一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法及其應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法及其應(yīng)用，經(jīng)過(guò)對(duì)保存編號(hào)CGMCC?NO.1.892的枯草芽孢桿菌（可分泌中性蛋白酶）在大豆液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后，10000轉(zhuǎn)/分離心30min,取沉淀,按1：10（W/W）與沸石粉混合,50℃烘干30min，研碎后過(guò)100目不銹鋼篩，即為一種微生態(tài)制劑——益生素菌粉，該產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌菌粉可直接作為微生態(tài)制劑（益生素）使用，用于提高飼料利用率、減少圈舍中氨氣濃度，或按0.1%～0.2%添加量制備成全價(jià)飼料。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)選取了一株可分泌蛋白酶的枯草芽孢桿菌，經(jīng)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，提取、干燥，研制成飼料級(jí)微生態(tài)制劑，可明顯提高飼料利用率、加快畜禽生長(zhǎng)速度、減少圈舍氨氣濃度。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專(zhuān)利技術(shù)涉及飼料添加劑領(lǐng)域，具體為一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
農(nóng)業(yè)部已批準(zhǔn)枯草芽孢桿菌可作為有益微生物(益生素)添加到飼料中使用。枯草芽孢桿菌種類(lèi)很多，有些可產(chǎn)生淀粉酶，有些可產(chǎn)生蛋白酶。目前雞、豬飼料中含有大量的蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)中一部分不能被完全消化吸收，造成浪費(fèi)，同時(shí)這些蛋白質(zhì)排出體外時(shí)，被分解產(chǎn)生氨氣，為畜禽圈舍的主要有毒有害氣體。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)針對(duì)以上不足之處，提供了一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法及其應(yīng)用，優(yōu)化了大豆液體培養(yǎng)基，枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法及其菌粉的制備方法，通過(guò)試驗(yàn)確定了枯草芽孢桿菌菌粉的最優(yōu)應(yīng)用方式，通過(guò)對(duì)其應(yīng)用，提高了飼料利用率，加快了畜禽生長(zhǎng)速度，減少了圈舍氨氣濃度。本專(zhuān)利技術(shù)解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法，使用保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892的分泌中性蛋白酶的枯草芽孢桿菌作為枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種，包括如下步驟將枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種接種在大豆液體培養(yǎng)基中搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，所述大豆液體培養(yǎng)基的主要成分是:大豆10 30 (g/L)，蔗糖10 20 (g/L)，食鹽5 10(g/L)，所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵溫度為30 40°C，發(fā)酵時(shí)間24 120h，pH值6. O 8.0，轉(zhuǎn)速為120 200r/min搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后，10000轉(zhuǎn)/分離心30min，取沉淀，按1:10 (W/W)與沸石粉混合，50°C烘干30min，研碎后過(guò)100目不銹鋼篩，即獲得飼料級(jí)益生素枯草芽孢桿菌菌粉。所述枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種按5 10% (V/V)接種于大豆液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵時(shí)間72h，pH值6. 5 7. 5，轉(zhuǎn)速為 150 r/min。所述飼料級(jí)益生素枯草芽孢桿菌菌粉每克菌粉活菌含量不低于108 CFU (菌落形成單位)。所述枯草芽孢桿菌菌粉可作為一種飼料原料，按O. 1% O. 2% (W/W)與飼料其他成分混合，生產(chǎn)雞、豬全價(jià)顆粒飼料。所述枯草芽孢桿菌菌粉即為一種飼料添加劑一一益生素，可按O. 1% O. 2% (ff/W)與雞、豬全價(jià)飼料混合后飼用。