一種PSA檢測(cè)試劑盒制造技術(shù)

本實(shí)用新型專利技術(shù)公開了一種PSA檢測(cè)試劑盒，涉及化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，解決目前PSA超微量檢測(cè)的技術(shù)問題。本實(shí)用新型專利技術(shù)PSA檢測(cè)試劑盒，包括盒體和盒蓋，盒體上方連接盒蓋，盒體的底部放置有2cm厚與盒的尺寸大小相同的海綿托，所述海綿托的左半部設(shè)有11個(gè)第一凹槽、中間區(qū)域設(shè)有3個(gè)第二凹槽、右半部設(shè)有2個(gè)第三凹槽，第一凹槽內(nèi)分別裝有11個(gè)校準(zhǔn)品瓶，第二凹槽內(nèi)分別裝有磁性顆粒瓶、生物素化合物瓶和標(biāo)記物瓶，第三凹槽分別裝有化學(xué)發(fā)光底物瓶和濃縮洗滌液瓶。本實(shí)用新型專利技術(shù)試劑盒主要用途為PSA超微量檢測(cè)。（*該技術(shù)在2022年保護(hù)過期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本技術(shù)涉及一種試劑盒，屬于PSA化學(xué)發(fā)光免疫分析

技術(shù)介紹
前列腺特異性抗原(PSA)是由前列腺上皮細(xì)胞合成分泌至精液中，是精漿的主要成分之一。在上個(gè)世紀(jì)60年代末，在研究免疫避孕過程中Hare等人發(fā)現(xiàn)，在前列腺液及精液中含有一種分子量大約34000的精液特異性蛋白質(zhì)。1979年從前列腺組織中提取并純化了這種蛋白質(zhì)。由于這種蛋白只在前列腺組織中存在，被命名為前列腺特異性抗原。PSA用于科學(xué)研究過程中，對(duì)于微量檢測(cè)要求較高。目前PSA測(cè)定方法有膠體金免疫層析(GICA);蛋白印跡(WB);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，化學(xué)發(fā)光法免疫分析(CLIA);其中GICA、ELISA、WB的優(yōu)點(diǎn)是相對(duì)成本低廉，缺點(diǎn)是靈敏度低，PSA含量少的情況下檢測(cè)不出；而化學(xué)發(fā)光法CLIA試劑盒檢測(cè)靈敏度比上述方法試劑盒高，但還是不能滿足科研上對(duì)PSA超微量檢測(cè)的需要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本技術(shù)克服了當(dāng)前化學(xué)發(fā)光法試劑盒不能滿足對(duì)PSA超微量檢測(cè)的技術(shù)問題，提供了一種PSA檢測(cè)試劑盒，解決目前PSA蛋白超微量檢測(cè)的問題。本技術(shù)采用了以下技術(shù)方案來解決技術(shù)問題一種PSA檢測(cè)試劑 盒，包括盒體和盒蓋，盒體(I)上方連接盒蓋(2)，盒體(I)的底部放置有2cm厚與盒的尺寸大小相同的海綿托(3)，所述海綿托(3)的左半部設(shè)有11個(gè)第一凹槽、中間區(qū)域設(shè)有3個(gè)第二凹槽、右半部設(shè)有2個(gè)第三凹槽，第一凹槽內(nèi)分別裝有11個(gè)校準(zhǔn)品瓶(5)，第二凹槽內(nèi)分別裝有磁性顆粒瓶￠)、生物素化合物瓶(7)和標(biāo)記物瓶(8)，第三凹槽分別裝有化學(xué)發(fā)光底物瓶(9)和濃縮洗滌液瓶(10)。作為本技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)，所述的盒體(I)、盒蓋(2)均采用塑化防水紙質(zhì)材料制成。作為本技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)，第一凹槽的截面形狀與所述校準(zhǔn)品瓶(5)的截面形狀匹配。作為本技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)，3個(gè)第二凹槽的截面形狀分別與磁性顆粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)以及標(biāo)記物瓶(8)的截面形狀匹配。