本發(fā)明專利技術涉及檢測萊克多巴胺的磁顆粒化學發(fā)光試劑盒，包括的試劑有：發(fā)光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。發(fā)光標記物是異魯米諾發(fā)光標記物標記的萊克多巴胺半抗原，熒光標記物是指熒光素或其衍生物標記的萊克多巴胺單克隆抗體，分離試劑是指包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。本發(fā)明專利技術還涉及一種采用所述的試劑盒檢測動物源性食品中萊克多巴胺的方法，本方法對萊克多巴胺檢測具備較高的靈敏度、特異性和較快的檢測速度。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及一種化學發(fā)光檢測試劑盒及其測試方法，特別是檢測飼料、組織、尿液等樣本中萊克多巴胺殘留量的磁顆粒化學發(fā)光檢測試劑盒。
技術介紹
萊克多巴胺(Ractopamin)屬于β -興奮劑。β -興奮劑是營養(yǎng)重分配劑的一種，是一類結構和功能類似腎上腺素而后去甲腎上腺素的苯乙醇胺類衍生物，它能改善脂肪型動物的肉與脂肪的比例，降低酮體脂肪含量，提高瘦肉率，并能加速動物生長，而被添加于動物飼料中。常見的β 2-興奮劑有克倫特羅、萊克多巴胺及沙丁胺醇等。隨著我國對克倫特羅的監(jiān)管力度的加大，克倫特羅的使用逐漸減少，其他β 2-興奮劑的使用逐漸增加。由于萊克多巴胺有類似于克倫特羅的作用，在動物組織中殘留，從而對人體產(chǎn)生不利影響，所以我國禁止萊克多巴胺其作為飼料添加劑使用。 在萊克多巴胺的檢測方面，目前最常用的方法包括高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯(lián)用(GC-MS)、液相色譜-質譜聯(lián)用(LC-MS)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等方法，儀器方法操作繁瑣、耗時長、檢測費用昂貴，對檢測人員專業(yè)要求較高，樣本前處理方法復雜，儀器本身的價格也比較昂貴，不利于推廣應用，酶聯(lián)免疫吸附法是基于抗原-抗體的特異性反應，檢測靈敏度高，特異性較好，技術操作簡單，對食品安全快速檢測技術的發(fā)展起到了積極的促進作用，但是ELISA方法存在一些缺陷，如非均相反應，需要多步洗板過程，難以提高操作的自動化程度，酶催化反應，對溫度的要求較高，試劑盒的穩(wěn)定性較差。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種檢測萊克多巴胺的磁顆粒化學發(fā)光試劑盒，采用該試劑盒進行萊克多巴胺的檢測時不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且反應速度較快。本專利技術的另一個目的在于提供一種萊克多巴胺的測試方法，該方法操作簡單，靈敏度高，特異性好。實現(xiàn)上述目的，本專利技術提供一種萊克多巴胺檢測試劑盒，其包含的主要試劑有發(fā)光標記物、突光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。所述的分離試劑是包被有羊抗FITC抗體的順磁性納米微珠。所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基團的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有順磁性。所述的發(fā)光標記物是異魯米諾衍生物標記的萊克多巴胺半抗原。所述的異魯米諾衍生物是ABEI、AHEI或ΑΒΕΝ。所述的試劑盒還包括標準品,質控品和濃縮洗液。所述的熒光素標記物是FITC標記萊克多巴胺單克隆抗體。本專利技術還提供一種利用試劑盒檢測萊克多巴胺的方法，包括下列步驟I)分別吸取20 μ 1-100 μ I標準品或樣本，然后加入20 μ 1-100 μ I發(fā)光標記物，再加20 μ 1-100 μ I突光素標記物,充分混勻后,37°C溫育15min ；2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80_150μ 1，混勻后在37°C溫育5min ；3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500 μ I沖洗復合物沉淀；4)上述清洗步驟重復2-4次；5) 4)所得分離好的復合物直接放入測量暗箱，加入激發(fā)底物I和激發(fā)底物2，延遲3-5s后檢測發(fā)出的相對光強度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關系，可以通過RLU集合標準曲線法計算萊克多巴胺的濃度。所述的發(fā)光底物的主要成分是NaOH和Η202。 本專利技術中分析測試方法所用的分析儀是包括電源電路、自動注射泵I和2、測量室、發(fā)光室、光電倍增管計數(shù)器和輸出系統(tǒng)，同時還配置有計算機與中文界面的Windows控制軟件，可進行資料錄入、結果匯總、質量控制、結果儲存和結果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報告結果，自動生成并儲存、更新功能，兩點自動修正標準曲線，所采用的系統(tǒng)是CI-2008系統(tǒng)。本專利技術所述的分離試劑是包被羊抗FITC單克隆抗體，其表面基團的含量是O. 1-0. 3eqm/g，其保存于 pH7. 1-7. 5，含有 O. 1-0. 5 % 牛血清白蛋白，O. 2-0. 4% 吐溫-20，O. 2-0. 3%疊氮化鈉，O. 1-0. 2mol/L磷酸鹽緩沖液中。所述的FITC是異硫氰酸熒光素。所述百分含量為質量百分含量。