本發明專利技術公開了一種磺胺類藥物的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的酶標板和設在盒體內的試劑；其特征在于，所述酶標板的各孔包被有包被抗原即磺胺類母核與載體蛋白的偶聯物；所述試劑包括：磺胺類單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體、磺胺類系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學發光液；本發明專利技術的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有高靈敏度、簡便快速、準確度高、檢測藥物種類多的特點，與傳統的比色ELISA法比較，操作時間大幅度減少；可用作檢測動物組織(豬肉、雞肉、豬肝、雞肝)、水產品(魚肉、蝦肉)、雞蛋、牛奶和奶粉中17種磺胺類類藥物殘留檢測。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種檢測磺胺類的化學發光免疫檢測試劑盒，用于檢測動物組織(肌 肉、肝臟)、水產品(魚、蝦)、雞蛋、牛奶和奶粉中的磺胺類藥物含量或殘留量。屬于免疫學 檢測領域。
技術介紹
磺胺類藥物的基本結構為對氨基苯磺酰胺，具有芳氨基和磺酞胺基，多為兩性化 合物，藥物具有一定酸性。磺胺類藥物的抑菌作用是由于磺胺類藥物中能分解出對氨基苯 磺酰胺，其分子的大小和形狀與組成葉酸中的對氨基苯甲酸相近，化學性質也類似。由于細 菌對二者缺乏選擇性，大量的對氨基苯磺胺替代了對氨基苯甲酸而被細菌吸收，干擾細菌 葉酸的合成而影響其生長繁殖，從而可抑制大多數革蘭氏陽性菌和某些陰性菌。磺胺類藥 物應用較廣，具有一定療效的就有幾十種。磺胺類藥物作為獸藥和飼料添加劑，在食源性動物的飼養中被廣泛應用，在動物 疾病的防治方面具有顯著的療效。例針對動物的腸炎、乳房炎、肺炎、腦膜炎等疾病。同時， 這類藥物具有顯著的毒副作用，影響人的泌尿系統功能，引起結晶尿，血尿，尿痛，尿少等癥 狀，或產生一些皮炎、發熱等過敏反應以及致癌性作用。如果這類藥物不按規定或要求使用 與停藥，動物體內的藥物殘留會隨著食物鏈影響人體的健康。因此，國內外對磺胺類藥物殘 留均有限量要求，我國以及美國、歐盟等國家規定動物性食品中總磺胺以及單個磺胺的最 高殘留限量(MRLs)為O. lmg/kg，其中磺胺二甲基嘧啶(SM2)的MRLs為O. 025mg/kg。目前，針對磺胺類獸藥殘留的檢測方法有薄層色譜法(TLC)、高壓液相色譜 (HPLC)法、液質聯用(HPLC/MS)、氣相色譜法(GC)、酶聯免疫吸附法(ELISA)和毛細管電泳 法(HPCE)等。由于復雜的儀器設備和繁瑣的前處理過程，儀器分析方法不適合現場監控和 大量樣本的篩選，其中ELISA方法作為一種新型的動物源性食品中磺胺類藥物殘留篩選方 法已被使用，但是大部分只能針對磺胺類其中一種或者少數幾種藥物進行檢測，不利于磺 胺類藥物的全面檢測。化學發光免疫檢測方法具有特異性強、穩定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程 度高、試劑穩定且有效期長出 18個月)等優點，其檢測限比酶聯免疫法和理化檢測方法 高幾個數量級。化學發光進口儀器與試劑性能較好，而國外的技術壟斷導致化學發光儀、發 光底物液和試劑盒價格居高不下，而且試劑或試劑盒與儀器相匹配，進口試劑常常不能在 國產儀器中使用，造成化學發光免疫方法無法在基層普及。化學發光底物液是化學發光酶 免疫檢測方法的關鍵試劑，配制出低成本且性能良好，適合國產儀器使用的的發光底物液， 可降低化學發光方法的使用成本，有利于在基層的普及。建立穩定的磺胺類藥物多殘留化 學發光酶免疫檢測分析方法，也是進行商品化學發光試劑盒的研制的基礎。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種磺胺類的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒。該試劑盒具有檢測靈敏度高、應用靈活、方便的特點。一種磺胺類藥物的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的酶標板和設在盒體內的試劑；其特征在于，所述酶標板的各孔包被有以磺胺類藥物母核與卵清蛋白偶聯制成的包被抗原；所述試劑包括磺胺類單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體、磺胺類系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學發光液。所述酶標板優選乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光酶標板。所述酶標板的各孔包被有以磺胺類藥物母核與卵清蛋白偶聯制成的包被抗原；其中所述包被抗原濃度優選10 μ g/mL。所述磺胺類系列標準溶液從磺胺類純品中稀釋得到，稀釋液為含有10%甲醇的 O. 05mmol/L, pH = 7. 4 的 PBS,磺胺類標準品濃度分別是 Ong/mL,1. Ong/mL, 3. Ong/mL, 9. Ong/mL, 27. Ong/mL和81. Ong/mL,所述百分比為體積百分比。所述磺胺類單克隆抗體是由磺胺類藥物母核與牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫動物制得的單克隆抗體，其工作濃度優選為1: 64000。所述化學發光液A液為魯米諾含量為O. 01M、對甲苯酚含量為O. OOlM pH = 8. 8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；B液為IOOmL溶液含檸檬酸2. lg，無水Na2HP042. 82g，0. 75% 的過氧化氫脲O. 