本發明專利技術提出了一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑及其制備方法，每100mL抗凍劑中包括下列組分：酪蛋白1.0～3.0g、葡萄糖2.0～3.0g、乳糖1.0～2.0g、HEPES?BUFFER?3.0～6.0g、甘油2.0～3.0mL、卵黃2～4mL、青霉素45～55萬IU、慶大霉素4.5～5.5g、兩性霉素B?20～30mg，余量為HANK溶液，解決了現有技術中母畜繁殖周期長、人工授精受胎率低，驢的冷凍精液生產操作程度復雜，難度大的問題。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物
，特別是指。
技術介紹
精液冷凍保存與人工授精技術相結合，在現代畜牧業生產中發揮著巨大的作用。同時精液保存利用技術也是挖掘優秀種公驢繁殖潛能的重要手段；采用冷凍精液可提高種公驢利用效率，降低種公驢的飼養頭數；而且由于選優淘劣，投入凍精生產的種公驢生產性能和遺傳品質優良，加快了驢遺傳改良速度；人工授精技術還可減少生殖道疾病的發生與傳播，間接提高了母驢的受胎率；冷凍精液運輸方便，可使與配母驢不受地域限制，等于延長了種公驢的利用年限和使用地域。此外，目前世界多數國家，都已建立瀕危或珍稀動物精液基因庫，以冷凍精液的形式長期大量保存，以便將來隨時取用。2006年6月2日農業部第662號發文公告，宣布德州驢等138個畜禽品種為國家級畜禽遺傳資源保護品種。但由于驢為季節性發情動物、母畜繁殖周期長、人工授精受胎率低等原因，國內外對驢精液保存與冷凍技術一直未開展系統性的研究，也未取得顯著性的突破。現階段，驢繁殖主要采用本交方式，個別技術好的畜牧改良員有時也將采出的精液(鮮精)不稀釋或低倍稀釋(I 2 4)，立即給發情母驢輸精，它適用于母驢季節性發情較明顯，而且數量較多的地區。與本交相比，效率可提高5 — 10倍。但由于我國驢品種較多，養殖區分布較廣，多在山區或交通不便區域，且飼養方式多以散戶居多，母驢分布不集中，鮮精或低倍稀釋的精液人工授精技術推廣面積較少。此外，由于驢鮮精體外保存時間極短，幾小時后活力近乎喪失殆盡，這使得驢的鮮精人工授精技術受到時間、地點的極大限制。因此，驢繁殖生產中迫切需要保存時間更長、攜帶更為方便的優質公驢精液來改良全社會的驢生產群體。精液保存分為 常溫(15 °C 25 °C)保存、低溫保存(0°C 5°C)和冷凍(一79°C 一 196°C)保存三種方法。常溫保存技術研究開展的最早，相對比較成熟，但在常溫下，一方面微生物生長迅速會影響精液質量，另一方面常溫保存時精子活力下降較快。低溫保存技術相對冷凍保存而言操作簡單方便，成本低，但低溫保存技術需要既能提供營養又能保護精子的非滲透性低溫保護劑及稀釋液。冷凍保存是指將精液經過特殊處理后置于液氮或干冰中，可保存該物種種質資源數年甚至數十年，切實發揮良種公畜的遺傳資源。但由于不同公畜精子的生物學特性不同，其冷凍保存效果也存在很大的差別。如牛精液的冷凍保存技術比較成熟，尤其牛精液細管法程序生產已經普及；但羊精子凍后普遍存在情期受胎率不穩定、受胎率低、重復率低等諸多問題；而豬的精子因含脂量較高，脫水比較困難，冷凍-解凍后精子存在超微結構受到損傷(如精子膜、頂體和精子核泡化、損傷或破裂)、在雌性生殖道內壽命縮短和受精率低等問題，因而豬精液冷凍保存還一直處于試驗階段。目前國內外關于驢精液冷凍保存的研究很少，主要原因是一方面是驢的繁殖率低，妊娠期長；第二，由于不同的驢個體間其精液品質有明顯的差異，且驢精子本身對低溫打擊特別敏感，在冷凍解凍過程中極易損傷，因而冷藏和冷凍后的精液極大地降低了受胎率；第三，由于驢發情時間長，人工授精的時機掌握不準確造成其妊娠率低；最后，公驢每次平均射精量多達70ml，密度較稀，且精清中的電解質成分會促進精子早衰。因而，驢的冷凍精液生產操作程度復雜，難度大，嚴重制約著冷凍精液的應用。驢為馬屬動物，分布甚廣，遍及亞、非、拉各大洲。德州驢，是中國五大優良驢種之一，體格高大，結構勻稱，外形美觀，體型方正，頭頸軀干結合良好。是改良小型驢種及作為種間雜交的一個理想品種。因此生產中亟需進行德州驢精液的冷凍保存研究。抗凍劑在精液冷凍過程中是必不可少的成分。在冷凍過程中，抗凍劑的作用主要表現在以下幾個方面1.補充精子營養；2.減少精液粘稠度；3.降低異物對精子影響；4.緩和代謝產物對精子的危害作用；5.在冷凍過程中，保護精子，增強精子對低溫的抵抗力和抗氧化能力，減少精子的冷凍損傷。目前，在冷凍精液的制作過程中，常常選擇能夠抑制精子活動，減少能量損耗，延長精子壽命的抗凍劑。牛、羊、馬、豬精液冷凍保存的抗凍劑多用雞的卵黃，均取得了不錯的冷凍保存效果。一方面卵黃可降低精子在向4°C降溫過程中遭受冷休克的受損程度；另一方面卵黃價格便宜，取材方便。但是，并非卵黃中所有成分均對精子有益，如卵黃中高密度脂蛋白可抑制精子呼吸，降低精子活率；第二，卵黃屬于動物源性物質，其中可能攜帶多種病原微生物，會引發生物安全問題。如通過人工授精可引發受體母驢生殖道感染，影響受胎率，病原微生物還會影響精液的活率及保存時間；另一方面來源于不同時間、不同的生理狀態、不同個體的卵黃，卵黃的大小、含量多少等質量標準很難統一，用于凍精生產不僅影響凍精產品的質量，而且很難實現標準化、規范化。
