雙特異性抗原結(jié)合多肽制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供以高親和力特異性結(jié)合第一靶抗原和第二靶抗原的抗原結(jié)合多肽(例如，雙特異性抗原結(jié)合多肽)。本發(fā)明專利技術(shù)還提供特異性結(jié)合HER2并且拮抗HER2激活的新型抗原結(jié)合多肽。本發(fā)明專利技術(shù)還提供編碼所述抗原結(jié)合多肽的核酸，用于制備此類抗原結(jié)合多肽的重組表達(dá)載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明專利技術(shù)還涵蓋使用本發(fā)明專利技術(shù)的抗原結(jié)合多肽治療疾病(例如，癌癥)的方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2014年3月21日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)第61/968,437號(hào)的優(yōu)先權(quán)的權(quán)益。上述申請(qǐng)的內(nèi)容據(jù)此通過引用整體并入。背景由于能夠同時(shí)靶向多個(gè)抗原，雙特異性抗原結(jié)合多肽(如抗體和抗體樣分子)為治療學(xué)帶來巨大希望。然而，制備這些分子是一種挑戰(zhàn)。就雙特異性抗體而言，重鏈和輕鏈的錯(cuò)配在產(chǎn)生期間經(jīng)常發(fā)生，這降低雙特異性抗體的產(chǎn)量并且使純化具有挑戰(zhàn)性。為了克服與雙特異性抗體的制備相關(guān)的問題，已經(jīng)嘗試了抗體恒定區(qū)或可變區(qū)的復(fù)雜的工程化。例如，已經(jīng)生成這樣的雙特異性抗體，其中各個(gè)抗體的VH和VL經(jīng)由連接物在基因上融合(參見例如，US2010/0254989A1)。在另一方法中，制備的各個(gè)抗體在負(fù)責(zé)Fab交換的人IgG4的殘基的Fc中的突變(參見例如，Van der Neut等,Science(2007)317:1554)。在另一方法中，采用小鼠四元雜交瘤(quadromas)生成雙特異性抗體。在該方法中，小鼠和大鼠抗體主要形成最初的VH/VL配對(duì)，并且雙特異性抗體由大鼠和小鼠Fc組成(參見例如，Lindhofer等,J Immunol.(1995)155:1246–1252)。最后，已經(jīng)生成了使用不會(huì)促成抗原結(jié)合的單個(gè)常見輕鏈的雙特異性抗體(參見例如，Merchant等,Nature Biotechnology(1998)16:677–681)。然而，盡管在抗體工程方面做出了大量努力，雙特異性抗體仍然遭受差的穩(wěn)定性和低的功能性表達(dá)產(chǎn)量。因此，本領(lǐng)域需要高度表達(dá)并且容易純化的新型抗原結(jié)合多肽。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)提供雙特異性抗原結(jié)合多肽，其是高度表達(dá)的、容易純化的、高度穩(wěn)定的以及對(duì)它們的靶抗原具有高親和力。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗原結(jié)合多肽以高親和力結(jié)合PDGFRβ和HER2兩者，并且拮抗PDGFRβ和HER2兩者的活性。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗原結(jié)合多肽以高親和力結(jié)合PDGFRβ和VEGF兩者，并且拮抗PDGFRβ和VEGF兩者的活性。本專利技術(shù)還提供特異性結(jié)合HER2并且拮抗HER2激活的新型抗原結(jié)合多肽(例如，VH結(jié)構(gòu)域)。此類抗原結(jié)合多肽尤其可用于治療癌癥。本專利技術(shù)還提供編碼抗原結(jié)合多肽的核酸，用于制備此類抗原結(jié)合多肽的重組表達(dá)載體和宿主細(xì)胞。本專利技術(shù)還涵蓋使用本專利技術(shù)的抗原結(jié)合多肽治療疾病(例如，癌癥)的方法。因此，在一個(gè)方面，本專利技術(shù)提供分離的雙特異性抗原結(jié)合多肽，其包含抗體重鏈，所述抗體重鏈包含第一VH結(jié)構(gòu)域并在其C-末端連接第二VH結(jié)構(gòu)域，所述第一VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合第一抗原，所述第二VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合第二抗原，其中所述多肽不含抗體輕鏈。在某些實(shí)施方案中，抗體重鏈通過氨基酸連接物與第二VH結(jié)構(gòu)域基因連接。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，連接物包含SEQ ID No:23所示的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽還包含抗體輕鏈，所述輕鏈包含特異性結(jié)合抗原的VL結(jié)構(gòu)域，其中所述重鏈和所述輕鏈天然配對(duì)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，VL結(jié)構(gòu)域結(jié)合第一抗原。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，VL結(jié)構(gòu)域結(jié)合第三抗原。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，第一抗原和第三抗原在同一分子的不同區(qū)域中。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，第一抗原和第三抗原在不同分子上。在某些實(shí)施方案中，本專利技術(shù)提供抗原結(jié)合多肽，其包含本文公開的兩個(gè)抗原結(jié)合多肽的二聚體，所述兩個(gè)抗原結(jié)合多肽通過重鏈恒定區(qū)天然二聚化。在某些實(shí)施方案中，第一抗原和第二抗原是不同的。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，第一抗原和第二抗原在同一分子的不同區(qū)域中。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，第一抗原和第二抗原在不同分子上。在某些實(shí)施方案中，第一抗原是人PDGFRβ或HER2。在某些實(shí)施方案中，第二抗原是人PDGFRβ或HER2。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合人HER2并且包含含有選自SEQ ID NO:1、4、7和10的氨基酸序列的HCDR3。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域還包含含有選自SEQ ID NO:2、5、8或11的氨基酸序列的HCDR2。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域還包含含有選自SEQ ID NO:3、6、9或12的氨基酸序列的HCDR1。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域氨基酸序列與選自SEQ ID NO:13、14、15和16的VH結(jié)構(gòu)域氨基酸序列共有至少80％的氨基酸序列同一性。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合人PDGFRβ并且包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的HCDR3。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域還包含含有SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的HCDR2。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域還包含含有SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列的HCDR1。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含含有SEQ ID NO:18或20所示的氨基酸序列的重鏈。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含VL結(jié)構(gòu)域，所述VL結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合人PDGFRβ并且包含含有SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的LCDR3。在某些實(shí)施方案中，VL結(jié)構(gòu)域還包含含有SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的LCDR2。