白術在制備抗朊病毒藥物中的應用制造技術

本發明專利技術涉及白術在制備抗朊病毒藥物中的應用。本發明專利技術的優點：植物體生物利用率高，采用水提法進行提取，白術的活性成分溶出率高，提取物具有顯著的抗朊病毒的作用；原料來源廣泛，安全性高。本發明專利技術開辟了一條利用天然植物的提取物治療朊病毒或病毒性疾病的新途徑。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物醫藥，具體涉及白術及其提取物在制備抗朊病毒藥物中的應用。
技術介紹
朊病毒是一類能在動物和人中引起可傳染性腦病(包括瘋牛病、羊搔癢癥、庫魯病、克雅氏病等)的病原體，其高度傳染性和致死性對整個社會造成了極大的危害。朊病毒(PrP)在體內以兩種不同的構象存在。正常構象的朊病毒(PrPC)含有43%的α螺旋和3%的β折疊，在體內以單體的形式出現，并行使正常的細胞功能，不具有致病性。而朊病毒一旦在某種條件下錯誤折疊后形成致病性構象(PrPSc)，其二級結構發生巨大變化，α螺旋降到了 30%，而β折疊的含量增至45%，大量的非常穩定的β片狀折疊狀構造能以自身為模板，誘導正常朊病毒的構象發生致病性轉化，進一步在具有致病性構象的朊病毒分子間通過“交聯β折疊片(cross-β sheet)”聚集,形成淀粉狀纖維(amyloidfiber)的有毒片斷，進而以塊狀高聚體形式(plaque)出現，最終誘導機體內的免疫系統殺死腦神經細胞而導致一系列致死性疾病。酵母朊病毒和]的細胞中Sup35p以不同的結構狀態存在，這與哺乳動物朊病毒的典型特性相一致。在的細胞中，大多數的Sup35p呈聚集的纖維狀，對翻譯終止是無效的。而且，聚集的Sup35p會進一步誘導新生成的Sup35p也發生同樣的構象改變，從而保證 的穩定遺傳。同PrP —樣，當正常的Sup35p與另一個朊病毒型的Sup35p相接觸時，它將由可溶型轉變成聚集型。在的細胞中，大多數的Sup35p采取了朊病毒構象并參與到聚集物的形成中去而不能在翻譯終止過程中正確的與終止復合物結合而行使功能，于是導致了核糖體通讀終止密碼子的趨勢增加，從而生產出具有多余片段的蛋白質，使在蛋白質合成的精確度上產生了可遺傳的改變。因此能夠合成adel (或ade2)蛋白質，并正常合成出腺嘌呤,從而能夠在SD-Ade培養基上生長。而在細胞中，Sup35p處于正常狀態，能夠使核糖體由信使RNA翻譯成蛋白質的過程通常結束于終止密碼子，即發生了無義突變，所以細胞不具有adel酶，而不能合成自身的腺嘌呤，因而不能在SD-Ade培養基上生存。如果菌株生長在1/2YPD培養基，被阻斷的生物合成途徑就導致了一個中間產物AIR的積累，這個中間產物可以經過轉變而產生紅色素，因為具有毒性而被細胞排出體外。這為監控Sup35p的狀態提供了很方便的通過顏色辨別的方法——菌株是白色的，或者是有些偏粉紅色，而L^i_]菌株是紅色的。基于Wickner等發現酵母細胞攜帶、等與動物朊病毒聚集、傳播機制相似的朊病毒，這些朊病毒具有各自的表型特征，Lindguist等進一步驗證了酵母朊病毒對于動物細胞及個體的安全性，并發現酵母細胞具有與哺乳類細胞相似的朊病毒形成的胞內環境。2003年Blondel等利用野生型酵母朊病毒、細胞為模型，在2500多種化學藥物中篩出了 6種抗酵母朊病毒聚集的化合物，并證明這些化合物在動物細胞中對于動物朊病毒同樣有抗聚集作用。2007年Tessier P.和Lindquist S.博士進一步利用基因重組的酵母朊病毒核心片斷建立了一個細胞外的抗朊病毒藥物篩選模型。2008年Blondel Μ.博士利用前期建立的酵母細胞篩選方法又篩選出了兩種有效的抗酵母朊病毒的化合物，并證實其中一種對抗哺乳動物朊病毒同樣有效。這些研究強烈地暗示著建立在酵母細胞上的抗朊病毒藥物篩選模型完全可以取代動物細胞模型，而且在操作的安全性上有強大的保障。