一種節(jié)旋藻蛋白的分離純化方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于生化分離純化領(lǐng)域，特別涉及一種節(jié)旋藻蛋白的分離純化方法。將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24-72小時離心，收集上清液；將上清液經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液pH達到6.5-7.2，并進行攪拌；上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入水經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節(jié)旋藻蛋白。通過本發(fā)明專利技術(shù)方法所得藥品級節(jié)旋藻蛋白，其純度（A620/A280）大于3.0，其中藻藍蛋白含量大于61.5％，別藻藍蛋白含量小于3％，其他蛋白含量小于2％。本發(fā)明專利技術(shù)方法生產(chǎn)成本低，簡單有效，適合制備藥品級節(jié)旋藻蛋白。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生化分離純化領(lǐng)域，特別涉及。
技術(shù)介紹
海藻蛋白存在于藍藻，紅藻，以及部分隱藻和甲藻中。對節(jié)旋藻蛋白生物活性研究表明，節(jié)旋藻蛋白具有明顯的抗腫瘤、消炎等作用，同時節(jié)旋藻蛋白，能增強人體免疫功能、抗氧化、抗衰老，達到保健延壽，青春常在的功效。節(jié)旋藻蛋白不但是優(yōu)質(zhì)醫(yī)藥中間體，同時可作為醫(yī)藥、保健原料，廣泛用于保健食品及醫(yī)藥領(lǐng)域。其主要功能1.抗輻射節(jié)旋藻蛋白能顯著地減輕和逐漸消除輻照、化療對血白細(xì)胞和骨髓細(xì)胞的損傷，并能加速外周血白細(xì)胞和骨髓有核細(xì)胞的恢復(fù)；2.抗癌節(jié)旋藻蛋白能顯著抑制癌細(xì)胞生長，可用于癌癥的防治。3.調(diào)節(jié)免疫 節(jié)旋藻蛋白能提高淋巴細(xì)胞活性，通過淋巴系統(tǒng)提高機體免疫功能，全面增強機體的防病、抗病能力；4.促進造血節(jié)旋藻蛋白對骨髓造血功能具有刺激作用，因而對白血病和再生障礙性貧血等血液頑癥有著積極的輔助治療作用；5.延緩衰老等由上述作用可知，節(jié)旋藻蛋白具有極大的開發(fā)潛力。但目前由于大規(guī)模分離純化節(jié)旋藻蛋白的技術(shù)還未成熟，傳統(tǒng)的節(jié)旋藻蛋白制備方法主要是凍融法，硫酸銨鹽析，上各種層析柱，工藝繁瑣，得率低，成本高，價格昂貴，并且不適合工業(yè)化生產(chǎn)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供。為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案為，步驟I)將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24-72小時離心，收集上清液；步驟2)將上清液經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液pH達到6.5-7. 2，并進行攪拌；步驟3)上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入水經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節(jié)旋藻蛋白。所述步驟I)按體積比1:15-30將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24—72小時，再以18000-22000g離心20-30分鐘，收集上清液。所述步驟2)將上清液經(jīng)50KD的濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液中甲殼胺終濃度為O. 25—0. 35%，并用堿調(diào)節(jié)混合液中pH達到6. 5-7. 2，同時進行攪拌15-30min是混合液充分混勻。所述加入堿濃度在40_80g/L ;堿為氫氧化鈉或氫氧化鉀。所述步驟3)上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入其體積2— 3倍水經(jīng)50KD的濾膜超濾濃縮，所得濃縮液再次加入其體積2-3倍水再次進行超濾濃縮，超濾濃縮共進行4-9次，進而充分超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節(jié)旋藻蛋白。所述濃縮液噴霧干燥具體為噴霧干燥的進風(fēng)溫度為150— 200°C,出風(fēng)溫度為70-90。。。所述藥品級節(jié)旋藻蛋白，其中藻藍蛋白的純度大于3.0，含量大于61.5%，別藻藍蛋白的含量小于3%，其它蛋白的含量小于2%。本專利技術(shù)所具有的優(yōu)點目前國內(nèi)尚無大量制備藥品級節(jié)旋藻蛋白的生產(chǎn)工藝，本專利技術(shù)提供的藥品級節(jié)旋藻蛋白制備方法，提取出的蛋白純度高，提取率高達藻粉干重的4%，是目前常用提取節(jié)旋藻蛋白得率的3倍，工藝簡單有效，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)量大，簡單有效，且適合大規(guī)模制備藥品級節(jié)旋藻蛋白等特點。由本方法制備的節(jié)旋藻蛋白，節(jié)旋藻蛋白的藻藍蛋白純度大于3. 0，含量大于61. 5%，別藻藍蛋白的含量小于3%，其它蛋白含量小于2%，水溶性好，容易被人體消化和吸收。因此，本專利技術(shù)提供的藥品級節(jié)旋藻蛋白制備方法為其廣泛應(yīng)用提供基礎(chǔ)。附圖說明書 圖1為本專利技術(shù)實施例提供的藥品級節(jié)旋藻蛋白制備方法流程圖。圖2為本專利技術(shù)實施例提供制備所得藥品級節(jié)旋藻蛋白的吸收光譜圖。具體實施例方式本專利技術(shù)藥品級節(jié)旋藻蛋白制備方法步驟包括，參見圖1 :步驟I，將市售的藻粉加入到PBS中，攪拌均勻；步驟2，將浸泡好的藻液離心，并取上清液；步驟3，把得到的上清液進行超濾濃縮，得粗提濃縮液；步驟4，向得到的粗提濃縮液中加入甲殼胺，并用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，攪拌均勻，攪拌得混合物；步驟5，將混合物離心，取上清；步驟6，上清液中加入去離子水，超濾置換鈉離子后，得到純化濃縮液；步驟7，將純化濃縮液噴霧干燥，制得藥品級節(jié)旋藻蛋白粉。