一種檢測水產品中呋喃妥因代謝物的膠體金試劑板制造技術

本實用新型專利技術涉及一種檢測水產品中呋喃妥因代謝物的膠體金試劑板，可用于檢測水產品中的呋妥因代謝物殘留。本實用新型專利技術試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，可將反應結果以肉眼可見的顏色表征出來。該試劑板可進行半定量直觀檢測，整個操作過程僅需2小時左右，且無需任何昂貴實驗設備輔助，利于大規模樣本篩選，適合檢驗檢疫機構、海洋與漁業局、水產質量檢測部門等對水產品中非法使用呋喃妥因藥物進行大規模快速檢測。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及一種檢測水產品中呋喃妥因代謝物的膠體金試劑板，具體涉及一種檢測呋喃妥因代謝物的免疫膠體金快速檢測試劑板。
技術介紹
呋喃妥因是硝基呋喃類藥物的一種，硝基呋喃類藥物是一種廣譜抗生素，它有非常好的抗菌作用和藥動力的特性，因價格較低且效果好，而被廣泛應用，作為豬、禽類和水產促生長的添加劑。它主要用來治療由大腸桿菌或沙門氏菌所引起的腸炎、癤瘡、赤鰭病、潰瘍病等，藥效穩定，能抑制或殺滅多種革蘭氏陽性和陰性細菌，并對某些原蟲、真菌有一定作用。硝基呋喃類藥物被動物服用之后，原藥分子在動物體內迅速代謝，其在體內的穩定性不超過幾小時，代謝的部分化合物分子與細胞膜蛋白結合成為結合態，結合態可長期保持穩定，從而延緩原藥在體內的清除速度。而普通的食品加工方法難以使蛋白結合態殘留物大量降解。硝基呋喃類藥物具有較強的細胞誘變性和動物致癌毒性，食用含有該殘留物的肉制品會對人體產生一定的毒副作用。世界上許多國家限制甚至禁止使用此類藥生產動物源性食品，并規定了其在動物源性食品中的檢驗檢疫標準。歐盟已于1995年禁止在食用動物中使用硝基呋喃類抗生素，在動物源性食品中呋喃類殘留物的檢出限為不得檢出。我國也于2002頒布了禁止使用硝基呋喃類抗生素的禁令。2004年底我國進出口食品檢驗檢疫局對出口歐盟的腸衣及肉類產品增加了硝基呋喃(呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃妥因)代謝物項目的檢測。盡管我國政府和相關組織對該類藥物的殘留給予了高度重視，但硝基呋喃類藥物在水產動物源性食品中的殘留仍時有發生。因此，為了保障人民身體健康，保證進出口水產品的質量，有必要尋求一種快速靈敏方便的篩選檢測方法。隨著社會的發展，人們生活水平質量不斷提高，因而人們對食品質量安全問題也越來越重視。為確保進出口及國內市場上動物性食品禽肉、魚、蝦等的食用安全，需要快速準確的殘留量分析方法。呋喃妥因在動物體內穩定性較差，在體內很快就能被代謝，呋喃妥因代謝物為I 一氨基乙內酰脲(AHD)。代謝物與組織蛋白結合可以形成穩定的化合物，因而在組織中結合的代謝產物(AHD)則能存留較長的一段時間，所以藥殘監測部門經常以檢測其代謝產物一 AHD為手段達到檢測呋喃妥因殘留的目的。目前文獻報道的呋喃類藥物殘留的分析方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、液質聯用技術(LC-MS)和酶聯免疫法。HPLC、LC-MS應用較普遍，精確度和靈敏度高，但因其流程繁瑣、設備昂貴、檢測速度慢等原因，很難實現現場檢測和普及推廣。酶聯免疫檢測法的基礎是抗原抗體反應，該法精確、靈敏，檢測時間大大縮短，但是ELISA法中酶的活性易受反應條件影響，由此易造成測定結果重復性較差。此外ELISA試劑壽命短，因此需要低溫保藏。基于抗原抗體特異性反應建立起來的免疫學測定方法靈敏度較高，特異性強，試樣預處理簡單，分析時間短，使用方便。因此，在現場監控和基層的大規模篩選檢測中，免疫學檢測方法更實際。膠體金免疫層析法是在免疫滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術，除了具備酶聯免疫法的諸多優點外，還克服了酶聯免疫法的一些不足。該方法將反應所需要的原料的全部或大部分均已整合到試劑中，反應通常只需數分鐘，測試結果以肉眼可見的顯色條帶來判斷。具有簡便快速、操作簡單、特異性強、不需要額外設備等優點。
技術實現思路
本技術針對檢測需求，研制開發一種檢測限符合要求，重現性好，檢測時間短，適合現場快速檢測，技術產品或儀器設備成本較低，運行費用低的快速檢測試劑。本技術試劑板應用層析式抗體免疫競爭原理，通過抗原和金標抗體反應顯色，特異性檢測水產樣品中的呋喃妥因代謝物殘留水平。檢測樣品包括魚、蝦等水產品。如果樣品溶液中含有呋喃妥因代謝物殘留，呋喃妥因代謝物先和膠體金顆粒上的抗體反應，因此當膠體金顆粒隨樣品溶液擴散至檢測線時，膠體金顆粒上抗體的活性位點因被樣品溶液中的呋喃妥因代謝物藥物占據而無法與檢測線上呋喃妥因代謝物特異性抗原結合；當樣品中的呋喃妥因代謝物含量超過試劑板檢出限時，試劑板上的檢測線顯色較控制線淺甚至無顯色，判定為陽性。反之，當樣品中呋喃妥因代謝物含量在試劑板檢出限以下或無殘留時，試劑板上的檢測線顯色與控制線相近或偏深，判定為陰性。