一種特異性沙丁胺醇人工抗原的合成方法技術

一種特異性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術領域。本發(fā)明專利技術包括如下步驟：沙丁胺醇通過甲醛溶液活化，酚羥基鄰位連接上6-氨基己酸，得到沙丁胺醇半抗原；將沙丁胺醇半抗原上的羧基與載體蛋白上的氨基進行偶聯(lián)，得到沙丁胺醇人工抗原。本發(fā)明專利技術彌補了現(xiàn)有沙丁胺醇抗原合成技術的不足和缺陷，得到了一種高特異性的沙丁胺醇人工抗原，產(chǎn)生的抗體特異性高、靈敏度高，實驗結果表明，用本發(fā)明專利技術的沙丁胺醇人工抗原免疫動物得到的抗血清效價可達80000，檢測限為0.5ng/mL，半抑制濃度IC50為5ng/mL。本發(fā)明專利技術的抗原或抗體可用于建立酶聯(lián)免疫吸附分析方法和膠體金試紙快速檢測法，從而用于快速檢測食品中的沙丁胺醇殘留，具有廣闊的應用前景。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

一種高特異性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，屬于生物化工

技術介紹
沙丁胺醇(salbutamol)，是一種短效β 2腎上腺素受體激動劑，用作平喘藥。添加微量沙丁胺醇于牲畜飼料內(nèi)，可以增加牲畜的瘦肉量及換肉率、減少脂肪，但是其毒性遠高于具有相同功能的萊克多巴胺。2002年9月10起在中國境內(nèi)禁止在飼料和動物飲用水中使用沙丁胺醇。沙丁胺醇結構式如式(I)。

【技術保護點】
一種特異性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，其特征在于以沙丁胺醇為原料，沙丁胺醇與6?氨基己酸反應合成沙丁胺醇半抗原即化合物I，化合物I通過1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC與N?羥基琥珀酰亞胺NHS活化、或者通過三正丁胺與氯甲酸異丁酯活化，再與載體蛋白進行偶聯(lián)制得沙丁胺醇人工抗原即化合物Ⅱ，合成路線如反應式所示：合成工藝為：（1）沙丁胺醇半抗原的制備沙丁胺醇加入乙醇溶解，在室溫下，滴加質(zhì)量濃度37%的甲醛溶液反應，沙丁胺醇:甲醛的摩爾比為1:1，反應30min，再加入與沙丁胺醇等摩爾的6?氨基己酸，攪拌反應6h；將反應液pH調(diào)節(jié)至2～3，加入乙酸乙酯萃取，有機相37℃旋轉蒸發(fā)干，得到沙丁胺醇半抗原，即化合物I；（2）沙丁胺醇人工抗原的制備（A）將化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解，化合物I與N?羥基琥珀酰亞胺NHS和1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC在4℃避光攪拌反應1h，化合物I:N?羥基琥珀酰亞胺NHS:1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC的摩爾比為1:1.5:2，再在室溫反應12h，得活化的沙丁胺醇半抗原溶液；取牛血清白蛋白，化合物I與牛血清白蛋白的摩爾比為80:1，將牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸鹽緩沖液溶解，溶解后的牛血清白蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩沖液與N,N?二甲基甲酰胺DMF的體積比例為5:1；將活化的沙丁胺醇半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，室溫下反應24h，用PBS緩沖液透析2天，期間更換PBS緩沖液4次，即得到沙丁胺醇人工抗原，即化合物 Ⅱ；或（B）將化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解，化合物I與三正丁胺和氯甲酸異丁酯0℃反應1h，化合物I:三正丁胺:氯甲酸異丁酯的摩爾比為1:1.2:1.2，得活化的沙丁胺醇半抗原溶液；取牛血清白蛋白，化合物I與牛血清白蛋白的摩爾比為80:1，將牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸鹽緩沖液溶解，0℃預冷30min，溶解后的牛血清白蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩沖液與N,N?二甲基甲酰胺DMF的體積比例為5:1；在0℃條件下，將活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，0℃條件下反應1h，然后室溫下反應24h，用PBS緩沖液透析2天，期間更換PBS緩沖液4次，即得到沙丁胺醇人工抗原，即化合物Ⅱ。FDA00002978066900011.jpg...

【技術特征摘要】
1.一種特異性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，其特征在于以沙丁胺醇為原料，沙丁胺醇與6-氨基己酸反應合成沙丁胺醇半抗原即化合物I，化合物I通過1-乙基-3-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC與N-羥基琥珀酰亞胺NHS活化、或者通過三正丁胺與氯甲酸異丁酯活化，再與載體蛋白進行偶聯(lián)制得沙丁胺醇人工抗原即化合物II，合成路線如反應式所示:O2.根據(jù)權利要求1所述的特異性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，其特征在于:所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、陽離子化的牛血清白蛋白cBSA、匙孔血藍蛋白KLH、血藍蛋白...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：胥傳來，劉麗強，王利兵，匡華，徐利廣，馬偉，胡擁明，
申請(專利權)人：江南大學，
類型：發(fā)明
國別省市：