本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種茵芋苷的制備方法。工藝步驟為：取馬蹄金全草用丙酮組織破碎提取3次，提取液減壓濃縮至浸膏，用比例為10∶1的乙酸乙酯-甲醇混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱，洗脫液濃縮得粗品，上樣至硅膠為200-300目的中壓層析柱，用甲醇-二氯甲烷混合溶劑系統(tǒng)，收集目標(biāo)成分段洗脫液，過(guò)濾濃縮后，低溫干燥即得到茵芋苷。采用本發(fā)明專利技術(shù)制備茵芋苷，產(chǎn)品純度高，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于醫(yī)藥
，具體涉及一種從馬蹄金中提取分離制備茵芋苷的方法。
技術(shù)介紹
茵芋苷(skimmin)，是一種香豆素類化合物，又名7_0_ β -D-吡喃葡萄糖氧基香豆素，mp. 220-221°C，為白色針狀結(jié)晶，分子量324. 28274 ;分子式C15H16O8，分子結(jié)構(gòu)式為OIL· °Τ γ 'ιOH-" HH、、 Oil茵芋苷廣泛分布于多種植物和柑橘水果中，具有治療腎功能不全方面的活性。目前臨床上治療腎功能不全的藥物主要是Benazepril和Losartan,但主要依賴進(jìn)口，價(jià)格昂貴，并且毒副作用較大，如高血鉀，咳嗽嚴(yán)重，降血壓作用太弱。茵芋苷在藥理試驗(yàn)中與上述合成藥物具有相似功效，相近作用強(qiáng)度在對(duì)順鉬造成的小鼠腎損傷模型試驗(yàn)中，茵芋苷的腎保護(hù)作用與陽(yáng)性對(duì)照藥Benawpril相當(dāng)。薛清春等以2，4-二羥基苯甲醛為初始反應(yīng)物首先與丙二酸發(fā)生Knoevenagel-Doebner縮合反應(yīng)然后脫羧酸生成苷元,苷元再與糖供體發(fā)生Koenigs-Knorr反應(yīng),通過(guò)六步反應(yīng)以15%的總收率獲得茵芋苷。該方法快捷,收率中等，但副產(chǎn)物較多，產(chǎn)品純度較低。陳雨等采用95%乙醇提取、多種有機(jī)溶劑依次萃取、反復(fù)硅膠柱層析及凝膠柱層析分離得到茵芋苷，該方法僅適用于實(shí)驗(yàn)室少量制備，不易工業(yè)化。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)不足，本專利技術(shù)的目的是提供，其技術(shù)方案是，其特征在于所述方法由下列步驟組成(I)取馬蹄金全草，室溫下用丙酮溶液組織破碎提取3次，每次10-30分鐘，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；(2)將浸膏用比例為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行15-18級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，得萃取物；(3)將萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱，30-60 %乙醇洗脫，洗脫液濃縮得粗品;(4)將粗品用甲醇溶解，上樣至硅膠目數(shù)為200-300的中壓層析柱，用甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脫，收集目標(biāo)成分段洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥即得到茵芋苷。步驟(I)所述組織破碎提取用丙酮的濃度為50-80%，用量為原料質(zhì)量的4-8倍體積量。步驟⑷所述中壓柱柱壓為O. 5_4MPa，柱內(nèi)徑為50_200mm，層析柱徑高比為I 6-20。步驟⑷所述甲醇-二氯甲烷的體積比為I : 15。本專利技術(shù)的有益效果是I、本專利技術(shù)改變了傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝，采用多級(jí)逆流萃取，實(shí)現(xiàn)了溶劑與原料液的逆流接觸，濃度梯度大，提取推動(dòng)力大，且避免使用分液漏斗多次萃取的操作麻煩，萃取效率高，利于大生產(chǎn)操作。2、本專利技術(shù)的層析柱上樣量大，生產(chǎn)周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高。具體實(shí)施例方式本
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
通過(guò)以下的實(shí)施例作進(jìn)一步的闡述，但并不限制本專利技術(shù)的范圍。·實(shí)施例I :將馬蹄金全草20kg室溫下在閃式提取器中用65%丙酮3次，每次20min，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，用比例為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行進(jìn)行18級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，所得萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，50%乙醇溶液洗脫，收集3倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮得粗品。稱取200-300目經(jīng)活化的硅膠加入到內(nèi)徑60mm，徑高比I : 12的不銹鋼層析柱中，上述粗品加入甲醇超聲使全部溶解，用泵進(jìn)樣，用甲醇-二氯甲烷(I 15)混合溶液洗脫，分段收集流分，TLC監(jiān)測(cè)，收集合并茵芋苷洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥得到茵芋苷白色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為98. 4%。實(shí)施例2 將馬蹄金全草20kg室溫下在閃式提取器中用50%丙酮3次，每次30min，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，用比例為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行進(jìn)行17級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，所得萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，60%乙醇溶液洗脫，收集2倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮得粗品。