本技術試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。相鄰各部分間有1_2_的重疊以保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進行。膠體金結合墊上包被有抗呋喃妥因代謝物單克隆抗體與膠體金的結合物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有呋喃妥因代謝物-載體蛋白偶聯物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測線和控制線。偶聯呋喃妥因代謝物的載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血監蛋白等。本技術試劑板的各部分組成成分和功能如下塑料模板，起固定背襯和標示各功能區(加樣孔、檢測區、控制區)的作用。背襯，由一面涂有不干膠的不吸水韌性材料制成，起固定支撐試劑板其他組成部分的作用。樣品墊，由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液和緩沖樣品溶液pH值的作用。膠體金結合墊，由聚酯膜制成，其上有抗呋喃妥因代謝物單克隆抗體與膠體金顆粒的結合物，為樣品溶液中有效成分和金標抗體反應提供場所。硝酸纖維素膜，從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，將反應結果以肉眼可見的顏色表征出來。吸水墊，由濾紙制成，將反應過程中多余的溶液吸收。本技術試劑板具有如下有益效果(I)特異性好。本技術試劑板對呋喃妥因代謝物的交叉反應率為100%，對如呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、呋喃西林代謝物等抗生素的交叉反應率均低于I %。可見，本技術試劑板對呋喃妥因代謝物反應具有高度專一性。(2)靈敏度高。本技術試劑板對水產品中呋喃妥因代謝物的檢出限為I. ομ g/kg，在水產品中對呋喃妥因代謝物的檢測達到了較優水平，適用于各類企業及檢測機構。(3)操作簡單快捷。本技術試劑板將反應所需的大部分原料整合到PVC背襯中，滴樣后，抗原抗體反應在固相膜上快速進行，大大縮短檢樣時間，且樣品無需特殊處理，滴樣后5-10分鐘即可用肉眼通過判斷硝酸纖維素膜上的檢測線和控制線的顏色深淺讀取結果。檢測實施過程不依賴任何實驗設備，普通人員均可操作，不需專業培訓。(4)成本低，易推廣。本技術試劑板生產工藝簡單,流程成熟。生產成本低廉,投資少，收效快。附圖說明圖I為呋喃妥因代謝物免疫膠體金快速檢測試劑板背襯結構示意圖，其中I為樣品墊，2為膠體金結合墊，3為硝酸纖維素膜，4為檢測線，5為控制線，6為吸水墊，7為不干膠，8為PVC底板。圖2為呋喃妥因代謝物免疫膠體金快速檢測試劑板操作示意圖，其中S為加樣孔，C為控制區，T為檢測區。圖3a是呋喃妥因代謝物免疫膠體金快速檢測試劑板結果判定陰性示意圖；圖3b是呋喃妥因代謝物免疫膠體金快速檢測試劑板結果判定陽性示意圖；圖3c是呋喃妥因代謝物免疫膠體金快速檢測試劑板結果判定無效示意圖，其中C為控制區，T為檢測區。具體實施方式本技術試劑板的制備包括載體蛋白偶聯物的制備，抗呋喃妥因代謝物單克隆抗體的制備，膠體金溶液的制備，膠體金標記抗呋喃妥因代謝物單克隆抗體的制備和呋喃妥因代謝物免疫膠體金快速檢測試劑板的組裝。1.半抗原與載體蛋白的偶聯呋喃妥因代謝物本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種檢測水產品中呋喃妥因代謝物的膠體金試劑板，其特征在于試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，試劑板背襯上依次緊密粘貼的樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，相鄰各部分間有1？2mm的重疊以保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進行。

【技術特征摘要】
1.一種檢測水產品中呋喃妥因代謝物的膠體金試劑板，其特征在于試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，試劑板背襯上依次緊密粘貼的樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，相鄰各部分間有l-2mm的重疊以保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進行。2...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳光紅，張美琴，張素青，邵偉，
申請(專利權)人：杭州南開日新生物技術有限公司，
類型：實用新型
國別省市：