一種快速檢測磺胺二甲嘧啶殘留的膠體金試紙條及試劑盒制造技術(shù)

本實(shí)用新型專利技術(shù)一種快速檢測磺胺二甲嘧啶殘留的膠體金試紙條及試劑盒，屬醫(yī)用檢測耗材，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶單抗；所述對照線C線包被有兔抗鼠IgG多抗，所述檢測線T線包被有磺胺二甲嘧啶-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物，本實(shí)用新型專利技術(shù)試紙條采用競爭抑制法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測食品和飼料中的磺胺二甲嘧啶殘留，本實(shí)用新型專利技術(shù)試紙條簡捷靈敏準(zhǔn)確，用于動(dòng)物源性食品和飼料的檢測。（*該技術(shù)在2022年保護(hù)過期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

，本技術(shù)屬于生物檢測領(lǐng)域，涉及一種醫(yī)用檢測耗材，具體涉及一種快速檢測磺胺二甲嘧啶殘留的膠體金試紙條及試劑盒。
技術(shù)介紹
磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine, N-(4，6_ 二甲基_2_嘧啶基)_4_氨基苯磺酰胺)，為廣譜抑菌劑，在結(jié)構(gòu)上類似對氨基苯甲酸(PABA)，可與PABA競爭性作用于細(xì)菌體內(nèi)的二葉酸合成酶，從而阻止PABA作為原料合成細(xì)菌所需要葉酸的過程，減少了具有代謝活性的四氫葉酸的量，而后者則是細(xì)菌合成嘌吟、胸腺嘧啶核苷和脫氧核糖核酸(DNA)的必需物質(zhì)，因此抑制了細(xì)菌的生長繁殖。磺胺藥的作用可被PABA及其衍生物(普魯卡因、丁卡因)所拮抗，此外膿液以及組織的分解產(chǎn)物的存在也起拮抗作用，因其可提供細(xì)菌生長的必需物質(zhì)。用作飼料添加劑，用于防治葡萄球菌及溶血性鏈球菌等的感染，即主要治療禽霍亂、·禽傷寒，雞球蟲病等。然而，由于磺胺二甲嘧啶在特內(nèi)的作用時(shí)間和代謝時(shí)間較長，通過任何途徑攝入都有可能在人體中蓄積。人體中磺胺的長期蓄積會(huì)導(dǎo)致磺胺藥抗藥性的產(chǎn)生，且有潛在的致癌性。目前，磺胺二甲嘧啶殘留的主要檢測方法有氣相色譜(GC)法，薄層色譜法(TLC)、高壓液相色譜法(HPLC)、氣-質(zhì)聯(lián)機(jī)(GC/MS)、液-質(zhì)聯(lián)機(jī)(HPLC/MS)、毛細(xì)管電泳等，由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和樣本前處理及測定操作繁瑣且費(fèi)用高，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查。而酶聯(lián)免疫吸附分析法使用成本高、回收方法復(fù)雜、靈敏度不高，這些缺陷使其推廣使用受到限制。申請?zhí)枮?00310117065.6的專利技術(shù)專利，公開了一種檢測磺胺二甲嘧啶殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及方法，該方法檢測磺胺二甲嘧啶殘留前、后都需要做必要的儀器清洗及保養(yǎng)工作，并且要求專業(yè)技術(shù)人員來操作。免疫膠體金技術(shù)(Immunogold labelling techique)是上世紀(jì)80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標(biāo)記技術(shù)后發(fā)展起來的固相標(biāo)記免疫測定技術(shù)。該技術(shù)主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。快速診斷試紙條是20世紀(jì)90年代以來在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新型層析材料基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)，近年來發(fā)展迅速，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。該技術(shù)主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體區(qū)域時(shí)，待測物金標(biāo)試劑復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，膠體金標(biāo)記聚集在檢測帶上，可通過目測得到直觀的顯色結(jié)果。而游離的標(biāo)記物則越過檢測帶，從而達(dá)到與檢測物自動(dòng)分離的目的。競爭抑制法可用于測定抗原或抗體，以測定抗原為例，其原理為標(biāo)本中的受檢抗原和固相的包被抗原競爭與標(biāo)記抗體結(jié)合，當(dāng)標(biāo)本中的受檢抗原的量大于等于試劑的閾值，則標(biāo)記抗體則不會(huì)與固相的包被抗原結(jié)合；若標(biāo)本中無受檢抗原，則標(biāo)記抗體直接與固相的包被抗原結(jié)合。目前，將免疫競爭抑制法與膠體金檢測技術(shù)相結(jié)合來對磺胺二甲嘧啶殘留進(jìn)行快速檢測，且具有高效、靈敏、特異、便捷，經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)的膠體金試紙條鮮有報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為解決上述領(lǐng)域的需求和空白，本技術(shù)旨在提供一種快速檢測磺胺二甲嘧啶殘留的膠體金試紙條及試劑盒，本技術(shù)試紙條采用競爭抑制法和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合快速檢測食品中的磺胺二甲嘧啶殘留，用于動(dòng)物源性食品和飼料的快速檢測；本技術(shù)試紙條操作簡單，拿來即用，不需要本領(lǐng)域的專業(yè)人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及，以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，并且具有快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確、特異、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)。