本發明專利技術涉及檢測己烯雌酚的磁顆粒化學發光試劑盒，包括的試劑有：發光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。發光標記物是異魯米諾發光標記物標記的己烯雌酚半抗原，熒光標記物是指熒光素或其衍生物標記的己烯雌酚單克隆抗體，分離試劑是指包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。本發明專利技術還涉及一種采用所述的試劑盒檢測動物源性食品中己烯雌酚的方法，本方法對己烯雌酚檢測具備較高的靈敏度、特異性和較快的檢測速度。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種化學發光檢測試劑盒及其測試方法。特別是檢測飼料、水產、組織等樣本中己稀雌酚藥物殘留量的磁顆粒化學發光試劑盒。
技術介紹
己稀雌酹(DiethyIstilbestrol, DES)是一種人工合成的非甾體雌激素，因能夠促進蛋白質的合成代謝，提高動物日益增重和飼料功效，而被非法應用。研究發現長期攝入己稀雌酚藥品或是含有己稀雌酚成分的食品會導致女性化、性早熟、抑制骨骼和精子發育，特別是此類物質具有明顯的致癌效應，可導致女性及其女性后代的生殖器官畸形和癌變。2002年我國農業部規定取消己稀雌酚及其鹽、酯制劑在所有食品動物的所有用途。目前，己稀雌酚的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)，氣相色譜-質譜法(GC-MS)和酶聯免疫吸附法(ELISA)等方法。I、高效液相色譜法(HPLC)具有檢測精度高、假陽性率低的特點。HPLC法的主要缺點是儀器價格昂貴，操作比較繁瑣，耗時長，檢測費用昂貴，對檢測人員專業要求較高，樣本前處理較復雜。2、氣相色譜-質譜法(GC-MS)靈敏度很高，假陽性率低。該方法的主要缺點是樣品需要衍生化這樣復雜的前期處理。雖然經過衍生化處理的樣品能在質譜中給出更多的結構信息，但是衍生化會產生多個不同的產物并導致樣品的部分丟失，造成實驗結果的偏差。3、酶聯免疫法(ELISA)是20世紀70年代出現，用于微量物質的檢測，最早應用于傳染病、腫瘤標志物、激素水平等臨床檢測，90年代開始在我國食品安全檢測領域推廣應用，目前依托ELISA技術的試劑盒、試紙條已經成為食品安全快速檢測領域的主導產品，同時也是我公司研發和銷售的主要產品類型。酶聯免疫檢測法基于抗原-抗體的特異性反應，檢測靈敏度較高、特異性較好，技術操作簡易，容易掌握，確實解決了大量的以前難以解決的許多微量小分子物質如抗生素、激素、農藥殘留等的定性、定量分析工作，對食品安全快速檢測技術的發展起到了積極的促進作用。但是，ELISA方法存在許多自身無法克服的缺陷，主要表現在I)非均相反應檢測過程中為分離游離物與結合物，需要多步洗板過程，耗時費力，難以提高操作的自動化程度。2)酶催化反應借助酶催化底物顯色，測定反應液吸光度值。反應的時間與溫度對酶活力存在較大影響，試劑穩定性差。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種檢測己烯雌酚的磁顆粒化學發光試劑盒，采用該試劑盒進行己烯雌酚殘留的檢測時不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應速度。本專利技術的另一個目的在于提供一種己烯雌酚殘留的測試方法，該方法操作簡單，靈敏度高，特異性好。實現上述目的，本專利技術提供一種己烯雌酚檢測試劑盒，其包含的主要試劑有發光標記物、突光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。所述的分離試劑是包被有羊抗FITC抗體的順磁性納米微珠。所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基團的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有順磁性。所述的發光標記物是異魯米諾衍生物標記的己烯雌酚半抗原。所述的異魯米諾衍生物是 ABEI、AHEI 或 ABEN。 所述的試劑盒還包括標準品，質控品和濃縮洗液。所述的熒光素標記物是FITC標記己烯雌酚單克隆抗體。本專利技術還提供一種利用試劑盒檢測己烯雌酚的方法，包括下列步驟I)分別吸取20 μ 1-100 μ I標準品或樣本，然后加入20 μ 1-100 μ I發光標記物，再加20 μ 1-100 μ I突光素標記物,充分混勻后,37°C溫育15min ；2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150 μ 1，混勻后在37°C溫育5min ；3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500 μ I沖洗復合物沉淀；4)上述清洗步驟重復2-4次；5) 4)所得分離好的復合物直接放入測量暗箱，加入激發底物I和激發底物2，延遲3-5s后檢測發出的相對光強度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關系，可以通過RLU集合標準曲線法計算己烯雌酚的濃度。所述的發光底物的主要成分是NaOH和Η202。