模板法制備診療協同納米顆粒釋放體系的方法技術

本發明專利技術涉及一種模板法制備診療協同納米顆粒釋放體系的方法，包括如下步驟：制備AAO模板，制備診療協同納米顆粒，去除模板，純化納米顆粒，合成表面活性劑，制備診療協同納米顆粒釋放體系。本發明專利技術實現了一種或多種造影劑和藥物同時且定量成比例的進入同一劑型并精確控制制備具有最佳治療效果的診療協同體系的目的，是一種操作簡單、成本低、產率高、納米藥物組分和比例可調、形貌可控、尺寸小、粒徑分布窄、對環境無污染的納米診療協同體系制備方法，為新一代高載藥量的診療協同制劑的研制及應用提供物質基礎與技術保障，可用于癌癥診斷和治療領域，具有廣泛的應用前景。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種診療協同釋放體系的制備方法，具體涉及一種。
技術介紹
癌癥是嚴重危害人類健康和生命的疑難疾患，居疾病死亡率之首，其早期診斷和后期治療都至為重要。在早期診斷方面，癌癥成像學檢測法可以對小體積腫瘤的位置、范圍、形態進行精確的定位和判斷，以確定原發部位癌灶及有無轉移。在后期治療方面，化學療法占較大比例，近40年來發展很快，療效不斷提高。但目前的抗癌藥物和成像造影劑大多存在水溶性差、對腫瘤組織的選擇性差、療效低、毒性大、使用單一造影劑容易產生錯誤的診斷結果、使用單一藥物治療易產生多藥耐藥性等缺點，限制了臨床應用，并難以實現劑型的多樣化。增加疏水藥物和造影劑的水溶性、提高造影成像效果、克服耐藥性具有十分重要的現實意義和研究價值，是醫藥化學領域亟待解決的問題。為了增加癌癥診斷和治療效果并減小毒副作用，全球許多科學家都競相研發最新型的納米藥物載體材料和技術，致力于把疏水性藥物或造影劑通過某些載體包裹以對其進行增溶。近年來，隨著生物技術的不斷發展，各種新型的藥物載體層出不窮，其制備工藝逐步完善，作用機制進一步闡明、劑型逐步改善、毒性和免疫原性大幅降低，特別是大量實驗數據證明大多數的藥物載體可以提高藥物治療指數和造影劑的成像效果、降低藥物毒性、減小藥物副作用、減小劑量。盡管藥物載體發展迅速，且具備了許多優點和特點，其臨床應用并不像預期的那樣廣泛，主要原因在于載體的引入極大的降低了載藥量、載體的存在給機體增加了額外的代謝負擔、載體的合成成本高且耗時，更重要的是，具有協同診斷治療效果的一種或多種造影劑和藥物很難同時且定 量成比例的進入同一劑型，使得具有最佳治療效果的納米診療體系無法精確的控制制備。另外，載體基藥物在體液環境中的分布和穩定性也面臨著極大的挑戰。隨著癌癥診斷和治療業的發展，制備高載藥量、尺寸均一且比例可控的多組分診療協同體系成為必要。
技術實現思路
本專利技術提供了一種制備診療協同納米顆粒釋放體系的方法，以達到使一種或多種造影劑和藥物同時且定量成比例的進入同一劑型并精確控制制備具有最佳治療效果的診療協同納米顆粒釋放體系的目的。為了實現上述目的，本專利技術采用的技術手段如下，包括如下步驟I)制備AAO模板；2)制備診療協同納米顆粒對AAO模板進行表面改性處理；選擇具有協同效應的疏水藥物和成像造影劑，在有機溶劑中配制成濃度為I毫摩爾/升至飽和的診療協同溶液，將表面改性處理后的AAO模板浸泡在診療協同溶液中> 5分鐘，取出硬模板晾干，重復浸泡和晾干步驟彡10次；3)去除模板用O. l-10mol/L的NaOH溶液、5wt% 50wt%的H3PO4溶液或磷酸+鉻酸混合酸溶解去除模板；4)純化納米顆粒用水稀釋并離心分離去除模板后的溶液，棄掉上層清液，得到單分散疏水診療協同納米顆粒；5)合成表面活性劑以末端為氨基的聚乙二醇(以后簡稱PEG)為親水端，含有18個碳鏈長度的馬來酸酐(以下簡稱PMHC18)作為疏水端，通過NH2和COOH的縮合反應，制備PEG-PMHC18的兩親性表面活性劑；6)制備診療協同納米顆粒釋放體系將步驟4)所制備的診療協同納米顆粒溶于水中，制得診療協同納米顆粒水溶液；將步驟5)合成的表面活性劑溶于水中，制得表面活性劑水溶液；將診療協同納米顆粒水溶液與表面活性劑水溶液混合，超聲、震蕩或機械攪拌使得兩者通過疏水相互作用、靜電作用和/或范德華力作用實現表面活性劑對診療協同納米顆粒的穩定包裹，即納米顆粒的功能化，制得診療協同納米顆粒釋放體系。