作為本技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)，2個(gè)第三凹槽的截面形狀分別與化學(xué)發(fā)光底物瓶(9)和濃縮洗滌液瓶(10)的截面形狀匹配。作為本技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)，所述的校準(zhǔn)品瓶(5)，磁性顆粒瓶￠)，生物素化合物瓶(7)，標(biāo)記物瓶(8)，化學(xué)發(fā)光底物瓶(9)和濃縮洗滌液瓶(10)均采用玻璃瓶。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)的有益效果是發(fā)光信號(hào)明顯提高，對(duì)超微量的PSA檢測(cè)效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，本技術(shù)試劑盒具有靈敏度高，穩(wěn)定的特點(diǎn)。附圖說明圖1是本技術(shù)整體結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1盒體；2盒蓋；3海綿托；4第三凹槽；5校準(zhǔn)品瓶；6磁性顆粒瓶；7生物素化合物瓶；8標(biāo)記物瓶；9化學(xué)發(fā)光底物瓶；10濃縮洗滌液瓶。具體實(shí)施方式如圖1所示，為本技術(shù)PSA檢測(cè)試劑盒的一種實(shí)施例。該P(yáng)SA檢測(cè)試劑盒包括盒體I和盒蓋2，盒體1、盒蓋2均采用塑化防水紙質(zhì)材料制成。盒體上方連接盒蓋，盒體的底部放置有2cm厚與盒的尺寸大小相同的海綿托3。所述海綿托3的左半部設(shè)有11個(gè)第一凹槽、中間區(qū)域設(shè)有3個(gè)第二凹槽、右半部設(shè)有2個(gè)第三凹槽4。第一凹槽內(nèi)分別裝有11個(gè)校準(zhǔn)品瓶5，并且第一凹槽的截面形狀與所述校準(zhǔn)品瓶5的截面形狀匹配。第二凹槽內(nèi)分別裝有磁性顆粒瓶6、生物素化合物瓶7和標(biāo)記物瓶8，并且3個(gè)第二凹槽的截面形狀分別與磁性顆粒瓶6、生物素化合物瓶7以及標(biāo)記物瓶8的截面形狀匹配。第三凹槽4分別裝有化學(xué)發(fā)光底物瓶9和濃縮洗滌液瓶10，并且2個(gè)第三凹槽的截面形狀分別與化學(xué)發(fā)光底物瓶9和濃縮洗滌液瓶10的截面形狀匹配。在本實(shí)施例中，校準(zhǔn)品瓶5，磁性顆粒瓶6，生物素化合物瓶7，標(biāo)記物瓶8，化學(xué)發(fā)光底物瓶9和濃縮洗滌液瓶10均采用玻璃瓶。制備本技術(shù)PSA檢測(cè)試劑盒一、校準(zhǔn)品瓶的制備用校準(zhǔn)品基質(zhì)液及PSA純品配制校準(zhǔn)品，濃度分別為0、0. 1,0. 2,0. 5、1、2、5、10、20、50、100ng/mL，(其中Ong/mL為校準(zhǔn)品基質(zhì)液，不含PSA)，配制11種系列濃度校準(zhǔn)品，各濃度校準(zhǔn)品分別用3mL規(guī)格的西林玻璃瓶分裝ImL/瓶，凍干處理后，-20°C保存，得到本技術(shù)校準(zhǔn)品瓶5。二、磁性顆粒瓶的制備(I)稱取250mg氨基末端磁性顆粒置于燒杯；(2)加入甲醇及丙酮各5mL反復(fù)清洗5遍；(3)磁性分離，棄去上清；(4)加入DMF溶解的IOmLO. 2%的1，4 一苯二異硫氰酸酯(PDITC)溶液，置于恒溫振蕩器，反應(yīng)IOh ；(5)將反應(yīng)后的磁性顆粒用丙酮及超純水反復(fù)清洗6遍；(6)取新制備經(jīng)PDITC活化的磁性顆粒置于30mL離心管中；(7)加入PBS25mL，加入4mg鏈親和素，置于恒溫振蕩器中反應(yīng)20min ；(8)磁性分離，測(cè)定反應(yīng)前后溶液在280nm的OD值，以PBS清洗3次，收集，加入等量丙三醇，_20°C保存.通過實(shí)驗(yàn)檢測(cè)效價(jià)，在根據(jù)最近效價(jià)稀釋比例配制鏈親和素化固相磁性顆粒工作液。用5mL規(guī)格西林玻璃瓶分裝ImL/瓶，凍干處理后，_20°C保存，得到本技術(shù)磁性顆粒瓶6。三、生物素化合物瓶的制備(I)將生物素-N-羥基磺酸基琥珀酰亞胺酯(Sulf0-NHS-Biotin)冰箱取出平衡至室溫;(2) O. OlM的PBS稀釋PSA單克隆抗體至濃度2mg/mL ；(3)稱取Sulfo-NHS_Biotin2mg于西林瓶中加超純水300 μ L，輕輕搖勻活化。