在某些實(shí)施方案中，VL結(jié)構(gòu)域還包含含有SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的LCDR1。在某些實(shí)施方案中，VL結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含含有SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的抗體輕鏈。在另一方面，本專利技術(shù)提供特異性結(jié)合HER2的分離的抗原結(jié)合多肽，其包含含有選自SEQ ID NO:1、4、7和10的氨基酸序列的CDR3。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域包含含有選自SEQ ID NO:1、4、7和10的氨基酸序列的CDR3。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域還包含含有選自SEQ ID NO:2、5、8或11的氨基酸序列的CDR2。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域還包含含有選自SEQ ID NO:3、6、9或12的氨基酸序列的CDR1。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸序列共有至少80％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，VH結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸序列。在另一方面，本專利技術(shù)提供抗原結(jié)合多肽，其與具有選自SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域結(jié)合HER2上的同一表位。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含VH結(jié)構(gòu)域。在另一方面，本專利技術(shù)提供抗原結(jié)合多肽，其與具有選自SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域競(jìng)爭結(jié)合HER2。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合多肽包含VH結(jié)構(gòu)域。在其它方面，本專利技術(shù)提供編碼本專利技術(shù)的抗原結(jié)合多肽的分離的核酸。在其它方面，本專利技術(shù)提供重組表達(dá)載體，其包含編碼本專利技術(shù)的抗原結(jié)合多肽的分離的核酸。在其它方面，本專利技術(shù)提供表達(dá)本專利技術(shù)的抗原結(jié)合多肽的宿主細(xì)胞。在其它方面，本專利技術(shù)提供制備本專利技術(shù)的抗原結(jié)合多肽的方法，其包括在使得宿主細(xì)胞產(chǎn)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
分離的雙特異性抗原結(jié)合多肽，其包含抗體重鏈，所述抗體重鏈包含第一VH結(jié)構(gòu)域并在其C?末端連接第二VH結(jié)構(gòu)域，所述第一VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合第一抗原，所述第二VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合第二抗原，其中所述多肽不含抗體輕鏈。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2014.03.21 US 61/968,4371.分離的雙特異性抗原結(jié)合多肽，其包含抗體重鏈，所述抗體重鏈包含第一VH結(jié)構(gòu)域并在其C-末端連接第二VH結(jié)構(gòu)域，所述第一VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合第一抗原，所述第二VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合第二抗原，其中所述多肽不含抗體輕鏈。2.如權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述抗體重鏈通過氨基酸連接物與所述第二VH結(jié)構(gòu)域基因連接。3.如權(quán)利要求2所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述連接物包含SEQ ID No:23所示的氨基酸序列。4.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其還包含抗體輕鏈，所述輕鏈包含特異性結(jié)合抗原的VL結(jié)構(gòu)域，其中所述重鏈和所述輕鏈天然配對(duì)。5.如權(quán)利要求4所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述VL結(jié)構(gòu)域結(jié)合所述第一抗原。6.如權(quán)利要求4所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述VL結(jié)構(gòu)域結(jié)合第三抗原。7.抗原結(jié)合多肽，其包含兩個(gè)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽的二聚體，所述兩個(gè)抗原結(jié)合多肽通過重鏈恒定區(qū)天然二聚化。8.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第一抗原和所述第二抗原是不同的。9.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第一抗原和所述第二抗原在同一分子的不同區(qū)域中。10.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第一抗原和所述第二抗原在不同分子上。11.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第一抗原和所述第三抗原在同一分子的不同區(qū)域中。12.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第一抗原和所述第三抗原在不同分子上。13.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第一抗原是人PDGFRβ或HER2。14.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述第二抗原是人PDGFRβ或HER2。15.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合人HER2并且包含含有選自SEQ ID NO:1、4、7和10的氨基酸序列的HCDR3。16.如權(quán)利要求15所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述VH結(jié)構(gòu)域還包含含有選自SEQ ID NO:2、5、8或11的氨基酸序列的HCDR2。17.如權(quán)利要求16所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述VH結(jié)構(gòu)域還包含含有選自SEQ ID NO:3、6、9或12的氨基酸序列的HCDR1。18.如權(quán)利要求15所述的抗原結(jié)合多肽，其包含與選自SEQ ID NO:13、14、15和16的VH結(jié)構(gòu)域氨基酸序列共有至少80％的氨基酸序列同一性的VH結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。19.如權(quán)利要求15所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸序列。20.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合多肽，其包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合人PDGFRβ并且包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的HCDR3。21.如權(quán)利要求20所述的抗原結(jié)合多肽，其中所述VH結(jié)構(gòu)域還包含含有SEQ ID NO:...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳巖，理查德·W·瓦格納，張克明，帕斯卡萊·理查勒特，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：X博迪公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US