一種賴氨酸含量的測定方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種賴氨酸含量的測定方法，采用流動注射技術(shù)進(jìn)樣，紫外分光光度法測定樣品中賴氨酸的含量。該方法分析速度快，通量高，精度及準(zhǔn)確度好。本發(fā)明專利技術(shù)不僅可用于食品、飼料及制藥行業(yè)中的賴氨酸測定，更適合于賴氨酸及其相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中賴氨酸的在線監(jiān)測及質(zhì)量控制。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本方法涉及化學(xué)分析技術(shù)，具體涉及一種采用流動注射技術(shù)與紫外分光光度法聯(lián)用以流動注射技術(shù)進(jìn)樣，用紫外分光光度法進(jìn)行賴氨酸樣品的定量分析。該方法不僅可用于食品、飼料及制藥行業(yè)中的賴氨酸測定，更適合于賴氨酸及其相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中賴氨酸的在線監(jiān)測及質(zhì)量控制。
技術(shù)介紹
賴氨酸是人體和動物必需的一種堿性氨基酸，能促進(jìn)發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。鑒于上述原因，賴氨酸廣泛應(yīng)用于食品、飼料及制藥行業(yè)。在制藥行業(yè)中主要作為營養(yǎng)劑及作為合成其它產(chǎn)品的原料或中間體，如與阿司匹林反應(yīng)生成解熱鎮(zhèn)痛藥賴氨匹林坐寸ο隨著賴氨酸的廣泛應(yīng)用，在生產(chǎn)應(yīng)用中，必須采用科學(xué)有效的方法對賴氨酸進(jìn)行監(jiān)測。同時(shí)，從工業(yè)角度出發(fā)，特別是涉及含賴氨酸中間體的檢測，還要求方法具有分析速度快，容易操作維護(hù)并且分析費(fèi)用低廉的要求。目前，測定賴氨酸的方法有高效液相色譜法，高氯酸滴定法，茚三酮顯色法及氨基酸分析儀法。其中，高效液相色譜法由于需進(jìn)行柱前衍生，操作繁瑣耗時(shí)，方法重現(xiàn)性欠佳，且儀器維護(hù)不方便，分析成本高；高氯酸滴定法要求樣品在無水環(huán)境下進(jìn)行，不適合進(jìn)行含水產(chǎn)品中間體控制；茚三酮顯色法與高效液相色譜法一樣存在著操作繁瑣耗時(shí)的弊端；氨基酸分析儀需專門儀器，成本過高，不適合于工藝在線監(jiān)控。流動注射分析技術(shù)(FIA)是丹麥科學(xué)家于1974年創(chuàng)立的一項(xiàng)新的流動分析技術(shù)，是溶液自動在線處理及測定的現(xiàn)代分析技術(shù)。流動注射分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測、醫(yī)藥和臨床化驗(yàn)、工業(yè)在線分析等領(lǐng)域，同時(shí)也應(yīng)用于化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)機(jī)理、絡(luò)合物的形成過程及生化反應(yīng)等理論研究。它所具有分析速度快，準(zhǔn)確度和精密度高，設(shè)備和操作簡單，通用性強(qiáng)，試樣和試劑用量少等一系列優(yōu)點(diǎn)，使得這一新興分析技術(shù)特別適合于工藝在線監(jiān)控及快速分析。本方法將流動注射技術(shù)與紫外分光光度法聯(lián)用進(jìn)行賴氨酸的檢測，分析速度快，可達(dá)40樣/小時(shí)，完全可以滿足大批量特別是含賴氨酸中間體反應(yīng)的監(jiān)控要求。并且方法操作簡便，儀器維護(hù)方便，同時(shí)由于方法的高通量，使得分析成本較其他方法顯著降低，可用于工業(yè)化監(jiān)控。并且，由于流動注射整套檢測所需儀器緊湊簡單的特點(diǎn)，本方法可用于涉及賴氨酸生產(chǎn)過程中的在線檢測。流動注射技術(shù)所帶來的連續(xù)進(jìn)樣技術(shù)，紫外分光光度法快速分析所帶來的高通量，使得本方法特別適合于涉及賴氨酸工業(yè)生產(chǎn)中的在線、原位及實(shí)時(shí)監(jiān)控，因而具有很高的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供了一種流動注射與紫外分光光度法聯(lián)用測定賴氨酸含量的新方法。