一種免疫球蛋白G的生產方法及其應用技術

本發明專利技術涉及一種免疫球蛋白G的生產方法及其應用，具體地，包括步驟：全血抗凝、離心分離、稀釋、FeCl3沉淀反應、澄清、再次離心分離、納濾脫鹽、包埋、噴霧干燥等步驟。本發明專利技術不但解決了動物副產物豬血資源浪費及環境污染等問題，而且通過連續的大生產加工工藝，極大提升了豬血的利用價值，所制備的免疫球蛋白G經ELISA活性鑒定，其活性可達到90％以上，且對幼小動物的腸道疾病有特殊療效，可用于弱質動物群體免疫增強劑，也是機體正常營養補充劑。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物
，具體地，涉及一種免疫球蛋白G的生產方法及其應用。
技術介紹
我國的動物血資源非常豐富，每年約生產230萬噸的動物血液，但是大部分未被合理加工使用，只有小部分加工成血漿蛋白粉和血球蛋白粉類的中檔產品，因此動物血類產品附加值很低，造成極大的浪費。免疫球蛋白G普遍存在于哺乳動物和人類的血液、組織液和外分泌液中，并廣泛用于生物醫學領域。動物血中具有豐富的免疫球蛋白，其含量一般為25-35%。免疫球蛋白是保護機體抵抗外界感染的免疫成分，是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體，具有抗菌性、抗毒性和抗病毒性，在抗感染中起到主力軍作用。目前免疫球蛋白的分離方法有硫酸氨分級沉淀法、乙醇分離法，這些方法都用于免疫球蛋白的粗提，進一步純化的方法主要包括離子交換法、凝聚過濾法、親合色譜法和超濾法。有時也將幾種方法結合使用。目前，國內外生產免疫球蛋白產品通常是通過硫酸銨沉淀、乙醇沉淀等實驗室試制方法，生產工藝繁瑣，生產規模較小，不適合大工業生產。因此本領域迫切需要開發一種適于工業化生產、工藝先進簡便、環保的從動物血中規模化生產免疫球蛋白G產品的方法。
技術實現思路
本專利技術的目的就是提供一種免疫球蛋白G的生產方法及其應用。在本專利技術的第一方面，提供了一種免疫球蛋白G的制備方法，包括步驟(a)將含有免疫球蛋白G的原料與抗凝劑混合，獲得抗凝全血；(b)對步驟(a)獲得的抗凝全血進行離心，獲得輕液血漿和重液血球；(c)將步驟(b)獲得的輕液血漿與FeCl3溶液混合，進行沉淀反應，獲得沉淀反應液；(d)對步驟(C)獲得沉淀反應液進行澄清，獲得含有免疫球蛋白G的輕液；(e)調節步驟(d)獲得的輕液的pH至8-12，離心，獲得含有免疫球蛋白G的上清液。在另一優選例中，步驟(a)所述的原料來自于人或非人哺乳動物。在另一優選例中，步驟(a)所述的原料來自于豬、牛、羊，或鼠。在另一優選例中，步驟(a)所述的抗凝劑選自下組⑴草酸鉀；(ii)檸檬酸鈉；(iii)草酸鉀和檸檬酸鈉；(iv)草酸鉀、氯化鈉、檸檬酸鈉。在另一優選例中，草酸鉀氯化鈉檸檬酸鈉的比例為3-5 2-3 5-7。在另一優選例中，抗凝劑的濃度為2_20wt%，較佳地為5_15wt%，更佳地為IOwt % ο在另一優選例中，抗凝劑的添加量為原料體積的2-20% (w/v)，較佳地為5-15%(w/v);更佳地為 10% (w/v)。在另一優選例中，步驟(b)的離心條件為轉速為1000-20000rpm。在另一優選例中，步驟(b)的離心條件為轉速16000rpm。在另一優選例中，步驟(C)中FeCl3溶液加入輕液血漿后，FeCl3的終濃度為l_8mmol/L0在另一優選例中，FeCl3的終濃度為5mmol/L。在另一優選例中，FeCl3加入后，輕液血漿的pH值為3. 0-5. 5，較佳地為5. O。在另一優選例中，沉淀反應的時間為I 4小時；較佳地為2小時。在另一優選例中，步驟(b)和步驟(C)之間還包括步驟(b’ ):將步驟(b)獲得的輕液血漿進行稀釋。 在另一優選例中，用蒸餾水對步驟(b)獲得的輕液血漿進行稀釋。在另一優選例中，輕液血漿的稀釋倍數為2-15倍，較佳地10倍。在另一優選例中，步驟⑷用碟片離心機進行澄清。在另一優選例中，碟片離心機的轉速為6000 12000rpm，較佳地lOOOOrpm。在另一優選例中，步驟(e)后還包括步驟(f):對步驟(e)獲得的上清液進行過濾，獲得含有免疫球蛋白G的濃縮液產品。在另一優選例中，所述的過濾為納濾膜過濾。在另一優選例中，所述的納濾膜截留分子量為2Da_100kDa，較佳地，截留分子量為10-5000Da，更佳地，截留分子量為lOOODa。在另一優選例中，所述的納濾膜為聚酰胺材質納濾膜、卷式膜或選管式膜。在另一優選例中，步驟(f)后還包括步驟(g):對步驟(f)獲得的含有免疫球蛋白G的濃縮液進行包埋和干燥，獲得含有免疫球蛋白G的粉末產品。在另一優選例中，所述的包埋為用海藻酸鈉溶液進行包埋，較佳地，海藻酸鈉溶液的濃度為5 30wt%，更佳地為15wt%。在另一優選例中，海藻酸鈉的添加量為濃縮液的0. 5% 10% (w/v)，較佳地3%(w/V)。 在另一優選例中，所述的干燥為噴霧干燥法。在本方面的第二方面，提供了一種免疫球蛋白G，所述的疫球蛋白G具有以下特征(I)辛酸含量低于0. 