本發明專利技術描述了一種能夠在兔中治療和/或預防兔出血熱病毒感染的治療劑，即，一種重組副痘病毒，其特征在于由外來核酸表達來自兔出血熱病毒(RHDV)的VP60主要衣殼蛋白。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】表達兔出血熱病毒的VP60主要衣殼蛋白的副痘病毒描述本專利技術涉及一種能夠在兔中治療和/或預防兔出血熱病毒感染的治療劑，即，一種重組副痘病毒，其特征在于由外來核酸表達來自兔出血熱病毒(RHDV)的VP60主要衣殼蛋白。
技術介紹
兔出血熱病毒(RHDV)是野兔和家兔(如歐洲野兔種(Oryctolagus cuniculus))中的一種高度接觸性疾病，它首次在1984年于中華人民共和國報道。RHDV隨后在1987年至1989年期間傳播遍及歐洲。感染的成年兔通常在感染后48至72小時內死于壞死性肝炎和出血性綜合征。群體中的發病率和死亡率可以高達90-100%。本疾病是商品兔生產中嚴重經濟損失以及野兔中高死亡率的原因。遍及世界的商 品兔生產是一項重要產業,尤其在其中小規模兔養殖業良好建立的亞洲和中歐。RHDV的高度接觸性和致命性質已經產生遍及許多國家的重大經濟影響。在多個國家如新西蘭和澳大利亞，額外的保護方面如兔子數量的控制已經導致理解和控制本疾病的明顯國際性努力。許多實驗室中的工作導致將RHD病毒基于衣殼形態、核酸類型和其他物理特征表征為一種杯狀病毒。病毒粒子由無包膜的二十面體的直徑35-40nm的衣殼組成，所述衣殼主要由60kDa主要多肽種類組成。該病毒由大約7. 4kb的正義單鏈RNA基因組編碼并且組織為編碼主要60kDa(VP60)衣殼蛋白、12kDa推定蛋白和3種非結構蛋白(包括RNA聚合酶和蛋白酶)的兩個可讀框。病毒衣殼因大約180拷貝的單個VP60蛋白的多聚化產生。已經做出許多努力以產生在兔群體中治療和預防RHDV感染的疫苗，大部分所述疫苗依賴于VP60衣殼蛋白的施用。VP60衣殼蛋白已經在多種表達系統中產生，如酵母(Boga 等人，Journal of General Virology (1997)，78，2315-2318)、桿狀病毒 / 細胞培養系統(Laurent 等人,Journal of Virology, 1994 年 10 月，6794-6798，Marin 等人，Virus Research 39 (1995) 119-128)和巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris) (0. Farnos等人，Antiviral Research 81(2009)25-36)。重組產生的VP60蛋白已經隨后作為有效的疫苗應用。然而重組蛋白的生產伴隨諸多難題，如形成結構上不規則的蛋白質聚集物、費時和復雜的蛋白質純化系統，和難以產生足夠質量和數量用于商業生產。還已經在馬鈴薯植物中產生重組VP60并且隨后將其作為葉提取物中的疫苗應用(Castanon 等人，Journal of Virology, 1999 年 5 月，第 4452_4455 頁)。雖然有效在接種的兔中產生針對VP60的抗體，但是從植物產生提取物與細胞培養物中產生病毒相比是比較慢的。必須培育、收獲和加工轉基因植物，因此使產量限于不適于商業應用的規模。類似地，豌豆衍生的重組VP60可以導致不良產率并因此限制商業應用(MikschofskyH等人，Plant Biotechnol J. 2009年8月；7(6) : 537-549)。相似的復雜情況在通過植物中的表達產生VP60抗原的相關嘗試中是明顯的。在胡蘿卜中的表達導致相對于有效免疫而言不充分的表達水平(Mikschofsky, H.等人，2009，Journal of Agricultural Science147, 43-49, Mikschofsky, H.