優選地，所述聚乙二醇的分子量為2000-20000。優選地，步驟I)中，制備AAO模板的條件如下取純度> 99. 999%的鋁片并對其進行預處理，電解液為3wt%-20wt%的硫酸、磷酸或草酸溶液；加入適量乙醇調控模板的制備過程；氧化電壓20-200V，氧化溫度0-32°C，氧化時間為O. 5-12小時。優選地，上述預處理包括退火、去油潰、清洗和拋光步驟。優選地，步驟2)中，疏水藥物為一種或兩種以上，成像造影劑為一種或兩種以上。優選地，步驟2)中，`所述有機溶劑選自下列物質中的一種或幾種乙醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜。優選地，步驟2 )中，所述AAO表面改性是指將AAO置于下列物質中的一種或多種中進行超聲處理8-12分鐘水、乙醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜中；且表面改性最后選擇的溶劑與診療協同溶液中的有機溶劑相同。優選地，步驟4)中，所述離心轉速為4000-24800轉/分鐘。優選地,步驟6)中，所述診療協同納米顆粒水溶液的濃度為10umol/L-1000umol/L ；優選地，步驟6)中，所述表面活性劑水溶液的濃度為0. lmg/mL-lOOmg/mL ；優選地，步驟6)中，所述診療協同納米顆粒水溶液與表面活性劑水溶液的體積比為 1:10-10:1。本專利技術的有益效果是I)實驗條件溫和，操作簡單，不需要使用大量的毒性溶劑和添加劑，不需要復雜的合成和制備過程；2)制備時間短，效率高；3)組分、形貌和尺寸均勻可調且易于控制(其中納米顆粒的粒徑為10_200nm，納米棒和納米管的直徑10-200nm，長度500nm_100 μ m)，適合產業化生產；4)載藥量高(大于90%)；5)該方法應用面廣，適用于各種疏水藥物和成像造影劑；6)使一種或多種造影劑和藥物同時且定量成比例的進入同一劑型；7)能夠精確控制具有最佳治療效果的診療協同釋放體系的制備過程。綜上所述，本專利技術使一種或多種造影劑和藥物同時且定量成比例的進入同一劑型并精確控制制備具有最佳治療效果的診療協同釋放體系，操作簡單、成本低、產率高、體系組分和比例可調、形貌可控、尺寸小、粒徑分布窄、對環境無污染的納米診療協同體系制備方法，為新一代高載藥量診療制劑的研制及應用研究提供物質基礎與技術保障，可用于癌癥診斷和治療領域，具有廣泛的應用前景。附圖說明本專利技術所包含的附圖用于提供對本專利技術的進一步理解。在附圖中圖1 :空白AAO模板的掃描電子顯微鏡(SEM)圖片(a.正面圖，b.側面圖)；圖2 ΑΑ0模板法制備的吉非替尼(GET)和4_( 二氰乙烯基)_2_叔丁基-6-(1，1,7, 7-四甲基久落尼定基-4-乙烯基)-4H-吡喃(DCJTB) (1:1)納米顆粒的SEM圖片；圖3 =AAO模板法制備的GET和DCJTB (1:1)診療協同納米顆粒釋放體系的儲存穩定性數碼照片表征結果(左瓶功能化的診療協同納米顆粒釋放體系；右瓶未功能化的診療協同納米顆粒體系);圖4 =AAO模板法制備的GET和DCJTB (1:1)的儲存穩定性表征(a.透射電子顯微鏡，b.動態光散射)；圖5 =AAO模板法制備的GET和DCJTB (1:1)儲存穩定性的紫外可見吸光光度法表征結果；圖6 :ΑΑ0模板法制備的GET和DCJTB (1:1)的細胞內吞結果(激光共聚焦熒光顯微鏡測試結果，a. Omin, b.1Omin, c. 30min, d. lh, e. 2h)； 圖7 ΑΑ0模板法制備的GET和DCJTB (1:1)的細胞毒性(MTT比色法測試結果)；圖8 =PEG-PMHC18的生物相容性研究(MTT比色法測試結果)。圖9本文檔來自技高網...

