紅曲霉生產酯化酶制劑的方法技術

本發明專利技術屬于生物酶制劑技術領域，具體涉及一種利用紅曲霉生產酯化酶制劑的方法。一種紅曲霉生產酯化酶制劑的方法，其采用的菌株紅曲霉菌Monascus?sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC?No.6807，該菌株在麥芽汁培養基上呈現煙灰色，底色呈現粉色，在顯微鏡下觀察該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規則。采用本發明專利技術的方法分離篩選得到的菌落，酯化酶系和淀粉酶系發達，所制得曲種的酯化酶活力、液化酶活力、糖化酶活力有明顯提高，酯化力由傳統方法中的35mg/g提高到60mg/g，液化力由20mg/g提高到40mg/g，糖化力由1500u/g提高到2000u/g以上。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物酶制劑
，具體涉及一種利用。
技術介紹
紅曲起源于我國，紅曲霉在我國主要用于紅曲釀酒、發酵食品、色素生產等方面。紅曲霉在代謝中可產生淀粉酶、酯化酶、蛋白酶等多種酶類，并且有不少紅曲霉菌株可以產生較高活性的蛋白酶，可用于腌潰魚、肉、豆腐等高蛋白食品，使食品色香味俱佳。而紅曲霉代謝中產生的酸性蛋白酶不僅可以用于食品，還在飼料、紡織、皮革生產等其它領域有著廣泛的應用。紅曲霉生長過程中能產生生物活性較強的酯化酶，而大量用于釀酒和發酵食品及多孔淀粉的生產。在我國紅曲霉的生產主要分布在福建、浙江和臺灣等地。紅曲霉在秈稻米上生長，由古至今多用固體培養紅曲霉生產酯化酶，目前也有研究院所進行紅曲霉液態發酵產生酯化酶方面的研究，但皆產酶能力較低，離實際大生產還有很大距離。由于多種紅曲霉菌種皆具有產生高酶活酯化酶的能力，因此，在濃香型大曲酒的釀造過程中，紅曲酯化酶的應用比較普遍。查閱國內外文獻后發現，基本所有的紅曲霉菌種都是單酶發酵，有少部分菌種為雙酶發酵，但一般僅有其中一種酶具有較大利用價值，而另一種酶活力則不盡人意。紅曲酯化酶制劑已早有商品問世(武漢佳成生物制品有限公司)且已應用于白酒生產，但其酶系單一，酯化力最高只有35mg/g左右。目前，國內白酒行業的現狀大都是利用單一菌種分別制造各種單一的曲種，在白酒生產過程中需要通過分別加入不同的曲種來實現釀造過程中淀粉的糖化、蛋白的水解及香味的增加，多種菌制曲的產品相比較顯得產品質量風味不足，酯香不濃，出品率低，所以紅曲酯化酶制劑的使用將會改變國內白酒行業的這一現狀。
技術實現思路
為了解決上述的技術問題，本專利技術提供了一種利用，采用該方法生產的酶制劑其酯化酶活力高、液化酶活力和糖化酶活力高。本專利技術其采用的菌株紅曲霉菌ifoftasciAs sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC NO. 6807，該菌株在麥芽汁培養基上呈現煙灰色，底色呈現粉色，在顯微鏡下觀察到該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規則。一種，包括下述的步驟a.菌種誘變出發菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅 曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結合，將三種出發菌株培養至菌齡30-40小時，進行細胞質分解，質解條件為25-30°C，時間2. 5-3小時，質解酶系統包括O. 1-5%溶菌酶，O. 3-1%蝸牛酶和O. 3-0. 8%纖維素酶，將質解的紅曲菌原生質在距離15w紫外燈下25厘米，照射80-100秒，使致死率達88%-91% ； b.分離 將誘變后菌種做平板分離，平板培養基如下，蛋白胨O. 5-1. 2%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2-3 %，氯化鈉O. 2-1%，瓊脂1-5%，28-32°C培養65-80小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩定后進行選定； c.制曲加入麩皮60-100%,玉米面10-20%,大豆粉3-7%，磷酸二氫鉀O.01-0. 03%,加水60-90%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-35°C，無菌環境下接種操作，在通風曲床30°C培養72小時，測定酶活力。優選的，一種，包括下述的步驟 a.菌種誘變 出發菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結合，將三種出發菌株培養至菌齡36小時，進行細胞質分解，質解條件為28°C，時間2. 5-3小時，質解酶系統包括O. 3%溶菌酶，O. 5%蝸牛酶和O. 5%纖維素酶，將質解的紅曲菌原生質在距離紫外燈下29厘米，照射80-100秒，致死率達88%-91% ； b.分離 將誘變后菌種做平板分離，平板培養基如下，蛋白胨1%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2. 5%，氯化鈉O. 5%，瓊脂2%，30°C培養72小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩定后進行選定； c.制曲加入麩皮80%，玉米面15%，大豆粉5%，磷酸二氫鉀O.02%,加水80%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-3`5°C，無菌環境下接種操作，在通風曲床30°C培養72小時，干燥至水分< 20%，測定酶活力。本專利技術的有益效果在于，采用本專利技術的方法分離篩選得到的菌落，酯化酶系和淀粉酶系發達，所制得曲種的酯化力、液化力、糖化力有明顯提高，酯化力由傳統方法中的35mg/g提高到60 mg/g,液化力由20提高到40 mg/g,糖化力由1500u/g提高到2000u/g以上。具體實施例方式下面結合具體實施例對本專利技術作更進一步的說明，以便本領域的技術人員更了解本專利技術，但并不因此限制本專利技術。以下實施例中采用的菌株紅曲霉菌Monascus sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC NO. 6807，該菌株在麥芽汁培養基上呈現煙灰色，底色呈現粉色，在顯微鏡下觀察到該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規則。實施例1 一種，包括下述的步驟 a.菌種誘變 出發菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結合，將三種出發菌株培養至菌齡30小時，進行細胞質分解，質解條件為25°C，時間2. 5小時，質解酶系統包括O. 1%溶菌酶，O. 3%蝸牛酶和O. 3%纖維素酶，將質解的紅曲菌原生質在距離15w紫外燈下25厘米，照射80-100秒，使致死率達88%_91% ；b.分離將誘變后菌種做平板分離，平板培養基如下，蛋白胨O. 5%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2 %，氯化鈉O. 2%，瓊脂1%，28°C培養65小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩定后進行選定；c.制曲加入麩皮60%，玉米面10%，大豆粉3%，磷酸二氫鉀O.01%,加水60%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30°C，無菌環境下接種操作，在通風曲床30°C培養72小時，測定酶活力。實施例2a.菌種誘變出發菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結合，將三種出發菌株培養至菌齡36小時，進行細胞質分解，質解條件為28°C，時間2. 5-3小時，質解酶系統包括O. 3%溶菌酶，O. 5%蝸牛酶和O. 5%纖維素酶，將質解的紅曲菌原生質在距離紫外燈下29厘米，照射80-100秒，致死率達88%-91% ；b.分離將誘變后菌種做平板分離，平板培養基如下，蛋白胨1%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2. 5%，氯化鈉O. 5%，瓊脂2%，30°C培養72小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩定后進行選定；c.制曲加入麩皮80 %，玉米面15%，大豆粉5%，磷酸二氫鉀O.02%,加水80%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-35°C，無菌環境下接種操作，在通風曲床30°C培養72小時，干燥至水分< 20%，測定酶活力。實施例3一種，包括下述的步驟a.菌種誘變出發菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結合，將三種出發菌株培養至菌齡40小時，進行細胞質分解，質解條件為300C，時間3小時，質解酶系統包括5%溶菌酶，1%蝸牛酶本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種紅曲霉生產酯化酶制劑的方法，其采用的菌株紅曲霉菌Monascus?sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC?NO.6807。