一種快速檢測磺胺二甲嘧啶殘留的膠體金試紙條，在高度方向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，所述反應(yīng)試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層上；所述反應(yīng)試劑載體吸附層從沾液端到手持端依次設(shè)有樣品纖維墊，金標(biāo)纖維墊，纖維素藥膜，手持端吸水材料墊；在所述樣品纖維墊、金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設(shè)有對照線C線、檢測線T線，所述對照線C線和檢測線T線相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶單抗；所述對照線C包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T包被有磺胺二甲嘧啶-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物。所述膠體金試紙條，其特征在于，在樣品纖維墊上對應(yīng)的保護(hù)膜層上表面標(biāo)有與所述檢測線T平行的可視的MAX標(biāo)志線。所述手持端吸水材料墊的材料是粗纖維吸水紙，所述金標(biāo)纖維墊的材料是吸附金標(biāo)蛋白的玻璃纖維棉。所述保護(hù)膜層為膠帶。所述基板支撐層為不吸水的塑料基板。還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應(yīng)試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應(yīng)試劑載體吸附層，所述外殼上表面對應(yīng)于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設(shè)有加樣窗和視窗。一種快速磺胺二甲嘧啶殘留的試劑盒，其特征在于包括上述任一膠體金試紙條和樣品稀釋用具。技術(shù)效果根據(jù)膠體金檢測的原理，將本技術(shù)的膠體金試紙條的粘液端浸入待測液中，或者在粘液端的樣品纖維層滴加待測液，待測液通過虹吸帶動(dòng)待檢磺胺二甲嘧啶殘留及金標(biāo)纖維墊中的膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體一起向硝酸纖維素膜方向擴(kuò)散，并最終滲入手柄端吸水紙中，擴(kuò)散過程中待檢磺胺二甲嘧啶殘留可與膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體相結(jié)合，進(jìn)而封閉膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體上磺胺二甲嘧啶結(jié)合點(diǎn)，阻止膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體與纖維素藥膜上偶聯(lián)磺胺二甲嘧啶的載體蛋白的檢測線T相結(jié)合，檢測線不能顯色，而兔抗小鼠IgG多抗則可與膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體相結(jié)合，對照線C顯紅色，則為陽性，反之，待測液中無磺胺二甲嘧啶則不能阻止膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體與纖維素藥膜上偶聯(lián)磺胺二甲嘧啶的載體蛋白的檢測線T相結(jié)合，檢測線T顯紅色，同樣，兔抗小鼠IgG多抗也與膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶抗體相結(jié)合，對照線C顯紅色，形成兩條紅色印記為陰性，如果纖維素藥膜上沒有顯示紅色標(biāo)記，則表明試紙條生效。本技術(shù)的膠體金試紙條不同于現(xiàn)有的試紙條之處在于所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設(shè)有對照線C線、檢測線T線，所述對照線C線和檢測線T線相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶單抗；所述對照線C包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T包被有磺胺二甲嘧啶-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物。本技術(shù)試紙條采用競爭抑制法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測食品中的磺胺二甲嘧啶殘留，用于動(dòng)物源性食品的檢測。本技術(shù)試紙條通過選定金標(biāo)纖維墊、T線、C線和樣品纖維墊上的相應(yīng)的生物包被試劑來實(shí)現(xiàn)對磺胺二甲嘧啶殘留的快速檢測，同時(shí)本技術(shù)試紙條兼顧檢測的靈敏度和特異性。本技術(shù)，優(yōu)選在樣品纖維墊上對應(yīng)的保護(hù)膜層上表面標(biāo)有與所述檢測線T線平行的可視的MAX標(biāo)志線。用于提醒操作人員，操作時(shí)待測液不要超過標(biāo)志線，以免引起假 陽性。本技術(shù)，優(yōu)選所述樣品纖維墊本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種快速檢測磺胺二甲嘧啶殘留的膠體金試紙條，其特征在于，在高度方向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，所述反應(yīng)試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層上；所述反應(yīng)試劑載體吸附層從沾液端到手持端依次設(shè)有樣品纖維墊，金標(biāo)纖維墊，纖維素藥膜，手持端吸水材料墊；在所述樣品纖維墊、金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設(shè)有對照線C線、檢測線T線，所述對照線C線和檢測線T線相互平行且與所述膠體金試紙條長度方向相垂直，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶單抗；所述對照線C線包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述檢測線T線包被有磺胺二甲嘧啶？牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張春山，張永勝，
申請(專利權(quán))人：北京中檢葆泰生物技術(shù)有限公司，
類型：實(shí)用新型
國別省市：