本發明專利技術涉及被孢霉屬微生物的?；?CoA合成酶同源物蛋白質及編碼該蛋白質的多核苷酸等。本發明專利技術提供例如含有高山被孢霉(Mortierella?alpina)的酰基-CoA合成酶同源物基因的多核苷酸、編碼酰基-CoA合成酶同源物蛋白質的多核苷酸、含有這些多核苷酸的表達載體及轉化體、使用該轉化體的脂質或脂肪酸的制造方法、或含有通過該制造方法制造的脂質或脂肪酸的食品等。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及編碼?；?C0A合成酶同源物的多核苷酸及其利用方法。
技術介紹
含有2個以上不飽和鍵的脂肪酸總稱為多不飽和脂肪酸(PUFA polyunsaturated),已知有花生四烯酸(ARA)、二高Y -亞麻酸(DGLA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等。多不飽和脂肪酸中存在在動物體內無法合成的多不飽和脂肪酸。因此，對于此種多不飽和脂肪酸，作為必需脂肪酸需要從食物中攝取。多不飽和脂肪酸分布廣泛，例如花生四烯酸可從由動物的腎上腺、肝臟中提取的脂質中分離。但是，動物臟器中所含有的多不飽和脂肪酸為少量，僅從動物臟器中分離提取，不足以進行大量供給。因此，不斷在開發通過培養各種微生物以生產多不飽和脂肪酸的 方法。其中，被孢霉屬(Mortierella)微生物作為生產包含花生四烯酸等多不飽和脂肪酸在內的脂質的微生物而廣為人知。此外，還進行了在植物體內生產多不飽和脂肪酸的嘗試。已知多不飽和脂肪酸構成三酰甘油等的貯藏脂質，在微生物的菌體內或植物種子中積累。?；?CoA合成酶(ACS)是使脂肪酸和輔酶A (CoA)進行硫酯化的酶，催化以下反應。脂肪酸+CoASH+ATP —酰基-CoA+AMP+Ppi通過ACS生成的?；?CoA參與包括脂質的生物合成、重構、通過β -氧化產生能量、蛋白質的?；?、通過脂肪酸的表達調節等各種生命現象。此外，還報道了 ACS參與從細胞外攝取脂肪酸、細胞內的脂肪酸輸送等(非專利文獻I及2)。鑒于以上內容，認為利用微生物、植物生產多不飽和脂肪酸等時,控制ACS的活性非常重要。已知在作為真核模式生物的酵母(釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))中有6個?；?CoA 合成酶基因(ScFAAl、ScFAA2、ScFAA3、ScFAA4、ScFATl、ScFAT2)(非專利文獻I)。由這些基因編碼的蛋白質在底物特異性、表達時期、細胞內的定位及功能上不同。在專利文獻I中，作為來自裂殖壺菌屬(Schizochytrium sp.)的?；?CoA合成酶基因(ScACS)記載了 9個基因。此外，在專利文獻I中，記載了編碼裂殖壺菌屬PUFA合酶系的基因和ScACS共表達時與不和ScACS共表達時相比，DPA (n-6) ( 二十二碳五烯酸(n_6))、DHA的產生增加。其他，也報道了來自動物及植物的酰基-CoA合成酶基因(非專利文獻2及專利文獻2) ο現有技術文獻專利文獻專利文獻I :日本特表JP2009-529890公報專利文獻2 :國際公開公報W00209295公報非專利文獻非專利文獻I B. B. A. 1771，286-298，2007非專利文獻2 Exp. Biol. Med.，233 (5)，507-521，2008
技術實現思路
在上述情況下，希望分離出在宿主細胞中表達時使該宿主細胞的脂肪酸生產量增加或使所產生的脂肪酸的組成改變的新型基因。本專利技術者深入研究的結果，成功地克隆出了編碼作為脂質生產菌的高山被孢霉(Mortierella alpina)(以下為 “M. alpina”)的 ACS 同源物(MaACS)的基因，從而完成了本專利技術。即本專利技術提供以下多核苷酸、蛋白質、表達載體、轉化體、使用該轉化體的脂質或脂肪酸組合物及食品等的制造方法以及根據該制造方法制造的食品等。 即本專利技術如下。 一種多核苷酸,其特征在于，為選自以下(a) (e)中任一項所述的多核苷酸(a)多核苷酸，其含有選自序列號1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、51及56所示的堿基序列中的任一個堿基序列。