微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒制造技術

本實用新型專利技術公開了一種微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒，屬于臨床醫學檢測領域。該試劑盒包括在底襯（1）上依次粘貼的樣品墊（2）、結合墊（3）、分析膜（4）和吸水紙（5），所述結合墊（3）上包被有上轉發光UCP顆粒標記的微量白蛋白抗體I，所述分析膜（4）上設有平行的檢測區（6）和質控區（7），所述檢測區（6）包被有微量白蛋白抗體II或微量白蛋白抗原，所述質控區（7）包被有羊抗鼠IgG。本試劑盒采用上轉發光技術與免疫技術結合，具有準確、快速、定量檢測等特點。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒
本技術涉及臨床醫學檢驗領域，具體涉及一種基于上轉發光技術免疫層析快速、定量檢測微量白蛋白試劑盒。
技術介紹
上轉發光顆粒(Up-Converting Phosphor, UCP)是一種可對能量進行上轉的稀土金屬合成物，即UCP可吸收低能量的(長波長)紅外光，但卻發出高能量的(短波長)可見光。UCP是由幾種稀土金屬元素參雜于某些晶體的晶格中構成的。在這種材料中有三種主要的成分主基質、吸收子和發射子。作為主基質的晶體材料有氧硫化物(如Y202S、Gd02S、 La2O2S等)、氟化物(如YF3、GdF3、LaF3等)、鎵酸鹽(如YGaO3'Y3Ga5O12等)以及硅酸鹽(YSi205、 YSi3O7等)等；常用作吸收子的稀土金屬離子有鐿離子(Yb3+)、鉺離子(Er3+)、釤離子(Sm3+) 等；常用作發射子的稀土金屬離子有鉺離子(Er3+)、欽離子(Ho3+)、銩離子(Tm3+)、鋱離子 (Tb3+)等。吸收子和發射子這一離子對在主基質晶格內適宜的空間取向和距離，是產生上轉發光的基礎。上轉發光顆粒UCP所具有的這種獨特光學特性，使其在床邊快速診斷領域發揮巨大的潛能(I)高度的靈敏性獨有的上轉發光現象確保了 UCP在檢測過程中不存在來自外界的背景干擾；(2)高度的穩定性UCP的發光現象是產生于結構內部的純粹物理過程，因而完全避免了來自檢測樣品腐蝕及自身衰變導致的發光淬滅；(3)高度靈活性UCP具有的可自由組合的多樣化特征光譜，使其適用于多重分析；(4)高度的安全性無機惰性、紅外光激發、可見光發射使得基于UCP檢測對于檢測者、被檢測樣品、環境均無危害。微量白蛋白(又名微量尿白蛋白，Micoralbuminuria, MAU)是指尿中出現的微量白蛋白。白蛋白是一種血液中的正常蛋白，在正常生理條件下尿液中也會出現極少微量白蛋白，排泄量一般在30mg/天(或20mg/L)之內。人尿液中的白蛋白達到在30_300mg/天或 20-200mg/L濃度稱為微量白蛋白，白蛋白濃度大于300mg/天或200mg/L時稱大量白蛋白。微量白蛋白(MAU)的非正常出現，通常被認為是腎功能衰竭、糖尿病和心血管疾病并發癥等重要臨床標志之一。因此，尿液中白蛋白存在水平的檢測對腎病、糖尿病和心血管病的早期診斷、早期治療和減小風險由重要的參考價值和臨床意義。目前，臨床檢測微量白蛋白診斷早期腎損害的方法有放射免疫分析法(RIA)、酶聯免疫吸附實驗法(ELISA)等，這些檢查較為繁瑣、歷時較長、費用較高，不利于臨床醫生的及時診斷和療效觀察。中國專利申請號200810305085. 9公開了一種半定量檢測尿微量白蛋白膠體硒試紙，該試紙條能夠檢測含量不低于20μ g/ml尿液中白蛋白。此法雖然簡單，但是準確度不高、且不能定量檢測。中國專利申請號201110458548. 6公開了微量尿白蛋白膠體金檢測試劑盒及其制備工藝，具體描述了該試劑盒的制備，還說明了試劑盒檢測靈敏度15 μ g/ml。但是膠體金免疫層析存在以下缺陷⑴膠體金標記過程是靜電吸附過程，是一種物理過程，故在液相中穩定性較差， 往往造成已標記上的蛋白分子又再次脫落；(2)只有當金顆粒集聚到一定量時，人肉眼才能觀察到紫紅色的條帶，且該顏色與背景對比度不大，從而限制了檢測靈敏度。因此，應用上轉發光免疫分析技術開發微量白蛋白快速檢測試劑應用于床邊快速診斷具有重要的臨床應用價值。
技術實現思路