等人，2009，In Vitro Cell. Dev. Biol. Plant 45,740-749)。使用霍亂毒素B作為功能性佐劑的煙草植物表達也表明，除與植物表達系統中的生產相關的其他復雜性之外，VP60的表達水平是次最佳的(Mikschofsky, H.等人，2009，Plant Sci.doi : 10.1016/j.plantsci. 2009. 03. 010(Cholera toxin B as a functionaladjuvant intobacco plants (煙草植物中作為功能性佐劑的霍亂毒素B))。使用病毒作為RHDV疫苗為重組VP60蛋白的施用提供了一個有前景的替代。基于疫苗的痘苗病毒已經應用于RHDV(Bertagnoli等人，Vaccine,第14卷，第6期，第506-510頁，1996)，雖然由痘苗病毒誘導的長期免疫可以導致再接種不成功或針對痘苗病毒編碼的外來抗原的保護作用減弱。在目前，歸咎于不能在細胞培養系統中培養RHDV (因此阻礙病毒疫苗生產)，現有疫苗涉及感染和處死動物，以便提取可以隨后分離出RHDV的肝臟。這導致借助感染和處死而獲得的滅活或死病毒疫苗，這是一項就動物保護和財務局限性而言行為具有明顯缺點的行為。從感染動物獲得的RHDV(在現有技術的疫苗中)隨后在應用于接種之前滅活。與本專利技術的優選活的副痘-VP60病毒相比，這導致活性顯著降低。在其制造期間還需要額外的 病毒滅活產物并且在應用之前經常需要額外的佐劑，以便增加接種后產生的免疫應答。副痘病毒(PPV)是痘病毒科(Poxviridae)的一個屬，具有模式種PPV綿羊病毒(羊口瘡病毒，0RFV)，它為用作疫苗載體提供幾個潛在優點載體(Rziha等人，Journal ofBiotechnology 73 (1999) 235-242)。有利于ORFV疫苗載體的證據包括有限的宿主范圍(綿羊和山羊)、其嗜性限于皮膚、無全身性感染、短期載體特異性保護性免疫和在感染部位出人意料強烈地刺激快速固有細胞免疫機制(Buttner，Μ.和H. J. Rziha. 2002. J. Vet. Med. BInfect. Dis. Vet. PublicHealth 49:7-16.)。已經成功地施用ORFV重組體作為針對多種病毒感染的疫苗，如針對豬中(Dory等人，Vaccine 24 (2006) 6256-6263，和 van Rooi j 等人，Vaccine 28(2010) 1808-1813)或小鼠中(Fischer 等人，Journal of Virology, 2003 年 9 月，第 9312-9323 頁)的偽狂犬病毒以及針對大鼠中的博爾納病毒(Henkel等人，J. ofVirology 2005，第314-325頁)。然而ORFV未曾在兔中應用或用作針對RHDV的疫苗。盡管近來在針對RHDV的疫苗方面取得進展，但是仍迫切需要強用于控制野生兔群和商品兔群中RHDV感染的新方法。
技術實現思路
根據現有技術，作為本專利技術基礎的技術問題是提供能夠在兔中治療和/或預防兔出血熱病毒感染的有效治療劑。這個問題由獨立權利要求的特征解決。本專利技術的優選實施方案由從屬權利要求提供。本專利技術因此涉及一種重組副痘病毒，其包含來自兔出血熱病毒(RHDV)的VP60主要衣殼蛋白。羊口瘡病毒提供有限的宿主范圍(綿羊和山羊)和嗜性，并且因此是相對安全的病毒載體。在一個實施方案中，本專利技術副痘病毒的特征在于來自兔出血熱病毒(RHDV)的VP60主要衣殼蛋白由外來核酸序列表達。從重組副痘病毒表達的RHDV的VP60蛋白發揮作用以在治療的動物中誘導抗原本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：阿希姆·日哈，
申請(專利權)人：里姆瑟藥物股份公司，
類型：
國別省市：
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