本專利技術(shù)提供了一種采用單通道流動注射技術(shù)和紫外分光光度法對賴氨酸進(jìn)行定量分析的方法，流路圖見圖I。酸性緩沖鹽介質(zhì)作為載流以恒定流速流過紫外檢測器形成基底響應(yīng)。一定體積樣品注射入載流中，并與載流混合后到達(dá)檢測器，從而改變檢測器的響應(yīng)信號。由于樣品引入載流的注射方法，樣品在系統(tǒng)中的分散及與載流在系統(tǒng)中的混合，樣品到達(dá)檢測器的時(shí)間均可嚴(yán)格精確控制，故可對樣品進(jìn)行定量分析檢測。為實(shí)施本專利技術(shù)的測定方法，所需設(shè)備包括進(jìn)樣系統(tǒng)、紫外檢測器，以及對整個(gè)分析過程參數(shù)設(shè)置、試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集及處理的自動化軟件系統(tǒng)。所述的進(jìn)樣系統(tǒng)可采用儀器分析常規(guī)的進(jìn)樣系統(tǒng)，如HPLC的進(jìn)樣系統(tǒng)，也可采用流動注射進(jìn)樣系統(tǒng)。本專利技術(shù)檢測的樣品為含賴氨酸的食品、藥品、合成中間體、飼料等，特別是含賴氨酸的藥品及合成中間體。對照品用載流配制；樣品溶液可直接進(jìn)樣，也可用載流稀釋后進(jìn)樣分析。具體的，本專利技術(shù)的賴氨酸含量測定方法包括I)在包括有進(jìn)樣系統(tǒng)、紫外檢測器的檢測系統(tǒng)和可進(jìn)行整個(gè)分析過程參數(shù)設(shè)置、試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集及處理的自動化軟件系統(tǒng)的分析儀器中(見圖I);2)以酸性緩沖液為載流，酸性緩沖液選用pH為2. O 4. O的磷酸鹽、醋酸鹽、枸櫞酸鹽或其混合物的緩沖液等，緩沖液濃度為O. 01mol/L O. 2mol/L ；3)用紫外檢測器進(jìn)行檢測，紫外檢測波長為210±5nm ；4)用外標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以峰面積計(jì)算樣品中賴氨酸含量。本專利技術(shù)人對選用O. 05mol/L的醋酸鈉緩沖鹽溶液(pH3. O)進(jìn)行了以下因素考察I)流速影響在流動注射中，流速過慢，使得樣品進(jìn)樣后擴(kuò)散嚴(yán)重，經(jīng)過檢測器時(shí)，由于擴(kuò)散被稀釋，響應(yīng)降低；流速過快，樣品在檢測器中駐留時(shí)間過短，響應(yīng)降低。考察0.2ml/min I. Oml/min流速,均可滿足檢測需要。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，流速在O. 5ml/min L Oml/min范圍內(nèi)較好流速低于O. 5ml/min雖然峰高和峰面積較高,但是由于流速過低，擴(kuò)散嚴(yán)重，更關(guān)鍵的是低流速增加了分析時(shí)間，降低了分析速度，影響了分析通量；流速大于1.Oml/min時(shí)，在檢測器中停留時(shí)間太短，響應(yīng)低，對檢測的靈敏度有影響(見圖2)。綜上,0.2ml/min 2. Oml/min 流速可滿足檢測,但優(yōu)選 O. 5ml/min I. Oml/min,最優(yōu)選O. 5ml/min，可在I. 5min內(nèi)完成一次檢查，既保證了分析速度，又兼顧了檢測靈敏度。2)進(jìn)樣體積考察了 I 100 μ I進(jìn)樣體積對I. Omg/ml對照品溶液的峰高和峰面積影響(見圖3)。在考察范圍內(nèi)，峰面積和進(jìn)樣量呈正比，但峰高在進(jìn)樣體積大于20ul后與進(jìn)樣體積不成線性。本專利技術(shù)以峰面積計(jì)算含量，樣品的進(jìn)樣體積1-100μ I均可滿足檢測，優(yōu)選1-20 μ 1，最優(yōu)選20 μ I。3)線性范圍在上述最佳條件下，測定了賴氨酸濃度與峰面積和賴氨酸濃度與峰高關(guān)系。結(jié)果表明，賴氨酸濃度在O. 0001 10mg/ml濃度范圍內(nèi)，與峰面積(見圖4)和峰高(見圖5)有良好線性關(guān)系。同時(shí)鑒于進(jìn)樣體積與峰面積有更好的線性關(guān)系(圖3)，最終采用峰面積進(jìn)行計(jì)算。4濃度與峰面積回歸方程為Y= 605. 7707Χ+50. 