技術實現思路
本專利技術提出一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑，解決了現有技術中母畜繁殖周期長、人工授精受胎率低，驢的冷凍精液生產操作程度復雜，難度大的問題。 本專利技術的技術方案是這樣實現的一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑，每IOOmL抗凍劑中包括下列組分酪蛋白1. O 3. 0g、葡萄糖 2. O 3. 0g、乳糖1. O 2. 0g、HEPES BUFFER3. O 6. 0g、甘油2. O 3. OmL、卵黃2 4mL、青霉素45 55萬IU、慶大霉素4. 5 5. 5g、兩性霉素B 20 30mg，余量為HANK溶液。作為優選的技術方案，一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑，每IOOmL抗凍劑中包括下列組分酪蛋白2. 0g、葡萄糖 2. 5g、乳糖1. 5g、HEPES BUFFER 5. 0g、甘油 2. 5mL、卵黃 3mL、青霉素50萬IU、慶大霉素5g、兩性霉素B 25mg，余量為HANK溶液。本專利技術提出又一種制備用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑的方法，其包括步驟I)按照每IOOmL抗凍劑中包含酪蛋白1. O 3. 0g、葡萄糖2. O 3. 0g、乳糖1. O 2.0g,HEPES BUFFER 3. O 6. 0g、甘油 2. O 3. OmL、卵黃 2 4mL、青霉素 45 55 萬 IU、慶大霉素4. 5 5. 5g、兩性霉素B 20 30mg，余量為HANK溶液稱取各組分，備用；2)將上述稱取的酪蛋白、葡萄糖、乳糖、HEPES BUFFER用HANK溶液配置成基礎液；3)向上述配置成的基礎液中添加步驟I)中稱取的青霉素、慶大霉素、兩性霉素B配置成I液；4)將所述I液整pH為7.1 7. 8，然后進行過濾滅菌，放入3 5°C冰箱中備用5)使用前取所述I液，向其中加入步驟I)中稱取的卵黃，配置成II液，即得所述用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑。作為優選的技術方案,按照每IOOmL抗凍劑中包含酪蛋白2. 0g、葡萄糖2. 5g、乳糖1.5g、HEPES BUFFER 5. 0g、甘油2. 5mL、卵黃3mL、青霉素50萬IU、慶大霉素5g、兩性霉素B25mg，余量為HANK溶液稱取備用。由于采用了上述技術方案，，每IOOmL抗凍劑中包括下列組分酪蛋白1. O 3. 0g、葡萄糖2. O 3. 0g、乳糖1. O 2.0g,HEPES BUFFER 3. O 6. 0g、甘油 2. O 3. OmL、卵黃 2 4mL、青霉素 45 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑，其特征在于，每100mL抗凍劑中包括下列組分：酪蛋白1.0～3.0g、葡萄糖2.0～3.0g、乳糖1.0～2.0g、HEPES?BUFFER3.0～6.0g、甘油2.0～3.0mL、卵黃2～4mL、青霉素45～55萬IU、慶大霉素4.5～5.5g、兩性霉素B?20～30mg，余量為HANK溶液。
【技術特征摘要】
1.一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑，其特征在于，每IOOmL抗凍劑中包括下列組分酪蛋白1. 0 3. 0g、葡萄糖 2. 0 3. 0g、乳糖1. 0 2. 0g,HEPES BUFFER3. 0 6. 0g、甘油2. 0 3. OmL、卵黃2 4mL、青霉素45 55萬IU、慶大霉素4. 5 5. 5g、兩性霉素B20 30mg，余量為HANK溶液。2.如權利要求1所述的一種用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑，其特征在于，每IOOmL抗凍劑中包括下列組分 酪蛋白2. 0g、葡萄糖2. 5g、乳糖1. 5g、HEPES BUFFER 5. 0g、甘油2. 5mL、卵黃3mL、青霉素50萬IU、慶大霉素5g、兩性霉素B 25mg，余量為HANK溶液。3.一種制備如權利要求1所述的用于驢精液冷凍保存的酪蛋白抗凍劑的方法，其特征在于，包括步驟 1)按照每IOOmL抗凍劑中包含酪蛋白1.0 3. 0g、葡萄糖2. 0 3. 0g、乳糖1. 0 2.0g,HEPES BUFFE...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張燕，王長法，張瑞濤，朱濤濤，王玲玲，鞠志花，黃金明，齊超，高運東，仲躋峰，侯明海，王銀朝，閆金華，
申請(專利權)人：山東天龍牧業科技有限公司，山東省農業科學院奶牛研究中心，
類型：發明
國別省市：
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