001 % ;(II)免疫球蛋白G的活性彡90% ;和(III)使用本專利技術第一方面所述的方法制備獲得。在另一優選例中，所述的免疫球蛋白G是用含有下述步驟的方法獲得(a)將含有免疫球蛋白G的原料與抗凝劑混合，獲得抗凝全血；(b)對步驟(a)獲得的抗凝全血進行離心，獲得輕液血漿和重液血球；(c)將步驟(b)獲得的輕液血漿與FeCl3溶液混合，進行沉淀反應，獲得沉淀反應液；(d)對步驟(C)獲得沉淀反應液進行澄清，獲得含有免疫球蛋白G的輕液；(e)調節步驟(d)獲得的輕液的pH至8-12，離心，獲得含有免疫球蛋白G的上清液；(f)對步驟(e)獲得的上清液進行過濾，獲得含有免疫球蛋白G的濃縮液產品；(g)對步驟(f)獲得的含有免疫球蛋白G的濃縮液進行包埋和干燥，獲得含有免疫球蛋白G的粉末產品。在本專利技術的第三方面，提供了一種含有本專利技術第二方面所述免疫球蛋白G的組合物。在另一優選例中，所述的組合物為飼料組合物、藥物組合物或食品組合物。在另一優選例中，所述的組合物用于⑴降低腹瀉率；(ii)增加血液免疫球蛋白含量；(iii)治療腸道疾病。應理解，在本專利技術范圍內中，本專利技術的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。 附圖說明下列附圖用于說明本專利技術的具體實施方案，而不用于限定由權利要求書所界定的本專利技術范圍。圖1顯示了生產免疫球蛋白G產品的流程圖。具體實施例方式本專利技術人經過廣泛而深入的研究，首次建立一種適于工業化生產、工藝先進簡便的從動物血中規模化生產免疫球蛋白G產品的方法。所述方法包括步驟全血抗凝、離心分離、稀釋、沉淀反應、再離心分離、納濾脫鹽、包埋、噴霧干燥等步驟。具體地，本專利技術人意外地發現，采用FeCl3的方法對含有免疫球蛋白G的濃縮液進行沉淀反應，獲得的免疫球蛋白G產品不僅純度高，而且不影響免疫球蛋白G的活性。術語如本文所用，術語“含有”包括“具有(comprise) ”、“基本上由...構成”和“由..·構成”。如本文所用，術語“以上”和“以下”包括本數，例如“ 80 %以上“指彡80 %，“ 2 %以下”指彡2%。免疫球蛋白G如本文所用，術語“免疫球蛋白”是指一種具有抗體活性或化學結構上與抗體相似的球蛋白。免疫球蛋白是一類重要的免疫效應分子，由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈所組成，在體內以兩種形式存在可溶性免疫球蛋白存在于體液中，具有抗體活性，參與體液免疫；膜型的免疫球蛋白是B細胞抗原受體。免疫球蛋白可以分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類。人體血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，占總免疫球蛋白的70-75%，分子量約為150KDa，含糖量為2 3%。人體血清免疫球蛋白IgG是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體，它僅以單體形式存在，它能夠本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種免疫球蛋白G的制備方法，其特征在于，包括步驟：(a)將含有免疫球蛋白G的原料與抗凝劑混合，獲得抗凝全血；(b)對步驟(a)獲得的抗凝全血進行離心，獲得輕液血漿和重液血球；(c)將步驟(b)獲得的輕液血漿與FeCl3溶液混合，進行沉淀反應，獲得沉淀反應液；(d)對步驟(c)獲得沉淀反應液進行澄清，獲得含有免疫球蛋白G的輕液；(e)調節步驟(d)獲得的輕液的pH至8?12，離心，獲得含有免疫球蛋白G的上清液。

【技術特征摘要】
1.一種免疫球蛋白G的制備方法，其特征在于，包括步驟 (a)將含有免疫球蛋白G的原料與抗凝劑混合，獲得抗凝全血； (b)對步驟(a)獲得的抗凝全血進行離心，獲得輕液血漿和重液血球； (c)將步驟(b)獲得的輕液血漿與FeCl3溶液混合，進行沉淀反應，獲得沉淀反應液； (d)對步驟(c)獲得沉淀反應液進行澄清，獲得含有免疫球蛋白G的輕液； (e)調節步驟(d)獲得的輕液的pH至8-12，離心，獲得含有免疫球蛋白G的上清液。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(a)所述的原料來自于人或非人哺乳動物。3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(a)所述的抗凝劑選自下組 ⑴草酸鉀； ( )檸檬酸鈉； (iii)草酸鉀和檸檬酸鈉； (iv)草酸鉀、氯化鈉、檸檬酸鈉。4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(b)的離心條件為轉速為1000-20000rpmo5.如權利要求1所述的方...

【專利技術屬性】
技術研發人員：成國祥，江國永，于偉，
申請(專利權)人：上海杰隆生物制品股份有限公司，
類型：發明
國別省市：