所述的發(fā)光標記物是異魯米諾衍生物ABEI、AHEI或ABEN標記的萊克多巴胺半抗原，其保存于PH7. 2-7. 6，含有O. 2-0. 4%吐溫-20，O. 1-0. 2%疊氮化鈉，O. 1-0. 2mol/L的磷酸鹽緩沖液中。所述百分含量是質量百分含量。所述的熒光素標記物是FITC標記的萊克多巴胺單克隆抗體，其保存于PH7. 2-7. 6，含4-8%卵清蛋白，O. 2-0. 3%疊氮化鈉，O. 2-0. 3mol/L的磷酸鹽緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。萊克多巴胺標準品溶液(0ng/ml,0.lng/ml,0. 3ng/ml,0. 9ng/ml, 2. 7ng/ml,8. lng/ml)，標準品稀釋液為ρΗ7· 2-7. 6,0. 2_0. 4 %疊氮化鈉，O. 1-0. 2mol/L磷酸鹽緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。萊克多巴胺質控品溶液濃度分別為O. 2ng/ml，5ng/ml，質控品稀釋液pH7. 2-7. 6，O. 2-0. 4%疊氮化鈉,O. 1-0. 2mol/L磷酸鹽緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。所述的濃縮洗液為PH7. 2-7. 8,0. 2-0. 4 %吐溫-20，O. 2-0. 4 %疊氮化鈉，O. 1-0. 2mol/L磷酸鹽緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。本專利技術的有益效果如下I)本專利技術試劑盒可特異性檢測萊克多巴胺，對其他藥物無交叉。2)本專利技術試劑盒的靈敏度較高，對萊克多巴胺的檢測靈敏度可達O. lng/ml。3)本專利技術試劑盒的檢測快捷，檢測時間低于20min。具體實施例方式實施例一試劑盒具體組分的制備I)半抗原的合成將萊克多巴胺與氯乙酸鈉進行鹵代反應，取代萊克多巴胺分子上的羥基，合成含有2個碳的羧基間接臂制備成萊克多巴胺的半抗原。2)免疫原的制備將萊克多巴胺半抗原與牛血清白蛋白采用水溶性碳化二亞胺法進行偶聯(lián)得到免疫原。3)單克隆抗體的制備動物免疫以免疫原對Balb/c小鼠進行免疫，免疫劑量為100 μ g/只，使其產(chǎn)生抗血清。 細胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細胞，按9 I比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細胞株。細胞凍存和復蘇將雜交瘤細胞用凍存液制成IX IO9個/ml的細胞懸液，在液氮中長期保存。復蘇時取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)。單克隆抗體的制備與純化將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油O. 5ml/只，7天后腹腔注射雜交瘤細胞5X IO7個/只，7天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進行純化，得到單克隆抗體。4)發(fā)光標記物的制備取4. 5mmol/L ABEI,溶于4ml蒸懼水中，5. Ommol/L N-輕基琥拍酰亞胺溶于O. 5mlN，N-二甲基甲酰胺中，二者充分混勻后室溫反應3-4h。取上述制備的萊克多巴胺半抗原15mg,用pH7. 4PBS調節(jié)體積到I. 5ml，然后加入上述活化的ABEI溶液，充分混勻后室溫反應過夜，過G-25凝膠柱純化。5)熒光標記物制備本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
一種檢測萊克多巴胺的磁顆粒化學發(fā)光試劑盒，包括的試劑有：發(fā)光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。
【技術特征摘要】
1.一種檢測萊克多巴胺的磁顆粒化學發(fā)光試劑盒,包括的試劑有發(fā)光標記物、突光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。2.根據(jù)權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。3.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的順磁性納米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基團的微珠。4.根據(jù)權利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于所述的發(fā)光標記物是異魯米諾衍生物標記的萊克多巴胺半抗原。5.根據(jù)權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的異魯米諾發(fā)光標記物是ABEI、AHEI 或 AffiN。6.根據(jù)權利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒還包括標準液、質控品和濃縮洗液。7.根據(jù)權利要求1-3之一所述的試劑盒，其特征在于所述的熒光素標記物...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：萬宇平，周德剛，楊昌松，王鑫，趙正苗，王建霞，
申請(專利權)人：北京勤邦生物技術有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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