(b)多核苷酸，編碼如下蛋白質，該蛋白質由選自序列號2、7、12、17、22、27、32、37、42、47、52及57所示的氨基酸序列中的任一個氨基酸序列組成；(c)多核苷酸，其編碼如下蛋白質，該蛋白質由選自序列號2、7、12、17、22、27、32、37、42、47、52及57所示的氨基酸序列中的任一個氨基酸序列中I 100個氨基酸發生缺失、取代、插入及/或附加的氨基酸序列組成，且具有酰基-CoA合成酶活性、在宿主細胞表達時使該宿主細胞產生的脂肪酸的量增加的活性或使組成改變的活性；(d)多核苷酸，其編碼如下蛋白質，該蛋白質具有與選自序列號2、7、12、17、22、27、32、37、42、47、52及57所示的氨基酸序列中的任一個氨基酸序列有60%以上同一性的氨基酸序列，且具有?；?CoA合成酶活性、在宿主細胞表達時使該宿主細胞產生的脂肪酸量增加的活性或使組成改變的活性；及(e)多核苷酸，其與由選自序列號1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、51及56所示的堿基序列中的任一個堿基序列的互補堿基序列組成的多核苷酸在嚴謹條件下雜交，且編碼具有?；?CoA合成酶活性、在宿主細胞表達時使該宿主細胞產生的脂肪酸的量增加的活性或使組成改變的活性的蛋白質。根據上述中所述的多核苷酸，其特征在于，為以下(f)或(g)中任一項所述的多核苷酸(f)多核苷酸，其編碼如下蛋白質，該蛋白質由選自序列號2、7、12、17、22、27、32、37、42、47、52及57所示的氨基酸序列中的任一個氨基酸序列中I 10個氨基酸發生缺失、取代、插入及/或附加的氨基酸序列組成，且具有?；?CoA合成酶活性、在宿主細胞表達時使該宿主細胞產生的脂肪酸的量增加的活性或使組成改變的活性；及(g)多核苷酸，其編碼如下蛋白質，該蛋白質具有與選自序列號2、7、12、17、22、27、32、37、42、47、52及57所示的氨基酸序列中的任一個氨基酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列，且具有酰基-CoA合成酶活性、在宿主細胞表達時使該宿主細胞產生的脂肪酸的量增加的活性或使組成改變的活性。根據上述中所述的多核苷酸，其特征在于，含有選自序列號1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、51及56所不的喊基序列中的任一個喊基序列。根據上述中所述的多核苷酸，其特征在于，編碼由選自序列號2、7、12、17、22、27、32、37、42、47、52及57所示的氨基酸序列中的任一個氨基酸序列組成的蛋白質。根據上述 中任一項所述的多核苷酸,其特征在于,為DNA。 一種蛋白質,其特征在于，由上述 中任一項所述的多核苷酸編碼。 一種載體，其特征在于，含有上述 中任一項所述的多核苷酸。 一種非人轉化體，其特征在于，導入了上述 中任一項所述的多核苷酸或導入了上述中所述的載體。 一種脂質或脂肪酸組合物的制造方法，其特征在于，從上述中所述的轉化體的培養物中提取脂質或脂肪酸組合物。根據上述中所述的方法，其特征在于，所述脂質為三酰甘油。根據上述中所述的方法，其特征在于，所述脂肪酸為碳數18以上的多不飽和脂肪酸。 一種食品、醫藥品、化妝品或肥皂，其特征在于，含有通過上述中所述的制造方法提取的脂質或脂肪酸組合物。本專利技術的多核苷酸可用于適合的宿主細胞的轉化，如此得到的轉化體可用于制造脂肪酸組合物、食品、化妝品、醫藥、肥皂等。更加具體地說，本專利技術的轉化體生產脂質及脂肪酸的效率極高。因此，本專利技術可有效用于制造需要大量脂質或脂肪酸的醫藥品或健康食品。附圖說明圖I表示MaACS-I的cDNA序列和推定氨基酸序列的對應圖。圖2A表示M本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：落合美佐，
申請(專利權)人：三得利控股株式會社，
類型：
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。