實施例1藥品級節(jié)旋藻蛋白制備方法步驟如下(I)取藻粉1kg，加入20升PBS，攪拌均勻進行浸泡，常溫下放置48小時；(2)將浸泡好的藻粉溶液，經(jīng)管式離心機離心(離心力20000g，20分鐘)，取上清液；(3)把上清液超濾濃縮，選用50KD的超濾膜設(shè)備，壓力控制在O.1Mpa,流量為20升/小時，濃縮至節(jié)旋藻蛋白濃度大于O. 2mg/mL,純度大于O. 9,得超濾濃縮液；上述濃度=(A62Q-O. 474*A65(I)/5. 34，純度=A62(i/A28(i，超濾濃縮至濃度大于 O. 2mg/ml，純度大于 O. 9，得粗提濃縮液(4)超濾濃縮液中加入甲殼胺溶液，使其甲殼胺含量為O. 29%，并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 9，攪拌20min,得混合物；(5)把混合物在20000g條件下離心20分鐘，取其上清液，得粗提液；(6)向粗提液中加入去離子水，先加入去離子水的量為粗提液體積的3倍，使用50KD的超濾膜設(shè)備，超濾濃縮至原體積；然后再加入濃縮液3倍體積的去離子水，再超濾濃縮至原體積，繼續(xù)加入濃縮液3倍體積的去離子水濃縮，經(jīng)過反復(fù)濃縮至節(jié)旋藻蛋白濃度大于O. 2mg/ml，純度大于3. 3，收集純化濃縮液。(7)把收集得到的純化濃縮液進行噴霧干燥，即得節(jié)旋藻蛋白(參見圖2)。噴霧干燥條件為進風(fēng)溫度為150°C,出風(fēng)溫度為70°C ；根據(jù)上述方法，制得的節(jié)旋藻蛋白，藻藍蛋白純度(A62tZA28tl)大于3. 0，達到藥品級要求，并且藻藍蛋白的含量大于61.5%，別藻藍蛋白含量小于3%，其它蛋白含量小于2%。實施例2藥品級節(jié)旋藻蛋白制備步驟方法如下(I)取藻粉1kg，加入15升PBS，攪拌均勻進行浸泡，常溫下放置24小時； (2)將浸泡好的藻粉溶液，經(jīng)管式離心機離心，離心力18000g，30分鐘，取上清；(3)把上清液超濾濃縮，選用50KD的超濾膜設(shè)備，壓力控制在O.1Mpa,流量為20升/小時，濃縮至節(jié)旋藻蛋白濃度在O. 2mg/ml,純度大于O. 9,得超濾濃縮液；(4)超濾濃縮液中加入甲殼胺溶液，使其甲殼胺含量為O. 25%，并用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH至6. 5,攪拌15min,得混合物；(5)把混合物在ISOOOg條件下離心30分鐘，取其上清液，得粗提液；(6)粗提液中加入去離子水，先加入粗提液體積的3倍，使用超濾膜設(shè)備，超濾濃縮至原體積；然后再加入濃縮液的3倍去離子水，再超濾濃縮至原體積，繼續(xù)加入濃縮液的3倍去離子水，濃縮至節(jié)旋藻蛋白濃度大于O. 2mg/ml,純度大于3. 3,收集純化濃縮液。(7)把收集得到的純化濃縮液進行噴霧干燥，即得節(jié)旋藻蛋白。噴霧干燥條件為進風(fēng)溫度為150°C，出風(fēng)溫度為90°C ；根據(jù)上述方法，制得的節(jié)旋藻蛋白，藻藍蛋白純度大于3. O,達到藥品級，并且藻藍蛋白的含量大于61. 5%，別藻藍蛋白含量小于3%，其他蛋白含量小于2%。實施例3藥品級節(jié)旋藻蛋白制備方法步驟如下(I)取藻粉1kg，加入30升PBS，攪拌均勻進行浸泡，室溫下放置72小時；(2)將浸泡好的藻液，經(jīng)管式離心機離心，離心力22000g離心20分鐘，取上清；(3)把上清液超濾濃縮，選用50KD的超濾膜設(shè)備，壓力控制在O本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種節(jié)旋藻蛋白的分離純化方法，其特征在于：步驟1）將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24?72小時離心，收集上清液；步驟2）將上清液經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液pH達到6.5?7.2，并進行攪拌；步驟3）上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入水經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節(jié)旋藻蛋白。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種節(jié)旋藻蛋白的分離純化方法，其特征在于 步驟I)將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24-72小時離心，收集上清液； 步驟2)將上清液經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液pH達到6.5-7. 2，并進行攪拌； 步驟3)上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入水經(jīng)濾膜進行超濾濃縮，超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節(jié)旋藻蛋白。2.按權(quán)利要求1所述的節(jié)旋藻蛋白的分離純化方法，其特征在于所述步驟I)按體積比1:15-30將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24-72小時，再以18000-22000g離心20-30分鐘，收集上清液。3.按權(quán)利要求1所述的節(jié)旋藻蛋白的分離純化方法，其特征在于所述步驟2)將上清液經(jīng)50KD的濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液中甲殼胺終濃度為0.25-0. 35%,并用堿調(diào)節(jié)混合液中pH達到6. 5—7. ...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉冰，秦松，張允允，邵明飛，宋璐非，谷洋洋，朱義松，
申請(專利權(quán))人：中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：