本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是1、提供了一種用于培養(yǎng)保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892的分泌中性蛋白酶的枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法及菌粉制備方法，在培養(yǎng)方法中優(yōu)化了大豆液體培養(yǎng)基配方，此種培養(yǎng)基更加適宜于此種枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng)，菌種成活率高，且培養(yǎng)基原料易于獲得，生產(chǎn)成本低；經(jīng)試驗(yàn)獲取了最優(yōu)的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件，明顯提高了枯草芽孢桿菌菌絲的生長(zhǎng)速度及產(chǎn)量；提供了 一種菌粉制備方法可提高菌粉的產(chǎn)出率及菌粉的質(zhì)量。3、提供了此種枯草芽孢桿菌菌粉的應(yīng)用方法，經(jīng)區(qū)域試驗(yàn)(中試)證明，枯草芽孢桿菌菌粉作為一種飼料原料可明顯提高飼料利用率，節(jié)約飼料3% 5%，(如肉仔雞的料肉比可從1.81:1降至1. 75:1);枯草芽孢桿菌菌粉作為飼料添加劑益生素與雞、豬全價(jià)飼料混合后飼用，加快了畜禽生長(zhǎng)速度，日增重可提高3% 5%(如30日齡肉仔雞日增重可從50g增至52g)、減少圈舍氨氣濃度，畜禽圈舍氨氣濃度下降50% 80% (如塑料大棚肉雞舍中氨氣濃度可從50ul/L下降至10ul/L)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)描述 實(shí)施例1 (I)制作大豆培養(yǎng)基將大豆按10% (W/V)浸泡在水中，室溫靜置8-12小時(shí)，用豆?jié){機(jī)將浸泡的大豆打碎，用雙層紗布過(guò)濾去渣，獲得豆?jié){，將豆?jié){濃度定容到10 g/L，按蔗糖10g/L,食鹽5g/L的比例將蔗糖和食鹽加入豆?jié){中，煮沸消毒30min，冷卻，備用。(2)接種將保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892的枯草芽孢桿菌凍干菌種(本專(zhuān)利技術(shù)所使用的保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892的枯草芽孢桿菌凍干菌種是從中國(guó)科學(xué)院微生物所菌種保藏中心購(gòu)得)在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線(xiàn)分離，平板培養(yǎng)基37°C培養(yǎng)8 12h，調(diào)取單個(gè)菌落，接入IOml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)8 12h，取發(fā)酵液，接入250ml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)8 12h，作為枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種。將此枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種按5% (V/V)接種于大豆培養(yǎng)基上搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)。(3)所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間24h，pH值6.0，轉(zhuǎn)速為120r/min，培養(yǎng)完成后，10000轉(zhuǎn)/分離心30min,取沉淀，按1:10 (W/W)與沸石粉混合，50。。烘干30min，研碎后過(guò)100目不銹鋼篩，即為飼料級(jí)益生素菌粉，所述飼料級(jí)益生素菌粉每克菌粉活菌含量為IO8 CFU。(4)應(yīng)用有以下兩種應(yīng)用方式 a.所述枯草芽孢桿菌菌粉可作為一種飼料原料，按O. 2% (W/W)與飼料其他成分混合，生產(chǎn)雞、豬全價(jià)顆粒飼料。b.所述枯草芽孢桿菌菌粉即為一種飼料添加劑益生素，可按O. 2% (W/W)與雞、豬全價(jià)飼料混合后飼用。實(shí)施例2 Cl)制作大豆培養(yǎng)基將大豆按10% (W/V)浸泡在水中，室溫靜置8 12小時(shí)，用豆?jié){機(jī)將浸泡的大豆打碎，用雙層紗布過(guò)濾去渣，獲得豆?jié){，將豆?jié){濃度定容到30 g/L,按蔗糖20 g/L，食鹽10g/L的比例將蔗糖和食鹽加入豆?jié){中，煮沸消毒30min，冷卻，備用。(2)接種將保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892的枯草芽孢桿菌凍干菌種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線(xiàn)分離，平板培養(yǎng)基37°C培養(yǎng)8 12h，調(diào)取單個(gè)菌落，接入IOml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)8 12h，取發(fā)酵液，接入250ml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)8 12h，作為枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種。將此枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種按10% (V/V)接種于大豆培養(yǎng)基上搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)。(3)所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時(shí)間120h，pH值8. 