基于被破壞的腺病毒的抗濫用藥物疫苗制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種腺病毒-抗原偶聯(lián)物，其包含（a）被破壞的帶有外殼蛋白的腺病毒和（b）偶聯(lián)至被破壞的腺病毒的外殼蛋白的抗原，本發(fā)明專利技術(shù)還涉及一種偶聯(lián)物，其包含（a）被破壞的帶有外殼蛋白的腺病毒和（b）偶聯(lián)至被破壞的腺病毒的外殼蛋白的抗原。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了一種使用上述偶聯(lián)物，在人體內(nèi)誘導(dǎo)針對抗原的免疫應(yīng)答的方法。本發(fā)明專利技術(shù)進(jìn)一步提供了一種腺相關(guān)病毒載體，其包含的核酸序列編碼針對可卡因的抗體。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】基于被破壞的腺病毒的抗濫用藥物疫苗 相關(guān)申請的交叉引用本專利申請要求在2010年3月17日提交的美國臨時(shí)專利申請US61/314，847以及2010年8月13日提交的美國臨時(shí)專利申請US61/373，704的權(quán)益，其通過引用并入本文。 關(guān)于聯(lián)邦政府資助的聲明本專利技術(shù)在美國國立衛(wèi)生研究院提供的基金號為R01DA025305、RC2DA028847和HHSN271200800585P的政府資助下進(jìn)行。政府享有對本專利技術(shù)的某些權(quán)利。
技術(shù)介紹
藥物成癮是世界范圍的主要問題。雖然采取了多種策略來預(yù)防和治療藥物成癮， 但巨大的經(jīng)濟(jì)和社會成本仍然與藥物成癮相關(guān)。盡管為了開發(fā)預(yù)防和治療藥物成癮的策略，人們進(jìn)行了數(shù)十年的努力，但是收效甚微。在尼古丁成癮方面，積極的行為干預(yù)例如個(gè)體或群體咨詢，或單獨(dú)的認(rèn)知治療，或與藥物治療相結(jié)合，如尼古丁替代療法(例如，通過嚼口香糖、透皮貼齊 、鼻腔噴齊 、吸入劑或錠劑)、安非他酮(ΖΥΑΒΝ )，和伐尼克林(CHANTIX )等，都提高了戒煙的成功率，但其成功率始終僅高于安慰劑組的I. 5到2倍，長期(I年)停止吸煙率僅為5%到20%。在治療可卡因成癮方面同樣沒有成功案例，目前還沒有小分子、單克隆抗體或酶療法被批準(zhǔn)用于預(yù)防或治療可卡因成癮。疫苗代表了預(yù)防和治療藥物成癮的另一種策略，抗尼古丁和其他小分子，例如可卡因和嗎啡/海洛因，的疫苗方面的研究結(jié)果已有報(bào)道(Carrera等，Proc. Natl.Acad. Sci USA,98:1988-1992(2001) ；Anton 和 Leff, Vaccine,24:3232-3240(2006)；Carrera 等，Nature,378:727-730 (1995) ；Hat sukami 等，Cl in.Pharmaco I·Ther.,78:456-467(2005) ；Maurer 等，Eur.J. Immunol.，35:2031-2040(2005))。 但在有效疫苗的開發(fā)中最主要的障礙是，大多數(shù)的成癮藥物，就像大多數(shù)小分子那樣，都是弱免疫原。可以通過將藥物(或其類似物)與大分子，例如蛋白質(zhì)，進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)，來提高成癮藥物的免疫原性，使用這種策略的疫苗已經(jīng)在動物和人體中進(jìn)行了測試(參見，例如，Bonese,等，Nature, 252:708-710 (1974) ；Killian,等，Pharmacol.Biochem. Behav.，9:347-352(1978) ；Carrera 等，Nature, 378:727-730(1995) ；Carrera等，Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 98:1988-1992 (2001) ；Carrera 等，Proc. Nat. Acad. Sci.USA, 97:6202-6206 (2000) ；Fox 等，Nat. Med.，2:1129-1132 (1996) ;Kantak 等，Psychopharmacology (Berl)，148:251-262 (2000);和 Moreno 等，Mol. Pharm.，7:431-441 (2010))。盡管這些方法取得了一定成功，但是通過將成癮性藥物的類似物偶聯(lián)至大分子載體所激發(fā)的免疫的程度是有限的(參見，例如，Kantak等，參照前述；Keyler等，Int. Immunopharmacol.