純化多肽的方法技術

本發明專利技術提供用于從包含多肽和至少一種污染物的組合物純化多肽的方法及包含通過該方法純化的多肽的制劑。該純化方法包括陽離子交換材料和/或混合型材料。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術提供用于從包含多肽和至少一種污染物的組合物，及包含通過該方法純化的多肽的制劑。
技術介紹
多肽的大規模、經濟純化是生物技術產業越來越重要的問題。通常，使用哺乳動物細胞系或細菌細胞系，通過細胞培養來產生多肽，該細胞系通過插入包含該多肽的基因的 重組質粒改造為產生目的多肽。由于所使用的細胞系是活生物，必須用包含糖類、氨基酸和生長因子(通常從動物血清的制劑供給)的復合生長培養基飼養它們。希望從飼喂給細胞的化合物的混合物及從細胞自身的副產物分離目的多肽。通常嘗試用不同層析技術的組合來從細胞產生的其他產物分離目的多肽。這些技術根據它們的電荷、疏水性程度、大小或目的多肽與固定化捕獲劑之間的特異性相互作用來分開多肽的混合物。對于這些技術中的每一種，可獲得幾種不同的層析樹脂，允許根據所涉及的具體多肽精確調整純化方案。這些分離方法中的每一種的本質是，可以使多肽或者以不同的速率沿長柱向下移動，達到隨著它們進一步沿柱下移而提高的物理分離，或者選擇性黏附于分離介質，然后通過不同溶劑差異洗脫。在一些情況下，在雜質特異性黏附于柱而目的多肽不黏附于柱時，從雜質分離目的多肽，即，目的多肽存在于“流穿液(flow-through) ” 中。大規模、低成本純化多肽至足以用作人用藥物的純度仍是巨大挑戰。專利技術概述本文提供用于從包含多肽和至少一種污染物的組合物，其中，該方法包括(i)或(ii) (i) (a)按高于約150g/L陽離子交換材料的加樣密度將該組合物加樣至陽離子交換材料上和(b)將從該陽離子交換材料回收的組合物加樣至混合型材料上的順次步驟；或(ii) (a)將該組合物加樣至混合型材料上和(b)按高于約150g/L陽離子交換材料的加樣密度將從混合型材料回收的組合物加樣至陽離子交換材料上的順次步驟。在該方法中任一種的一些實施方案中，該多肽具有約6和約10之間的pi。在一些實施方案中，該多肽具有約7和約9之間的pi。在該方法中任一種的一些實施方案中，該多肽是抗體或免疫黏附素。在一些實施方案中，該多肽是免疫黏附素。在一些實施方案中，該多肽是抗體。在一些實施方案中，該抗體是單克隆抗體。在一些實施方案中，該單克隆抗體是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一些實施方案中，該單克隆抗體是IgG單克隆抗體。在一些實施方案中，該抗體是抗原結合片段。在一些實施方案中，該抗原結合片段選自Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、scFv、Fv和雙抗體。在該方法中任一種的一些實施方案中，該至少一種污染物是中國倉鼠卵巢蛋白質(CHOP)、浸出(leached)的A蛋白、DNA、聚集蛋白質、細胞培養基成分、慶大霉素和病毒污染物中的任意一種或多種在該方法中任一種的一些實施方案中，(i)和/或(ii)中的順次步驟是連續的。在該方法中任一種的一些實施方案中，(i)和/或(ii)中的順次步驟是不連續的。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法是(i)。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法是(ii)。在該方法中任一種的一些實施方案中，該加樣密度在約150g/L和約2000g/L之間。在一些實施方案中，該密度在約150g/L和約1000g/L之間。在一些實施方案中，該密度在約500g/L和約700g/L之間。 在該方法中任一種的一些實施方案中，該陽離子交換材料包含羧酸官能團或磺酸官能團。在一些實施方案中，該官能團是磺丙基、磺乙基、磺異丁基或羧基。在一些實施方案中，該陽離子交換材料是膜、monolith或樹脂顆粒。在一些實施方案中，該陽離子交換材料是樹脂。在一些實施方案中，該陽離子交換材料是Mustang S、Sartobind S、S03 Monolith、SCeramic HyperD、Poros HS50、Poros HS20、橫丙基-Sepharose FastFlow (SPSFF) > SP-Sepharose XL (SPXL)、CM Sepharose Fast Flow、CaptoS、Fractogel SeHiCap、Fractogel S03或Fractogel COO。在一些實施方案中，該陽離子交換材料是PorosHS50。在該方法中任一種的一些實施方案中，該混合型材料包含能夠進行陰離子交換和疏水作用的官能團。在一些實施方案中，該混合型材料是Capto-Adhere樹脂、MEP HyperCel樹脂、HEA HyperCel樹脂、PPAHyperCeI樹脂或ChromaSorb膜。在一些實施方案中，該混合型材料是Capto-Adhere樹脂。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法包括隨同該陽離子交換材料和/或陰離子交換材料使用平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液，且該平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液的電導率在約2mS/cm至約25mS/cm之間。在一些實施方案中，該平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液的電導率在約3mS/cm至約8mS/cm之間。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法包括隨同該陽離子交換材料和/或陰離子交換材料使用平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液，且該平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液的PH在約4. 5和約6. 5之間。在該方法中任一種的一些實施方案中，隨同該陽離子交換材料和/或陰離子交換材料的平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液是相同的。在該方法中任一種的一些實施方案中，隨同該陽離子交換材料和/或陰離子交換材料的平衡緩沖液、洗滌緩沖液和/或加樣緩沖液是不同的。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法進一步包括使包含該多肽的組合物在步驟(a)和(b)之前或之后經受一個或多個其他純化步驟。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法進一步包括回收該純化的多肽。在該方法中任一種的一些實施方案中，該方法進一步包括將該純化的多肽與可藥用載體組合。附圖簡述圖 IA-D 顯示用 Poros HS50、SPSFF, S03Monolith 和 Mustang S 純化抗-CDlla 抗體的層析譜。圖2 顯示用 SPSFF、Poros HS50、Mustang S 和 S03monolith 收集不同量的包含抗-CDlla抗體的產物(g/L CV或MV)的C/CQ (Mab ( “單體抗體”)濃度)和C/C。(中國倉鼠卵巢蛋白質(“CHOP”)濃度)。C是所收集的級分中Mab或CHOP的濃度，C0是加樣物(load)中Mab或CHOP的濃度。圖3 顯示用 S03monolith、Mustang S、SPSFF 和 Poros HS50 收集不同量的包含抗-CDlla抗體的產物(g/L CV或MV)的C/CQ(Mab濃度)和C/CQ(高分子量(“HMW”)濃度)。C是所收集的級分中Mab或HMW的百分比，C0是加樣物中Mab或HMW的百分比。圖4A-D 顯示用 S03monolith、Mustang S、SPSFF 和 Poros HS50 收集不同量的包含抗-CDl Ia抗體的產物(g/L CV或MV)的C/Q (Mab濃度)、C/C0 (HMW1濃度)和C/Q (HMW2濃度)。 圖5A顯示用Poros HS50加樣的包含抗-⑶Ila抗體的產物中HMW和Mab的層析譜；圖5B顯示使用Poro本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：H·F·劉，B·D·凱利，D·E·麥爾斯，B·麥庫伊，K·M·佩蒂，
申請(專利權)人：弗·哈夫曼拉羅切有限公司，
類型：
國別省市：