【技術特征摘要】
1.一種紅曲霉生產酯化酶制劑的方法，其采用的菌株紅曲霉菌ifoaasctts sp.于2012 年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC NO. 6807。2.如權利要求1所述的紅曲霉生產酯化酶制劑的方法，其特征在于，所采用的菌株紅曲霉菌sp.在麥芽汁培養基上呈現煙灰色，底色呈現粉色，在顯微鏡下觀察該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規則。3.—種如權利要求1所述的紅曲霉生產酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟a.菌種誘變出發菌株為煙灰色紅曲霉菌株，紫紅色紅曲霉菌株，橙色紅曲霉菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結合，將三種出發菌株培養至菌齡30-40小時，進行細胞質分解，質解條件為25-30°C，時間2. 5-3小時，質解酶系統包括O. 1_5%溶菌酶，O. 3_1%蝸牛酶和O.3-0. 8%纖維素酶，將質解的紅曲菌原生質在距離15w紫外燈下25厘米，照射80-100秒， 使致死率達88%-91% ；b.分離將誘變后菌種做平板分離，平板培養基如下，蛋白胨O. 5-1. 2%，聚乙烯醇橄欖油乳化液 2-3%，氯化鈉O. 2-1%，瓊脂1-5%，28-32°C培養65-80小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩定后進行選定；c....

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙吉興，李耀，
申請(專利權)人：山東中惠食品有限公司，趙吉興，
類型：發明
國別省市：