，8:1589-1594(2008);和 Kinsey 等，Immunol. Cell Biol.，87:309-314(2009))。直接針對某些成癮藥物的抗體也已有報(bào)道(參見，例如，Hardin等，J.Pharmacol.Exp.Ther.,285:1113-1122 (1998) ；Proksch 等，J.Pharmacol.Exp.Ther. , 292:831-837 (2000);和 Byrnes-Blake 等,Int. ImmunopharmacoI. , 1:329-338 (2001))。因此，需要其他的組合物和方法來預(yù)防或治療藥物成癮。本專利技術(shù)即提供了這樣的組合物和方法。本專利技術(shù)下文中提供的詳細(xì)說明能使本專利技術(shù)的上述以及其他優(yōu)點(diǎn)更加清楚。 專利技術(shù)簡述本專利技術(shù)提供了一種在人體內(nèi)誘導(dǎo)針對抗原的免疫應(yīng)答的方法。該方法包括給予人腺病毒-抗原偶聯(lián)物，其含有(a)被破壞的帶有外殼蛋白的腺病毒和(b)偶聯(lián)至被破壞的腺病毒的外殼蛋白的抗原，其中所述抗原被呈遞至人體免疫系統(tǒng)，從而在人體中誘導(dǎo)針對抗原的免疫應(yīng)答。本專利技術(shù)還提供了一種腺病毒-抗原偶聯(lián)物，其含有(a)被破壞的帶有外殼蛋白的腺病毒和(b)偶聯(lián)至被破壞的腺病毒的外殼蛋白的抗原。本專利技術(shù)提供了一種偶聯(lián)物，其含有(a)分離的或純化的腺病毒外殼蛋白和(b)偶·聯(lián)至分離的或純化的腺病毒外殼蛋白的抗原。本專利技術(shù)進(jìn)一步提供了一種腺相關(guān)病毒載體，其含有編碼直接針對可卡因抗體的核酸序列，且該核酸序列可操作地與啟動子連接，其中所述核酸序列可以在人體內(nèi)表達(dá)以產(chǎn)生所述抗體。 附圖簡要說明圖IA舉例說明了使用I-乙基-3-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(S-NHS)將GNC偶聯(lián)至腺病毒衣殼蛋白的步驟。圖IB是免疫印跡的結(jié)果，顯示了 GNC共價(jià)偶聯(lián)至腺病毒衣殼蛋白(第I道Ad5LacZ,第2道偶聯(lián)至GNC的被破壞的Ad5 (30:1),和第3道偶聯(lián)至GNC的被破壞的Ad5 (100:1))。圖IC是免疫印跡的結(jié)果，顯示了在腺病毒-GNC偶聯(lián)物中腺病毒衣殼蛋白的表達(dá)(第4道未偶聯(lián)的Ad5LacZ，第5道偶聯(lián)至GNC的被破壞的Ad5(30:1的比例)，和第6道偶聯(lián)至GNC的被破壞的Ad5 (100:l))o圖ID顯示dAd5GNC缺乏感染能力，通過dAd5GNC疫苗無法介導(dǎo)其LacZ轉(zhuǎn)基因的表達(dá)進(jìn)行評價(jià)。圖2A顯示了如實(shí)施例I所述誘導(dǎo)的抗-GNC IgG抗體的總滴度隨時(shí)間的變化。在第0、3和6周，肌內(nèi)免疫接種給予BALB/c小鼠(n=20) 4 μ gdAd5GNC。在第0、2、7和13周用ELISA評價(jià)抗體滴度，ELISA針對偶聯(lián)至BSA的GNC，結(jié)果以平均值土SEM表示。圖2B顯示了用實(shí)施例I所述方法誘導(dǎo)的抗-GNC抗體的免疫球蛋白同種型。用ELISA對血清進(jìn)行評價(jià)，ELISA使用針對IgGl、IgG2a、IgG2b和IgM的同種型特異性二抗?？贵w滴度以平均值土SEM表示。圖2C顯示了 dAd5GNC免疫血清與BSA-GNC結(jié)合的抑制，通過ELISA在存在濃度增加的GNC或可卡因的情況下進(jìn)行檢測。圖2D顯示了用3H-可卡因激發(fā)空白小鼠和經(jīng)dAd5GNC免疫的小鼠后，所述BALB/c小鼠的腦和血清中可卡因的水平。圖中顯示了在空白小鼠和經(jīng)免疫小鼠的腦(ng/g腦)和血清(ng/mL血清)中可卡因的水平，以及處理組中可卡因在血液中的水平與在腦中水平的比(g/mL)。圖2E顯示了用3H-可卡因(2. 5 μ g)激發(fā)Balb/c小鼠后,該Balb/c小鼠中結(jié)合至IgG的血清可卡因的分?jǐn)?shù)。暴露于3H-可卡因I分鐘后，收集血清，將其與蛋白G瓊脂糖混合，評價(jià)結(jié)合的3H-可卡因(即，結(jié)合至IgG的3H-可卡因)相對于上清液中3H-可卡因的比。圖3A為各組小鼠自主活動的可視化追蹤的示本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：R·G·克雷斯托，B·德，M·?？怂?/a>，J·羅森博格，S·M·凱明斯基，
申請(專利權(quán))人：康奈爾大學(xué)，
類型：
國別省市：