0，轉(zhuǎn)速為200r/min,培養(yǎng)完成后，10000轉(zhuǎn)/分離心30min,取沉淀，按1:10 (W/W)與沸石粉混合，50。。烘干30min，研碎后過(guò)100目不銹鋼篩，即為飼料級(jí)益生素菌粉，所述飼料級(jí)益生素菌粉每克菌粉活菌含量為IO6 CFU。(4)應(yīng)用有以下兩種應(yīng)用方式 a.所述枯草芽孢桿菌菌粉可作為一種飼料原料，按O. 1% (W/W)與飼料其他成分混合，生產(chǎn)雞、豬全價(jià)顆粒飼料。b.所述枯草芽孢桿菌菌粉即為一種飼料添加劑益生素，可按O. 1% (W/W)與雞、豬全價(jià)飼料混合后飼用。實(shí)施例3 (I)制作大豆培養(yǎng)基將大豆按10% (W/V)浸泡在水中，室溫靜置8-12小時(shí)，用豆?jié){機(jī)將浸泡的大豆打碎，用雙層紗布過(guò)濾去渣，獲得豆?jié){，將豆?jié){濃度定容到20 g/L，按蔗糖15g/L，食鹽8g/L的比例將蔗糖和食鹽加入豆?jié){中，煮沸消毒30min，冷卻，備用。(2)接種將保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892的枯草芽孢桿菌凍干菌種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線(xiàn)分離，平板培養(yǎng)基37°C培養(yǎng)8 12h，調(diào)取單個(gè)菌落，接入IOml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)8 12h，取發(fā)酵液，接入250ml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)8 12h，作為枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種。將此枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種按8% (V/V)接種于大豆培養(yǎng)基上搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)。(3)所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵溫度為35°C，發(fā)酵時(shí)間80h，pH值7，轉(zhuǎn)速為160r/min，本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法，其特征在于：使用保存編號(hào)為CGMCC?NO.1.892的分泌中性蛋白酶的枯草芽孢桿菌作為枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種，包括如下步驟：將枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種接種在大豆液體培養(yǎng)基中搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，所述大豆液體培養(yǎng)基的主要成分是：大豆10～30（g/L），蔗糖10～20（g/L），食鹽5～10（g/L），所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵溫度為30～40℃，發(fā)酵時(shí)間24～120h，pH值6.0～8.0，轉(zhuǎn)速為120～200r/min搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后，10000轉(zhuǎn)/分離心30min,取沉淀,按1：10（W/W）與沸石粉混合,50℃烘干30min,研碎后過(guò)100目不銹鋼篩，即獲得飼料級(jí)益生素枯草芽孢桿菌菌粉。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法，其特征在于使用保存編號(hào)為CGMCC NO.1. 892 的分泌中性蛋白酶的枯草芽孢桿菌作為枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種，包括如下步驟將枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種接種在大豆液體培養(yǎng)基中搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，所述大豆液體培養(yǎng)基的主要成分是大豆10 30 (g/L)，蔗糖10 20 (g/L)，食鹽5 10 (g/L)，所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵溫度為30 40°C，發(fā)酵時(shí)間24 120h，pH值6. O 8. 0，轉(zhuǎn)速為120 200r/min搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后，10000轉(zhuǎn)/分離心30min，取沉淀，按1:10(W/W)與沸石粉混合，50°C 烘干30min，研碎后過(guò)100目不銹鋼篩，即獲得飼料級(jí)益生素枯草芽孢桿菌菌粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌菌粉制備方法，其特征在于所述枯草芽孢桿菌生產(chǎn)菌種按5 10%...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：翟靜，常維山，吳磊，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：泰山醫(yī)學(xué)院，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：