64mL的溶液。所述魯米諾為化學發光底物，對甲苯酚為發光增強劑。所述濃縮磷酸鹽緩沖液是每升含NaH2PO4 · 2H20 5. 74g、Na2HPO4 · 12H20 32. 6g的水溶液。所述濃縮洗滌溶液是含有體積分數O. 05%吐溫-20的pH = 7. 4,0. lmol/L磷酸鹽緩沖液。所述包被溶液是每升水中含1. 59g碳酸鈉和2. 53g碳酸氫鈉的溶液(CB)，pH = 9.5。所述封閉溶液是每升洗漆溶液中含IOg卵清蛋白(OVA, ovalbumin,也稱雞卵清白蛋白或雞卵白蛋白，由385個氨基酸殘基組成，分子量約45kDa)且加入質量為5%。NaN3的溶液，所述百分比為質量百分比。本專利技術溶液的配制本專利技術試劑盒中涉及的磺胺類標準溶液、磺胺類單克隆抗體溶液、化學發光溶液及洗滌溶液及其配方對本專利技術試劑盒檢測的靈敏度影響很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是1、磺胺類標準溶液以常規方法將磺胺類藥物純品用含有10%甲醇的O. 05m mol/L,pH = 7· 4 的 PBS 配制成濃度分別為 Ong/mL,1. Ong/mL, 3. Ong/mL, 9. Ong/mL, 27. Ong/ mL和81. Ong/mL的磺胺類標準溶液，所屬百分比為體積百分比。2、酶標羊抗鼠抗體溶液酶標羊抗鼠抗體為辣根過氧化酶-羊抗鼠IgG原液，使用時用洗滌溶液配制成1: 2000的工作濃度。3、磺胺類單克隆抗體溶液磺胺類單克隆抗體是用人工免疫抗原免疫動物制得的單克隆抗體，將所得磺胺類單克隆抗體用洗滌溶液稀釋成1: 64000的工作濃度。4、化學發光溶液A液為魯米諾含量為O. 01M、對甲苯酚含量為O. OOlM pH = 8. 8 的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；B液為IOOmL溶液含檸檬酸2. lg，無水Na2HP042. 82g，0. 75% 的過氧化氫脲O. 64mL的溶液。5、濃縮磷酸鹽緩沖液=NaH2PO4 · 2H20 5. 74g,Na2HPO4 · 12H20 32. 6g 溶于 IL 去離子水中。6、濃縮洗滌溶液按體積分數O. 05%將吐溫-20添加至pH = 7. 4，O. lmol/L磷酸鹽緩沖液中。7、包被溶液1. 59g碳酸鈉和2. 53g碳酸氫鈉溶于IL水中，調節pH = 9. 5。8、封閉溶液配制10g OVA溶于IL洗滌溶液中，再加入重量比為5%。的NaN3。本專利技術酶標板的包被本專利技術中包被酶標板采用將磺胺類藥物母核-OVA偶聯物置于設定的包被溶液中，以設定的濃度，在37 °C恒溫箱中反應包被。本專利技術包被液采用的是pH = 9. 5的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液。本專利技術中微孔板中所包被的磺胺類藥物母核-OVA在堿性環境下可以很好的結合在微孔板塑料表面上， 可以經受多次洗板，采用的包被抗原濃度為10 μ g/mL。包被好的微孔板可以用封閉溶液封閉，封閉液中惰性蛋白優選0VA，需加入NaN3防止變質。磺胺類單克隆抗體溶液的制備本本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種磺胺類藥物的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的酶標板和設在盒體內的試劑；其特征在于，所述酶標板的各孔包被有以磺胺類藥物母核與卵清蛋白偶聯制成的包被抗原；所述試劑包括：磺胺類單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體、磺胺類系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學發光液。
【技術特征摘要】
1.一種磺胺類藥物的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的酶標板和設在盒體內的試劑；其特征在于，所述酶標板的各孔包被有以磺胺類藥物母核與卵清蛋白偶聯制成的包被抗原；所述試劑包括磺胺類單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體、磺胺類系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學發光液。2.根據權利要求1所述磺胺類的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述酶標板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光酶標板。3.根據權利要求1所述磺胺類的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述包被抗原濃度為10 μ g/mL。4.根據權利要求1所述磺胺類的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述磺胺類單克隆抗體的工作濃度為1: 64000。5.根據權利要求1所述磺胺類的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述磺胺類的單克隆抗體是由磺胺類藥物母核與牛血清蛋白偶合制成的偶聯物作為免疫原免疫Balb/c小鼠制備獲得。6.根據權利要求1所述磺胺類的化學發光酶聯免疫...
【專利技術屬性】
技術研發人員：何方洋，萬宇平，吳鵬，馮月君，扶勝，岳新榮，段盈盈，韓京朋，
申請(專利權)人：北京勤邦生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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