稱取200-300目經(jīng)活化的硅膠加入到內(nèi)徑200mm，徑高比I : 10的不銹鋼層析柱中，上述粗品加入甲醇超聲使全部溶解，用泵進(jìn)樣，用甲醇-二氯甲烷(I 15)混合溶液洗脫，分段收集流分，TLC監(jiān)測(cè)，收集合并茵芋苷洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥得到茵芋苷白色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為98. 6%。實(shí)施例3 將馬蹄金全草20kg室溫下在閃式提取器中用80%丙酮3次，每次20min，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，用比例為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行進(jìn)行15級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，所得萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，45%乙醇溶液洗脫，收集6倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮得粗品。稱取200-300目經(jīng)活化的硅膠加入到內(nèi)徑180mm，徑高比I : 20的不銹鋼層析柱中，上述粗品加入甲醇超聲使全部溶解，用泵進(jìn)樣，用甲醇-二氯甲烷(I 15)混合溶液洗脫，分段收集流分，TLC監(jiān)測(cè)，收集合并茵芋苷洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥得到茵芋苷白色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為98. 8%。實(shí)施例4 將馬蹄金全草20kg室溫下在閃式提取器中用70%丙酮3次，每次30min，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，用比例為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行進(jìn)行16級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，所得萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，40%乙醇溶液洗脫，收集4倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮得粗品。稱取200-300目經(jīng)活化的硅膠加入到內(nèi)徑150mm，徑高比I : 6的不銹鋼層析柱中，上述粗品加入甲醇超聲使全部溶解，用泵進(jìn)樣，用甲醇-二氯甲烷(I 15)混合溶液洗脫，分段收集流分，TLC監(jiān)測(cè)，收集合并茵芋苷洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥得到茵芋苷白色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為97. 3%。實(shí)施例5 將馬蹄金全草20kg室溫下在閃式提取器中用55%丙酮3次，每次lOmin，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，用比例為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行進(jìn)行15級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，所得萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，30%乙醇溶液洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮得粗品。稱取200-300目經(jīng)活化的硅膠加入到內(nèi)徑100mm，徑高比I : 18的不銹鋼層析柱中，上述粗品加入甲醇超聲使全部溶解，用泵進(jìn)樣，用甲醇-二氯甲烷(I 15)混合溶液洗脫，分段收集流分，TLC監(jiān)測(cè)，收集合 并茵芋苷洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥得到茵芋苷白色晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量為97. 7%。權(quán)利要求1.，其特征在于所述方法由下列步驟組成 (1)取馬蹄金全草，室溫下用丙酮溶液組織破碎提取3次，每次10-30分鐘，合并提取液，減壓濃縮至浸膏； (2)將浸膏用比例 為10 I的乙酸乙酯-甲醇混合溶液進(jìn)行15-18級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，得萃取物； (3)將萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱，30-60%乙醇洗脫，洗脫液濃縮得粗品； (4)將粗品用甲醇溶解，上樣至硅膠目數(shù)為200-300的中壓層析柱，用甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脫，收集目標(biāo)成分段洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥即得到茵芋苷。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的，其特征在于步驟(I)所述組織破碎提取用丙酮的濃度為50-80%，用量為原料質(zhì)量的4-8倍體積量。3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的，其特征在于步驟(4)所述本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種茵芋苷的制備方法，其特征在于所述方法由下列步驟組成：(1)取馬蹄金全草，室溫下用丙酮溶液組織破碎提取3次，每次10？30分鐘，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；(2)將浸膏用比例為10∶1的乙酸乙酯？甲醇混合溶液進(jìn)行15？18級(jí)逆流萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，得萃取物；(3)將萃取物加水分散，通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱，30？60％乙醇洗脫，洗脫液濃縮得粗品；(4)將粗品用甲醇溶解，上樣至硅膠目數(shù)為200？300的中壓層析柱，用甲醇？二氯甲烷混合溶液洗脫，收集目標(biāo)成分段洗脫液，過(guò)濾濃縮，低溫干燥即得到茵芋苷。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李法慶，劉東鋒，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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