【技術保護點】
模板法制備診療協同納米顆粒釋放體系的方法，其特征在于，包括如下步驟：?1）制備AAO模板；?2）制備診療協同納米顆粒：對AAO模板進行表面改性處理；選擇具有協同效應的疏水藥物和成像造影劑，在有機溶劑中配制成濃度為1毫摩爾/升至飽和的診療協同溶液，將表面改性處理后的AAO模板浸泡在診療協同溶液中≥5分鐘，取出硬模板晾干，重復浸泡和晾干步驟≥10次；?3）去除模板：用0.1?10mol/L的NaOH溶液、5wt%~50wt%的H3PO4溶液或磷酸+鉻酸混合酸溶解去除模板；?4）純化納米顆粒：用水稀釋并離心分離去除模板后的溶液，棄掉上層清液，得到單分散疏水診療協同納米顆粒；?5）表面活性劑的合成：以末端為氨基的PEG為親水端，含有18個碳鏈長度的馬來酸酐為疏水端，通過NH2和COOH的縮合反應，制備PEG?PMHC18的兩親性表面活性劑；?6)診療協同納米顆粒釋放體系的制備：將步驟4）所制備的診療協同納米顆粒溶于水中，制得診療協同納米顆粒水溶液；將步驟5）合成的表面活性劑溶于水中，制得表面活性劑水溶液；將診療協同納米顆粒水溶液與表面活性劑水溶液混合，使兩個體系混合均勻，超聲、震蕩或機械攪拌實現表面活性劑對診療協同納米顆粒的穩定包裹，制得診療協同納米顆粒釋放體系。...

【技術特征摘要】
1.模板法制備診療協同納米顆粒釋放體系的方法，其特征在于，包括如下步驟1)制備AAO模板；2)制備診療協同納米顆粒對AAO模板進行表面改性處理；選擇具有協同效應的疏水藥物和成像造影劑，在有機溶劑中配制成濃度為I毫摩爾/升至飽和的診療協同溶液，將表面改性處理后的AAO模板浸泡在診療協同溶液中> 5分鐘，取出硬模板晾干，重復浸泡和晾干步驟彡10次；3)去除模板用0.l-10mol/L的NaOH溶液、5被% 50被％的H3PO4溶液或磷酸+鉻酸混合酸溶解去除模板；4)純化納米顆粒用水稀釋并離心分離去除模板后的溶液，棄掉上層清液，得到單分散疏水診療協同納米顆粒；5)表面活性劑的合成以末端為氨基的PEG為親水端，含有18個碳鏈長度的馬來酸酐為疏水端，通過NH2和COOH的縮合反應，制備PEG-PMHC18的兩親性表面活性劑；6)診療協同納米顆粒釋放體系的制備將步驟4)所制備的診療協同納米顆粒溶于水中，制得診療協同納米顆粒水溶液；將步驟5)合成的表面活性劑溶于水中，制得表面活性劑水溶液；將診療協同納米顆粒水溶液與表面活性劑水溶液混合，使兩個體系混合均勻，超聲、震蕩或機械攪拌實現表面活性劑對診療協同納米顆粒的穩定包裹，制得診療協同納米顆粒釋放體系。2.如權利要求1所述的模板法制備診療協同納米顆粒釋放體系的方法，其特征在于 優選地，步驟I)中，制備AAO模板的條件如下取純度> 99. 999%的鋁片并對其進行預處理，電解液為3wt%-20wt%的硫酸、磷酸或草酸溶液；加入適量乙醇調控模板的制備過程；氧化電壓20-200V，氧化溫度0-32°C，氧化時間為O. 5-12小時。3.如權利要求2所述的模板...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張曉宏，李亞楠，歐雪梅，
申請(專利權)人：中國科學院理化技術研究所，
類型：發明
國別省市：