一株降解纖維素的大腸埃希氏菌制造技術

一株降解纖維素的大腸埃希氏菌，本發明專利技術涉及一株大腸埃希氏菌。本發明專利技術提供了一株降解纖維素的大腸埃希氏菌，可產生纖維素酶，為纖維素降解提供微生物資源基礎。本發明專利技術解纖維素的大腸埃希氏菌為大腸埃希氏菌J-019，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期為2012年5月21日，保藏號為CGMCC?No.6126。大腸埃希氏菌J-019能夠產纖維素酶，可高效降解纖維素。用于纖維素的生物降解。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一株大腸埃希氏菌。
技術介紹
作為農業大國，我國每年產生的農作物秸稈的量居全世界首位，但農作物秸稈等纖維素的利用率與發達國家仍有很大差距，所以纖維素資源的綜合利用已經迫在眉睫。纖維素的利用前期處理是關鍵，前期處理方法主要有酸化法、堿化法、氧化法、物理法和生物法等方法。與其它方法相比，生物法處理纖維素具有綠色環保、方法簡便、處理成本低等優點，應用前景廣闊。
技術實現思路
本專利技術提供了一株降解纖維素的大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)，可在低溫下降解纖維素，為纖維素降解提供微生物資源基礎。本專利技術降解纖維素的大腸埃希氏菌為大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)J-019，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2012年5月21日，保藏號為CGMCC?No.6126；本發明大腸埃希氏菌J-019為革蘭氏陰性菌，桿狀，細胞大小為(0.3μm～0.4μm)×(1μm～3μm)，無芽孢，周身鞭毛，能運動；在肉汁胨培養基上培養，菌落呈圓形，顏色為乳白色(如圖1所示)。本專利技術大腸埃希氏菌J-019接觸酶試驗呈陽性，氧化酶試驗呈陰性，甲基紅反應呈陽性，V-P反應呈陰性。本專利技術大腸埃希氏菌J-019可分解葡萄糖產酸，能夠分解D-蜜二糖、甲基葡糖苷、糊精、D-棉子糖、L-鼠李糖、蔗糖、D-海藻糖、L-阿拉伯糖、D-果糖、D半乳糖和D-山梨醇。本專利技術的大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)J-019通過16S?rDNA序列比對分析，保守區相似性為99％，與埃希氏菌屬(Escherichia)的16S?rDNA序列的同源性最高，通過結合菌體形態特征、生長條件、生理生化鑒定結果確定大腸埃希氏菌J-019屬于埃希氏菌屬(Escherichia)。本專利技術大腸埃希氏菌J-019能夠產纖維素酶，可在低溫下降解纖維素。本專利技術的大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)J-019屬于埃希氏菌屬(Escherichia)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2012年5月21日，保藏號為CGMCC?No.6126。附圖說明圖1為本專利技術大腸埃希氏菌J-019的菌落形態照片；圖2為具體實施方式二中大腸埃希氏菌J-019在剛果紅纖維素鑒別培養基上生長的照片；圖3為大腸埃希氏菌J-019隨培養時間變化的產酶曲線圖；圖4為大腸埃希氏菌J-019隨起始pH值變化的產酶曲線圖；圖5為大腸埃希氏菌J-019隨培養基不同氮源變化的產酶曲線圖；圖6為大腸埃希氏菌J-019隨接種量變化的產酶曲線圖。具體實施方式本專利技術技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一：本實施方式降解纖維素的大腸埃希氏菌為大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)J-019，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2012年5月21日，保藏號為CGMCC?No.6126。