本專利技術中分析測試方法所用的分析儀是包括電源電路、自動注射泵I和2、測量室、發光室、光電倍增管計數器和輸出系統，同時還配置有計算機與中文界面的Windows控制軟件，可進行資料錄入、結果匯總、質量控制、結果儲存和結果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報告結果，自動生成并儲存、更新功能，兩點自動修正標準曲線，所采用的系統是CI-2008系統。本專利技術所述的分離試劑是包被羊抗FITC單克隆抗體，其表面基團的含量是0.1-0. 3eqm/g，其保存于 PH7. 2，含有 5%牛血清白蛋白，O. I % Tween-20,0. 2% NaN3, PBS 緩沖液中。所述的FITC是異硫氰酸熒光素。所述百分含量為質量百分含量。所述的發光標記物是異魯米諾衍生物ABEI、AHEI或ABEN標記的己烯雌酚半抗原，其保存于含PH7. 2,0.3% Tween-20,0. 2% NaN3的PBS緩沖液中。所述百分含量是質量百分含量。所述的熒光素標記物是FITC標記的己烯雌酚單克隆抗體，其保存于pH7. 2，含5%牛血清白蛋白，O. 3% NaN3的PBS緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。己烯雌酹標準品溶液(0ng/ml,0.01ng/ml,O. 03ng/ml,O. lng/ml,O. 5ng/ml,1.Ong/ml)，標準品稀釋液為pH7. 4,0.2% NaN3,0. lmol/L磷酸鹽緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。己烯雌酹質控品溶液濃度分別為O. 02ng/ml,0. 8ng/ml,質控品稀釋液ρΗ7· 4,O.2% NaN3,0. lmol/L磷酸鹽緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。所述的濃縮洗液為PH7. 2,0. 4% Tween-20,0. 3% NaN3,0. lmol/L PBS 緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。本專利技術的有益效果如下I)本專利技術試劑盒可特異性檢測己烯雌酚，對其他藥物無交叉。2)本專利技術試劑盒的靈敏度較高，對己烯雌酚的檢測靈敏度可達O. O lng/ml ο3)本專利技術試劑盒的檢測快捷，檢測時間低于20min。具體實施例方式實施例I試劑盒具體組分的制備 I)己烯雌酚半抗原的合成將己烯雌酚和氯乙酸鈉通過鹵取代反應合成己烯雌酚半抗原。2)人工抗原的制備將己烯雌酚半抗原與牛血清蛋白采用水溶性碳化二亞胺法進行偶聯都到免疫原。3)單克隆抗體的制備動物免疫以免疫原對Balb/c小鼠進行免疫，免疫劑量為100 μ g/只，使其產生抗血清。細胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細胞，按9 I比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細胞株。細胞凍存和復蘇將雜交瘤細胞用凍存液制成IX IO9個/ml的細胞懸液，在液氮中長期保存。復蘇時取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養瓶內培養。單克隆抗體的制備與純化將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油O. 5ml/只，7天后腹腔注射雜交瘤細胞5X IO7個/只，7天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進行純化，得到單克隆抗體。4)發光標記物的制備取4.5mmol/L ABEI本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種檢測己烯雌酚的磁顆粒化學發光試劑盒，包括的試劑有：發光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。
【技術特征摘要】
1.一種檢測己烯雌酚的磁顆粒化學發光試劑盒，包括的試劑有發光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。2.根據權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的順磁性納米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基團的微珠。4.根據權利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于所述的發光標記物是異魯米諾衍生物標記的己烯雌酚半抗原。5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的異魯米諾發光標記物是ABEI、AHEI 或 AffiN。6.根據權利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒還包括標準液、質控品和濃縮洗液。7.根據權利要求1-3之一所述的試劑盒，其特征在于所述的熒光素標記物...
【專利技術屬性】
技術研發人員：萬宇平，馮才偉，王鑫，何麗霞，何勇，扶勝，
申請(專利權)人：北京勤邦生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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