品系的互作效應,GXA為基因型和年齡的互作效應，LXA為品系和年齡的互作效應，e為剩余值效應，然后利用JMP4.0統計軟件將基因型與連續性性狀進行關聯分析，并估計性狀的最小二乘均值，關聯分析結果表明，綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點G/A單堿基突變引起的基因型效應與中國美利奴羊實驗群體的羊毛細度和卷曲度的顯著相關，P值分別為0.0002和0.0351 ;再進行多重比較，3種基因型中具有AA、GA基因型群體的羊毛細度顯著低于GG基因型群體；具有AA基因型群體的羊毛卷曲度顯著高于GG基因型群體；四、依據基因型將中國美利奴羊實驗群體分為三種類型，從而實現同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度的分子標記輔助育種，即完成同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度的分子標記方法；其中步驟一中MTRFl 的核苷酸序列為:5' -TGGAGAACCAAACACTGTCCTGAGA-3 '；MTRRl 的核苷酸序列為:5' -CTTACACCTTATCGTGAACACCTATGC-3'；步驟二中MspI酶所識別的堿基序列為CCGG ；步驟三中中國美利奴羊實驗群體的特點:①、711只中國美利奴羊為新疆軍墾型；②、超細毛品系173只、毛用多胎品系135只、A品系146只、B品系100只、U品系32只、肉用多胎品系125只、均為母羊、年齡為I 12歲。本專利技術采用PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳分離的方法檢測綿羊MTR基因內含子區一個位點的單點突變。由于G9542341A位點能夠被內切酶MspI所識別，針對該位點設計的引物MTRF1/MTRR1可以方便的擴增出包含該位點的DNA片段，使用2% _3%瓊脂糖凝膠電泳可以很容易地對三種基因型進行判定。本專利技術通過對MTR基因G9542341A位點的不同基因型進行檢測，該位點位于MTR基因第27內含子區，采用MTRFl和MTRRl表示的引物對G9542341A位點附近的序列進行擴士豳>曰ο本專利技術操作簡單、費用低、精確度高，可進行自動化檢測。使用本專利技術的標記基因型對綿羊羊毛細度和卷曲度進行選擇時，將使綿羊羊毛的細度和卷曲度取得很大的遺傳進展。羊毛細度和卷曲度都是重要的品質性狀和經濟性狀，同時卷曲度與細度呈負相關，毛卷曲度越大(多)，毛越細(直徑越小)，毛柔軟度越好，紡織性能越高，兩種性狀都對羊毛價格起到決定作用。利用本專利技術可以對羊毛細度和卷曲度兩個性狀同時進行選擇，不僅為綿羊羊毛的品質性狀改良提供了一種有效的分子標記育種手段，也為綿羊育種工作中標記輔助選擇提供了一個更為有效、簡便易行的分子標記方法。本專利技術可以有效的應用于超細毛綿羊的分子輔助育種領域，實現種羊的早期選種，出生后即可進行選留，加速綿羊的育種進程。 附圖說明圖1為實施例中酶切產物進行電泳分離的電泳圖。具體實施例方式本專利技術技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一:本實施方式按以下步驟進行:一、根據綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點設計一對引物MTRFl和MTRRl，然后對綿羊基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物，再用內切酶MspI酶切PCR擴增產物，獲得酶切產物；二、使用濃度為2% 3%的瓊脂糖凝膠對酶切產物進行電泳分離，然后根據電泳分離結果進行基因型判定，判定的標準:①電泳呈現兩條帶，大小為269bp和209bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點未突變時，PCR擴增產物可以被MspI酶完全切開，將其命名為GG基因型；②電泳呈現一條帶，大小為478bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點突變時，PCR擴增產物不能被MspI酶切，將其命名為AA基因型；③電泳呈現三條帶，大小為478bp、269bp和209bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點處于雜合狀態，PCR擴增產物不能被MspI酶完全切開，將其命名為GA基因型；三、根據中國美利奴羊實驗群體的特點，構建基因型效應統計模型:Y =μ+G+L+A+GXL+GXA+LXA+e，其中，Y為性狀的觀測值，μ為群體均值，G為基因型效應，L為品系效應，A為年齡效應,GXL為基因型和品系的互作效應,GXA為基因型和年齡本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種能同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度的分子標記方法，其特征在于它按以下步驟進行：一、根據綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點設計一對引物MTRF1和MTRR1，然后對綿羊基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物，再用內切酶MspI酶切PCR擴增產物，獲得酶切產物；二、使用濃度為2％～3％的瓊脂糖凝膠對酶切產物進行電泳分離，然后根據電泳分離結果進行基因型判定，判定的標準：①電泳呈現兩條帶，大小為269bp和209bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點未突變時，PCR擴增產物可以被MspI酶完全切開，將其命名為GG基因型；②電泳呈現一條帶，大小為478bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點突變時，PCR擴增產物不能被MspI酶切，將其命名為AA基因型；③電泳呈現三條帶，大小為478bp、269bp和209bp，則綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點處于雜合狀態，PCR擴增產物不能被MspI酶完全切開，將其命名為GA基因型；三、根據中國美利奴羊實驗群體的特點，構建基因型效應統計模型：Y＝μ+G+L+A+G×L+G×A+L×A+e，其中，Y為性狀的觀測值，μ為群體均值，G為基因型效應，L為品系效應，A為年齡效應，G×L為基因型和品系的互作效應，G×A為基因型和年齡的互作效應，L×A為品系和年齡的互作效應，e為剩余值效應，然后利用JMP4.0統計軟件將基因型與連續性性狀進行關聯分析，并估計性狀的最小二乘均值，關聯分析結果表明，綿羊MTR基因第27內含子區G9542341A位點G/A單堿基突變引起的基因型效應與中國美利奴羊實驗群體的羊毛細度和卷曲度性狀顯著相關，P值分別為0.0002和0.0351；再進行多重比較，3種基因型中具有AA、GA基因型群體的羊毛細度顯著低于GG基因型群體；具有AA基因型群體的羊毛卷曲度顯著高于GG基因型群體；四、依據基因型將中國美利奴羊實驗群體分為三種類型，從而實現同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度的分子標記輔助育種，即完成同時預示和鑒定綿羊羊毛細度和卷曲度的分子標記方法；其中步驟一中MTRF1的核苷酸序列為：5′?TGGAGAACCAAACACTGTCCTGAGA?3′；MTRR1的核苷酸序列為：5′?CTTACACCTTATCGTGAACACCTATGC?3′；步驟二中MspI酶所識別的堿基序列為CCGG；步驟三中中國美利奴羊實驗群體的特點：①、711只中國美利奴羊為新疆軍墾型；②、超細毛品系173只、毛用多胎品系135只、A品系146只、B品系100只、U品系32只、 肉用多胎品系125只；③、均為母羊；④、年齡為1～12歲。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王寧，榮恩光，于磊，楊華，李輝，王守志，王志鵬，
申請(專利權)人：東北農業大學，
類型：發明
國別省市：
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