一種從甘草渣中提取甘草黃酮的方法技術

本發明專利技術涉及一種提取甘草黃酮的方法，尤其是涉及一種從甘草渣中提取甘草黃酮的方法。該方法由以下步驟組成：（1）超聲酶解：取甘草渣干燥、粉碎后在纖維素酶和果膠酶的混合物溶液中超聲處理；（2）絮凝除雜：在濃縮液中加入殼聚糖膠體溶液及101果汁澄清劑水溶液；（3）過大孔樹脂柱：將上清液過D101樹脂柱，用體積濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮，減壓干燥即得甘草總黃酮。本發明專利技術所述方法顯著提高了甘草總黃酮的提取率和純度。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種提取甘草黃酮的方法，尤其是涉及。技術背景: 甘草為豆科甘草屬植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch、脹果甘草Glycyrrhizainflata Bat或光果甘草Glycyrrhiza glabra L的干燥根及根莖。富含三職和黃酮類成分，其中五環三萜類化合物甘草酸是主要有效成分之一。醫藥生產企業常采用水提、含水醇提、堿提等方法從甘草藥材中提取甘草酸，提取后所剩余的甘草藥渣通常作為工業廢料棄去。進一步的研究表明甘草藥渣中富含大量的黃酮類化合物，這些黃酮類成分具有廣泛的生物活性，如抑菌、抗真菌、增強機·體免疫功能、抗H IV、抗腫瘤、抗潰瘍、抗氧化、保肝及降血糖等。因而，甘草藥渣是一種寶貴的可再利用資源，其可廣泛應用于藥品、食品及化妝品等領域。目前對甘草酸的提取工藝研究較多，也比較成熟。但是對于甘草中黃酮類成分的提取工藝則研究較少，而利用提取甘草酸后的廢渣提取甘草黃酮的則更少。甘草黃酮經典提取方法有溶劑萃取法、聚酰胺吸附法等提取甘草黃酮，因為工藝復雜，收率低，成本高等原因，不適合工業化生產。對于從甘草中提取甘草浸膏和甘草酸后得到的甘草藥渣這一工業生產廢料，如能夠加以充分利用，挖掘其醫療價值和經濟價值，有利于解決工業上生產廢物處理的難題，更加充分合理利用甘草植物資源和保護生態環境，定會產生巨大的效.、/■Mo植物的有效成分往往包裹在細胞壁內，酶處理法可以水解破壞細胞壁結構，使有效成分直接暴露出來，溶解、混懸或膠溶于提取溶劑中，以提高總黃酮的提取率。酶解法具有反應溫和、得率高、成本低廉、操作簡單等優點。超聲波的空化作用，能加速植物細胞壁破裂，促進活性物質的釋放，提取效率高，時間短，雜質少，廣泛用于植物活性成分的提取。上述酶解和超聲破壁的現代工藝已被引入提取植物總黃酮的技術方案中，但尚存在一些有待改進的不足。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種改進的甘草渣中甘草總黃酮的提取方法，該方法顯著提高了甘草總黃酮的提取率和純度。本專利技術解決上述問題的技術方案如下: ，由以下步驟組成: (I)超聲酶解:取干燥、粉碎后的甘草渣加入質量濃度為0.05% 0.15%的復合酶溶液，加入量為10 30ml復合酶溶液/Ig甘草渣，再將溶液的pH值調至4.5 6，然后在40 60°C下以50KHZ，160W超聲處理0.5 1.5小時后迅速升溫至90°C，保持IOmin滅酶，濾過，收集濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05的濃縮液，60°C時；其中，所述的復合酶為纖維素酶和果膠酶的混合物，二者的質量配比為1:1 ;(2)絮凝除雜:于60°C條件下，先按80mL殼聚糖膠體溶液/IOOOmL濃縮液的比例往濃縮液中加入殼聚糖，充分攪拌，再按80mL 101果汁澄清劑水溶液/IOOOmL濃縮液的比例加入101果汁澄清劑水溶液，充分攪拌，靜置過夜，離心分離，取上清液；其中，所述的殼聚糖膠體溶液是體積濃度為1%的醋酸溶液與殼聚糖混合制成的殼聚糖質量濃度為1%的醋酸溶液，所述的101果汁澄清劑水溶液是水與101果汁澄清劑混合制成的的101果汁澄清劑質量濃度為5%的水溶液； (3)過大孔樹脂柱:將上清液過DlOl樹脂柱，用體積濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮，減壓干燥即得甘草總黃酮。作為上述技術方案的優選方案，步驟(I)所述復合酶溶液的加入量為20ml復合酶溶液/Ig甘草渣。作為上述技術方案的優選方案，步驟(I)所述復合酶溶液的質量濃度為1%。作為上述技術方案的優選方案，步驟(I)所述甘草渣與復合酶溶液混合的溶液的pH值調至5.0。作為上述技術方案的優選方案，步驟(I)所述超聲處理的溫度為50°C，時間為I小時。本專利技術方法較現有技術具有下列優點: (I)眾所周知，甘草渣中主要內含有纖維素和木質素，同時含有果膠質；纖維素、木質素和果膠質是兩類特性不同的物質，而不同的酶的降解作用又不相同。本專利技術所述的復合酶正是基于上述因素而設計的，利用纖維素酶充分降解甘草渣內的纖維素和木質素，利用果膠酶充分降解其中的果膠質，同時結合超聲波的作用，既能激活酶的活性又能加速黃酮的溶出，從而使甘草總黃酮的提取率顯著提高。(2)由于甘草渣經過超聲酶解后，提取液中存在顆粒較大的懸浮顆粒、重金屬離子等大分子不穩定性雜質而嚴重影響提取物的純度和品質。因此，本專利技術絮凝除雜步驟先加入殼聚糖，利用其吸附架橋和對負電荷的中和作用，除去中藥提取液中懸浮顆粒等，然后加入101果汁澄清劑，利用101果汁澄清劑的吸附和聚凝的雙重作用，使所述的大分子雜質快速聚凝沉淀；同時，所述的101果汁澄清劑對溶液中的殘留殼聚糖也同樣具有吸附和聚凝作用，進一步消除了殘留的殼聚糖對提取物品質的影響。