為了克服上述現有技術中的不足，本技術提供一種基于上轉發光法的測定微量白蛋白免疫層析試劑盒，具有準確、快速、定量檢測等特點。本技術的試紙條檢測原理是通過一系列表面修飾與活化，上轉發光顆粒UCP 可與生物活性分子相結合，利用UPT生物傳感器，對在層析過程中通過特異免疫反應結合于檢測區與質控區上的UCP顆粒進行掃描分析，從而利用由UPT快速定量檢驗系統實現精確定量或定性。本技術的提供的技術方案是一種微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒，包括在底襯上依次粘貼的樣品墊、結合墊、 分析膜和吸水紙，所述結合墊上包被有上轉發光UCP顆粒標記的微量白蛋白抗體I，所述分析膜上設有平行的檢測區和質控區，所述檢測區包被有微量白蛋白抗體II或微量白蛋白抗原，所述質控區包被有羊抗鼠IgG。所述上轉發光UCP顆粒的直徑為50_350nm。所述微量白蛋白抗體I和微量白蛋白抗體II為配對單抗或單抗-多抗配對。所述微量白蛋白抗原為人微量白蛋白。本技術微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒的制備方法為(I)結合墊制備將UCP-微量白蛋白抗體I用ρΗ7· 2的O. 03Μ PBS緩沖液(含有 2%BSA和2%海藻糖)稀釋至終濃度為2mg/ml，充分混勻后噴于結合墊上，37°C烘干備用；(2)分析膜制備用點樣儀在分析膜上不同位置分別噴點微量白蛋白抗體II (或微量白蛋白抗原)和羊抗鼠IgG抗體，作為檢測區和質控區，37°C烘干備用；(3)樣品墊制備將纖維素膜放入pH 7. 2的O. 03M PBS緩沖液(含5mg/mlBSA和 O. l%TritonX-100)中浸泡30min，然后37°C烘干備用；⑷試劑盒組裝將樣品墊、結合墊、分析膜和吸水紙依次粘貼在底襯上，切割成指定寬度試紙條即可。與現有技術相比，本技術具有以下有益技術效果本技術檢測試劑盒基于轉發光技術與免疫層析技術結合在定量檢測微量白蛋白的應用，使得微量白蛋白檢測無本底干擾、檢測結果更加靈敏；與現有技術相比，該試劑盒穩定性更高。附圖說明圖I微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒結構示意圖。其中，I、底襯；2、樣品墊；3、結合墊；4、分析膜；5、吸水墊；6、檢測區；7、質控區。具體實施方式以下結合附圖對本技術進一步詳細描述，所述是對本技術的解釋而不是限定。如圖I所示，一種微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒，包括在底襯I上依次粘貼的樣品墊2、結合墊3、分析膜4和吸水紙5，所述結合墊3上包被有上轉發光UCP顆粒標記的微量白蛋白抗體I，所述分析膜4上設有平行的檢測區6和質控區7，所述檢測區6包被有微量白蛋白抗體II或微量白蛋白抗原，所述質控區7包被有羊抗鼠IgG。所述上轉發光UCP顆粒的直徑為50_350nm。所述微量白蛋白抗體I和微量白蛋白抗體II為配對單抗或單抗-多抗配對。所述微量白蛋白抗原為人微量白蛋白。實施例I本技術微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒的制備方法I :⑴結合墊3制備將50nmUCP顆粒與微量白蛋白單克隆抗體I共價偶聯得到 UCP-微量白蛋白單克隆抗體I，然后用PH7. 2的O. 03M PBS緩沖液(含有2%BSA和2%海藻糖)稀釋至終濃度為2mg/ml，充分混勻后噴于結合墊上，37°C烘干備用；(2)分析膜4制備以pH 7. 8的PBS緩沖液將微量白蛋白單克隆抗體II或微量白蛋白多克隆抗體和兔抗鼠IgG抗體分別配置成O. 2mg/ml和O. 3mg/ml的溶液,再用噴膜儀在硝酸纖維素膜上以I μ 1/cm的量分別劃線作為檢測區6和質控區7，37°C烘干備用；(3)樣品墊2制備將纖維素膜放入pH 7. 2的O. 03M PBS緩沖液(含5mg/mlBSA和 O. l%TritonX-100)中浸泡30min，然后37°C烘干備本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒，包括在底襯（1）上依次粘貼的樣品墊（2）、結合墊（3）、分析膜（4）和吸水紙（5），其特征在于所述結合墊（3）上包被有上轉發光UCP顆粒標記的微量白蛋白抗體I，所述分析膜（4）上設有平行的檢測區（6）和質控區（7），所述檢測區（6）包被有微量白蛋白抗體II或微量白蛋白抗原，所述質控區（7）包被有羊抗鼠IgG。

【技術特征摘要】
1.一種微量白蛋白免疫層析檢測試劑盒，包括在底襯(I)上依次粘貼的樣品墊(2)、結合墊(3 )、分析膜(4 )和吸水紙(5 )，其特征在于所述結合墊(3 )上包被有上轉發光UCP顆粒標記的微量白蛋白抗體I，所述分析膜(4)上設有平行...

【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇恩本，顏彬，周超，王勇，
申請(專利權)人：南京基蛋生物科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：