本實施方式大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)J-019為革蘭氏陰性菌，桿狀，細胞大小為(0.3μm～0.4μm)×(1μm～3μm)，無芽孢，周身鞭毛，能運動；在肉汁胨培養基上培養，菌落呈圓形，顏色為乳白色。參照《伯杰細菌鑒定手冊》第八版和《常見細菌系統鑒定手冊》對大腸埃希氏菌J-019進行生理生化鑒定：大腸埃希氏菌J-019接觸酶試驗呈陽性，氧化酶試驗呈陰性，甲基紅反應呈陽性，V-P反應呈陰性。大腸埃希氏菌J-019可分解葡萄糖產酸，能夠分解D-蜜二糖、甲基葡糖苷、糊精、D-棉子糖、L-鼠李糖、蔗糖、D-海藻糖、L-阿拉伯糖、D-果糖、D半乳糖和D-山梨醇。本實施方式大腸埃希氏菌J-019可在肉汁胨培養基上生長，肉汁胨培養基由3g牛肉膏、0g蛋白胨、5g?NaCl和1000mL蒸餾水組成，pH為7.2～7.4。具體實施方式二：本實施方式大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)J-019是由哈爾濱道里區太平鎮農戶養殖的牛糞中篩選得到。篩選按以下步驟進行：取5g牛糞，用無菌水稀釋成10-1～10-9的各級濃度的稀釋液，將裝有初篩培養基的試管編號為1至9號，然后在每個試管中加入一張濾紙條(5×0.7cm或7×1em)，使濾紙條貼于試管內壁，濾紙條的一半進入試管中的初篩培養基中，一半暴露于空氣中，然后將試管于121℃滅菌20-30min。用無菌移液管各吸取1mL各級濃度的稀釋液對號接種到裝有初篩培養基的試管中，于5℃培養至濾紙條上出現潰爛斑，選擇濾紙潰爛程度高的試管，從潰爛處挑取菌落于分離培養基平板上進行劃線培養，分離至得到純化的單菌落，將得到的單菌落點種于剛果紅纖維素鑒別培養基，培養48h，測量分解纖維素的透明圈直徑大小，進行初篩，得到4株細菌菌株。將初篩得到的4株細菌菌株接入細菌液體發酵培養基中進行搖瓶培養，采用3，5-二硝基水楊酸比色法(DNS法)分別測定4株菌株產纖維素酶的酶活，酶活分別為523U、422U、466U和407U，其中酶活最高的菌株即為大腸埃希氏菌J-019。所述初篩培養基由1g?K2HPO4、0.1g?FeCl3·5H2O、0.3g?MgSO4·7H2O、0.1g?CaCl2、0.1g?NaCl、2.5g?NaNO3和1000mL蒸餾水組成，pH為7.2～7.4。所述分離培養基平板由質量濃度為0.5％的CMC-Na、100mL營養鹽和質量濃度為2％的瓊脂組成，pH為7.2；其中所述營養鹽由0.5g(NH4)H2PO4、2.5g?MnSO4·H2O、2g?K2HPO4、7.5mg?FeSO4·7H2O、2g?MgSO4、0.3g?NaCl和1000mL自來水組成。所述剛果紅纖維素鑒別培養基由0.5g?K2HPO4、0.25g?MgSO4、0.24g剛果紅、14.00g瓊脂、1.88g纖維素粉、2.00g明膠、100mL土壤浸汁和900mL蒸餾水組成，pH為7.0。剛果紅纖維素鑒別培養基在配制前應對纖維素粉進行預處理，纖維素粉應加1mol/L的HCL溶液浸泡12h，然后蒸餾水洗多次至pH值中性，烘干。所述土壤浸汁的制備方法為：取土壤50克，加水200毫升，15磅蒸煮1小時，經濾紙過濾后加水補足到200毫升。所述細菌液體發酵培養基由0.3本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一株降解纖維素的大腸埃希氏菌，其特征在于解纖維素的大腸埃希氏菌為大腸埃希氏菌(Escherichia？coli)J？019，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2012年5月21日，保藏號為CGMCC？No.6126。

【技術特征摘要】
1.一株降解纖維素的大腸埃希氏菌，其特征在于解纖維素的大腸埃希氏菌為大腸埃希
氏菌(Escherichia?coli)J-019，保藏在中國微生物菌種保藏管理委...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張先成，孟利強，殷博，
申請(專利權)人：黑龍江省科學院微生物研究所，
類型：發明
國別省市：