該技術應用于黃酮類成分的除雜，使甘草總黃酮的得率得到大幅度的提升，相比不應用該絮凝除雜步驟的提取工藝，得率可提聞5倍左右。(3)此外，本專利技術所述方法還具有過程操作簡單、耗時少、成本低和安全無毒的優點。 附圖說明圖1為甘草苷標準曲線。具體實施方式下面結合具體實施例和對比例對本專利技術進行詳細的說明，實施例僅是本專利技術的優選實施方式，不是對本專利技術的限定。實施例11、提取甘草總黃酮 (I)先做前期的準備工作，即，將甘草渣干燥并粉碎成粗粉；取等量的纖維素酶和果膠酶加入水制備成濃度為0.1%的復合酶溶液；取殼聚糖0.8g，加入到80mL濃度為1%醋酸溶液中配成殼聚糖濃度為1%的殼聚糖膠體溶液，備用；取101果汁澄清劑4g，加入到80mL蒸餾水中配成101果汁澄清劑濃度為5%的101果汁澄清劑水溶液，備用。(2)取甘草渣粗粉IOOOg，加入配制的復合酶溶液中，加入量為Ig甘草渣/20ml復合酶溶液，再將溶液的pH值調到5.0，然后在501:下超聲(50腿2，1601)處理1.011后迅速升溫至90°C，保持IOmin滅酶，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05 (60°C)，得到濃縮液。(3)于60°C時條件下，在上一步所得的IOOOml濃縮液中先加入殼聚糖膠體溶液80mL，充分攪拌，再加入101果汁澄清劑水溶液80mL，充分攪拌，靜置過夜，離心分離，取上清液。(4)將上清液過DlOl大孔樹脂柱，用體積濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮，減壓干燥，稱重，得甘草總黃酮粗品32g。2、甘草總黃酮的純度測定 (1)對照品溶液的制備:精密稱取甘草苷對照品5.08mg置5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制得濃度為1.016mg.πιΓ1的對照品儲備溶液。精密吸取Iml對照品溶液于IOml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到濃度為0.1016mg.πιΓ1的對照品溶液待用。(2)標準曲線的繪制:精密吸取0.1016 mg.πιΓ1的甘草苷對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml分別置IOml容量瓶中，加入10%的KOH溶液0.5ml，放置5min后，用甲醇稀釋至刻度，以相應的溶劑作為空白溶液。在波長250 600 nm之間測定吸收光譜，在最大吸收波長為337nm條件下分別測得每個容量瓶中對照品的吸光度。以對照品的濃度為橫坐標(X)值，吸光度為縱坐標(Y)值，在直角坐標系中繪制出6個對應點的坐標，然后進行線性回歸得到相關系數為r=0.9997的標準曲線本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從甘草渣中提取甘草黃酮的方法，其特征在于，該方法由以下步驟組成：（1）超聲酶解：取干燥、粉碎后的甘草渣加入質量濃度為0.05%～0.15%的復合酶溶液，加入量為10～30ml復合酶溶液/1g甘草渣，再將溶液的pH值調至4.5～6，然后在40～60℃下以50KHZ，160W超聲處理0.5～1.5?小時后迅速升溫至90℃，保持10min滅酶，濾過，收集濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05的濃縮液，60℃時；其中，所述的復合酶為纖維素酶和果膠酶的混合物，二者的質量配比為1:1；（2）絮凝除雜：于60℃條件下，先按80mL殼聚糖膠體溶液/1000mL濃縮液的比例往濃縮液中加入殼聚糖，充分攪拌，再按80mL?101果汁澄清劑水溶液/1000mL濃縮液的比例加入101果汁澄清劑水溶液，充分攪拌，靜置過夜，離心分離，取上清液；其中，所述的殼聚糖膠體溶液是體積濃度為1%的醋酸溶液與殼聚糖混合制成的殼聚糖質量濃度為1%的醋酸溶液，所述的101果汁澄清劑水溶液是水與101果汁澄清劑混合制成的101果汁澄清劑質量濃度為5%的水溶液；（3）過大孔樹脂柱：將上清液過D101樹脂柱，用體積濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮，減壓干燥即得甘草總黃酮。...

【技術特征摘要】
1.一種從甘草渣中提取甘草黃酮的方法，其特征在于，該方法由以下步驟組成: (1)超聲酶解:取干燥、粉碎后的甘草渣加入質量濃度為0.05% 0.15%的復合酶溶液，加入量為10 30ml復合酶溶液/Ig甘草渣，再將溶液的pH值調至4.5 6，然后在40 60°C下以50KHZ，160W超聲處理0.5 1.5小時后迅速升溫至90°C，保持IOmin滅酶，濾過，收集濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05的濃縮液，60°C時；其中，所述的復合酶為纖維素酶和果膠酶的混合物，二者的質量配比為1:1 ; (2)絮凝除雜:于60°C條件下，先按80mL殼聚糖膠體溶液/IOOOmL濃縮液的比例往濃縮液中加入殼聚糖，充分攪拌，再按80mL 101果汁澄清劑水溶液/IOOOmL濃縮液的比例加入101果汁澄清劑水溶液，充分攪拌，靜置過夜，離心分離，取上清液；其中，所述的殼聚糖膠體溶液是體積...

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃輝球，劉強，江潔，
申請(專利權)人：惠州市九惠制藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：