2117，R2 = O. 9994 ；濃度與峰高回歸方程為Υ= 93. 9984Χ+7. 7479，R2 = O. 9994 ；4)精密度0. 0001mg/ml對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積和峰高的RSD分別為7. 87%和 7. 48% ；I. Omg/ml對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積和峰高的RSD分別為O. 55 %和O. 56%。5)定量限及檢測限以10倍信噪比對應(yīng)的濃度為定量限，得定量限濃度為O. 00002mg/ml ;以3倍信噪比對應(yīng)的濃度為檢測限，得檢測限濃度為O. 000006mg/mL·本方法采用自動進(jìn)樣，工作站智能處理數(shù)據(jù)，分析一個(gè)樣品僅僅需要I. 5分鐘，與柱前衍生HPLC法分析一個(gè)樣品需要40分鐘相比，本方法分析時(shí)間更短，效率提高25倍。且本方法的賴氨酸在O. 0001 10mg/ml濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性，檢測限濃度滿足檢測要求，精密度良好，因此對工廠生產(chǎn)中含賴氨酸的中間體檢測，可快速知曉結(jié)果，方便下步工序投料，從而提高企業(yè)效率，降低企業(yè)成本。結(jié)合流動注射結(jié)構(gòu)簡單的特點(diǎn)，可用于涉及賴氨酸樣品的實(shí)時(shí)，原位及無損監(jiān)控。如食品、飼料及制藥行業(yè)中的賴氨酸測定；賴氨酸及其相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的在線監(jiān)測及質(zhì)量控制。附圖說明圖I是流動注射檢測賴氨酸含量的裝置流路圖。圖2是載液流速對峰高、峰面積影響。圖3是賴氨酸溶液進(jìn)樣體積對峰高、峰面積影響。圖4是賴氨酸溶液濃度-峰面積線性本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種賴氨酸含量的測定方法，該方法包括，聯(lián)用流動注射與紫外分光光度法，以pH2.0～4.0酸性緩沖鹽溶液為載流，載流流速為0.2ml/min～2.0ml/min，在包括有進(jìn)樣系統(tǒng)、紫外檢測器和帶有參數(shù)設(shè)置、試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集及處理的自動化軟件系統(tǒng)的分析儀器中檢測，檢測波長為210±5nm，用外標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以峰面積計(jì)算樣品中賴氨酸含量。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種賴氨酸含量的測定方法，該方法包括，聯(lián)用流動注射與紫外分光光度法，以PH2. O 4. O酸性緩沖鹽溶液為載流，載流流速為O. 2ml/min 2. Oml/min,在包括有進(jìn)樣系統(tǒng)、紫外檢測器和帶有參數(shù)設(shè)置、試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集及處理的自動化軟件系統(tǒng)的分析儀器中檢測，檢測波長為210±5nm，用外標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以峰面積計(jì)算樣品中賴氨酸含量。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述測定方法，其中所述的進(jìn)樣系統(tǒng)選自HPLC的進(jìn)樣系統(tǒng)，或流動注射進(jìn)樣系統(tǒng)，進(jìn)樣體積為I 100 μ I。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述測定方法，進(jìn)樣體積為I 20μ I。4.根據(jù)權(quán)利要求I所述測定方法，紫外檢測器的檢測波長為210nm。...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：沈祥，裴東，譚俊杰，
申請(專利權(quán))人：重慶藥友制藥有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：