(4)立即將活化的生物素溶液54 μ L緩慢加入2mLPSA單克隆抗體溶液中，室溫反應(yīng) 30min ；(5)反應(yīng)液用0.0現(xiàn)的？85透析41811(換液4次)，收集，加入等量丙三醇，-201保存。通過實(shí)驗(yàn)檢測(cè)效價(jià)，在根據(jù)最近效價(jià)稀釋比例配制PSA單克隆抗體生物素化工作液。用5mL規(guī)格西林玻璃瓶分裝ImL/瓶，凍干處理后，_20°C保存，得到本技術(shù)生物素化合物瓶7。四、標(biāo)記物瓶的制備(I)將1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺(EDC)冰柜取出平衡至室溫；(2)取10mg5，10，15-三(4-吡啶基)-20-對(duì)苯乙酸卟啉和20mgEDC分別溶于Iml超純水中使其溶解； (3)將上述5，10，15-三(4_吡啶基)_20_對(duì)苯乙酸卟啉溶液和EDC溶液，在4°C混合攪拌反應(yīng)30min ；(4)然后向此混合液中緩慢滴加入含30mg/mL PSA單克隆抗體溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，層析純化后，-20°C保存。通過實(shí)驗(yàn)檢測(cè)效價(jià)，在根據(jù)最近效價(jià)稀釋比例配制5，10，15_三(4-吡啶基)-20-對(duì)苯乙酸卟啉偶聯(lián)標(biāo)記PSA單克隆抗體化工作液。用5mL規(guī)格西林玻璃瓶分裝ImL/瓶，凍干處理后，_20°C保存，得到本技術(shù)標(biāo)記物瓶8。五、化學(xué)發(fā)光底物瓶的制備本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種PSA檢測(cè)試劑盒，包括盒體和盒蓋，其特征在于：盒體(1)上方連接盒蓋(2)，盒體(1)的底部放置有2cm厚與盒的尺寸大小相同的海綿托(3)，所述海綿托(3)的左半部設(shè)有11個(gè)第一凹槽、中間區(qū)域設(shè)有3個(gè)第二凹槽、右半部設(shè)有2個(gè)第三凹槽，第一凹槽內(nèi)分別裝有11個(gè)校準(zhǔn)品瓶(5)，第二凹槽內(nèi)分別裝有磁性顆粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)和標(biāo)記物瓶(8)，第三凹槽分別裝有化學(xué)發(fā)光底物瓶(9)和濃縮洗滌液瓶(10)。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種PSA檢測(cè)試劑盒，包括盒體和盒蓋，其特征在于盒體(I)上方連接盒蓋(2)，盒體(I)的底部放置有2cm厚與盒的尺寸大小相同的海綿托(3)，所述海綿托(3)的左半部設(shè)有11個(gè)第一凹槽、中間區(qū)域設(shè)有3個(gè)第二凹槽、右半部設(shè)有2個(gè)第三凹槽，第一凹槽內(nèi)分別裝有11個(gè)校準(zhǔn)品瓶(5)，第二凹槽內(nèi)分別裝有磁性顆粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)和標(biāo)記物瓶(8)，第三凹槽分別裝有化學(xué)發(fā)光底物瓶(9)和濃縮洗滌液瓶(10)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PSA檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的盒體(I)、盒蓋(2)均采用塑化防水紙質(zhì)材料制成。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PS...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胡慶鋒，常立峻，李勇，徐海偉，陳秀發(fā)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：蘇州長(zhǎng)光華醫(yī)生物試劑有限公司，
類型：實(shí)用新型
國(guó)別省市：