以該模型為核心建立的抗朊病毒藥物篩選平臺，相對于傳統的建立在哺乳動物細胞上藥物篩選平臺，在篩選藥物效率上具有高效性；對操作者及周圍環境具有極高的安全性；對于藥物的廣譜篩選具有靈敏性；對于反效藥物具有可識別性；對于藥物篩選中的假陽性、假陰性具有較高的辨別能力；而且更有利于大規模生產推廣，具有經濟性。因此，利用酵母抗朊病毒篩選平臺是得到有效治療朊病毒藥物的新方法。基于朊病毒具有高度傳染性和致死性，篩選和研發具有預防和治療朊病毒引發疾病的藥物，具有重要意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種白術及其提取物的應用，其具有顯著的抗朊病毒的效果O本專利技術采用的技術方案是:白術或其提取物在制備抗朊病毒藥物中的應用。白術提取物的制備:白術經過粉碎后，加入蒸餾水，于95°C回流提取3小時，抽濾并回收濾液；濾液減壓濃縮，干燥，得白術提取物。白術，多年生草本植物，菊科。主要成分為蒼術醇、蒼術酮等，并含有維生素A。本專利技術具有如下優點: 1.植物體生物利用率高，效果顯著，本專利技術采用水提法進行提取，白術的活性成分溶出率高。通過應用現代藥理試驗方法對白術提取物的活性進行檢測，該提取物具有顯著的抗朊病毒作用，可以作為制備抗朊病毒的藥物。2.原料來源廣泛，安全性高。主產于浙江新昌、天臺、東陽、于潛，湖南平江、寧呈，江西修水，湖北通城、利川，河北、山東等省。3.發展前景廣闊，開辟了一條利用天然植物的提取物治療朊病毒或病毒性疾病的新途徑。并且可以通過進一步分離純化提取物中的活性成分，為設計開發出更高效的治療朊病毒或病毒性疾病的藥物奠定基礎。附圖說明圖1是白術提取物作用第3天后觀察ERG6 Δ 酵母細胞菌落顏色變化照片。圖2是白術提取物作用第5天后觀察ERG6 Δ 酵母細胞菌落顏色變化照片。具體實施例方式下面用非限定性實施例對本專利技術作進一步說明。實施例1 (一)白術提取物的制備: 白術經過粉碎后，準確稱量白術粉末10 g置于圓底燒瓶中，加入100 mL蒸餾水，在95°C回流提取3小時，抽濾并回收 濾液；濾液減壓蒸發濃縮，濃縮液置于潔凈小瓶中，于60°C過夜干燥，得白術提取物。將白術提取物30°C放置至恒重并稱量。用盡可能少量的蒸餾水溶解白術提取物，得藥液。計算藥液的濃度為含白術提取物6.06 g/ml，供以下實驗。(二)實驗 1、ERG6 Δ \_psn酵母細胞的活化:在無菌操作條件下，挑取3個以上的ERG6 Δ 酵母細胞懸液各100 μ 1，上述制備的含有白術提取物6.06 g/ml的藥液50 μ I (終濃度為0.303g/ml)、100 μ I (終濃度為 0.606g/ml)U50y I (終濃度為 0.909g/ml),及 1/2YH)培養液 850 μ 1、800μ 1、750μ I。陰性對照為(IOOul細胞懸液+900ul 1/2YPD);陽性對照為(IOOul細胞懸液+895ul l/2YPD+5ul Imol/LGuHcl );在24°C的條件下，振蕩培養5天。每天定時稀釋ERG6 Δ 酵母細胞培養液，即取前一天凍存管中的ERG6 Δ 酵母細胞懸液的培養皿置于24°C恒溫培養箱中培養5天，觀察ERG6 Δ 酵母細胞菌落的顏色變化。結果見圖1和圖2。5、檢驗假陽性:隨機選取白術提取物治愈酵母朊病毒效果最佳平板上出現的紅色顏色的菌落，劃線于1/2YPD固體平板上，然后影印到SD-Ade平板上，于24°C培養3天。6、結果:鹽酸胍為 已 知的具有抗朊病毒作用的藥物，從圖1和圖2可見，其菌落顏色為紅色。菌落為紅色表示該藥物具有抗朊病毒的作用，菌落仍為粉色表示該藥物對于朊病毒無作用。從圖1和圖2可見，含有白術提取物的藥液在培養3天之后，菌落大部分為白色，有少部分菌落為粉色；在培養5天之后本文檔來自技高網...

【技術保護點】
白術或其提取物在制備抗朊病毒藥物中的應用。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：宋有濤，李輝，沈曼莉，卜祥龍，
申請(專利權)人：遼寧大學，
類型：發明
國別省市：