本發明專利技術公開了一種長鏈二元酸生產菌株——熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)CATN145，其保藏號為CCTCC?M?2011192。本發明專利技術還公開了所述菌株的應用以及一種利用所述菌株生產二元酸的方法。本發明專利技術的熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)CAT?N145，對于不同碳鏈長度的正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物都具有很高的轉化性能，而且雜酸含量低，適用性非常廣泛，從而可以大大簡化發酵過程控制，易于提取純化，具有非常好的市場應用前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物領域，具體地說，是關于ー種長鏈ニ元酸生產菌株熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CAT N145及其用于發酵生產長鏈ニ元酸的應用。
技術介紹
長鏈ニ元酸是合成香料、尼龍工程塑料、熱熔膠、樹脂、耐寒性增塑劑、醫藥和農藥等的重要原料。特別是十二碳ニ元酸(DC12)和十四碳ニ元酸(DC14),它們分別是合成具有特殊性能和廣泛用途的高級尼龍工程塑料尼龍1212和尼龍1414等的重要原料。十二碳以上的長鏈ニ元酸，自然界中不存在，目前化工上也沒有經濟可行的合成方法，因此，利用微生物的特異性轉化能力，在常溫常壓下轉化正烷烴或脂肪酸生成相應的長鏈ニ元酸，是目前業內研究的重點。目前，用于轉化正烷烴或脂肪酸生成相應長鏈ニ元酸的微生物主要是熱帶假絲酵母(Candida tropicalis),雖然轉化生產ニ元酸的能力各有千秋,但沒有關于ー株菌種對不同碳鏈都具有較強轉化能力的報道，例如申請號為97103876. 7的中國專利技術專利申請，公開了ー種熱帶假絲酵母(Candidatropicalis),可用于同步發酵正十三燒生產相應的i^一燒1,11- ニ羧酸；申請號為02100215. 0的中國專利技術專利申請中，公開的熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)可用于同步發酵正十四燒生產十二燒1,12- ニ羧酸；申請號為02145431.0的中國專利技術專利申請中，公開了ー種熱帶假絲酵母(Candida tropicalis),可用于生產a、w-正長鏈十四碳ニ元酸；申請號03105127. 8的中國專利技術專利申請中，公開了ー種熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)，可用于同步發酵正十四烷生產十四碳ニ元酸；申請號200610127968. 6的中國專利技術專利申請中，公開了 ー種熱帶假絲酵母(Candida tropicalis),可用于生產十二碳ニ元酸；申請號89102548. 0的中國專利技術專利申請中，公開了ー種熱帶假絲酵母(Candidatropicalis),可用于發酵正燒烴生產十七碳ニ羧酸；申請號94100594. I的中國專利技術專利申請中，公開了ー種熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)，可用于發酵正烷烴生產十五碳ニ羧酸；申請號95117436. 3的中國專利技術專利申請中，公開了ー種熱帶假絲酵母(Candidatropicalis),可用于同步發酵生產十二碳ニ羧酸。
技術實現思路
本申請的專利技術人通過以現有長鏈ニ元酸生產菌株NP-6-5為出發菌株，通過常規誘變方法進行誘變育種后，篩選得到了一株新的熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CATN145，其能夠將不同長度的正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物高效轉化為相應的ニ元酸。因此，本專利技術的ー個方面，提供了一種長鏈ニ元酸生產菌株——熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CAT N145,其對于不同碳鏈長度的ニ元酸具有廣泛的適用性。本專利技術的熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CAT N145，其保藏號為CCTCCM2011192。與熱帶假絲酵母ATCC 20336的CYP52A18基因相比，以其ATG起始密碼子開始計算，本專利技術的熱帶假絲酵母(Candida tropicalis) CAT N145,其pox4基因的325位、901位和1886位堿基為A，其fao基因的539位堿基為G，其CYP52A18基因在170位和813位的堿基分別為的T和C。根據本專利技術，所述pox4基因的序列如SEQ ID NO 2所示，所述fao基因的序列如SEQ ID NO 4所示，所述CYP52A18基因的序列如SEQ ID NO 6所示。 根據本專利技術，所述長鏈ニ元酸包括C9 18的長鏈ニ元酸。本專利技術的另ー個方面，提供了所述菌株CAT N145用于轉化正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物生產相應的ニ元酸的應用。本專利技術的第三個方面，提供了一種長鏈ニ元酸的生產方法。根據本專利技術，所述長鏈ニ元酸的生產方法是通過發酵菌株CAT N145轉化C9 18正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物生成相應的長鏈ニ元酸。根據本專利技術的優選實施例，所述菌株CAT N145的發酵培養基如下玉米漿I 5g/L,酵母膏 I 5g/L, KH2PO4 4 12g/L, NaCl 0 3g/L, KNO3 4 12g/L，蔗糖10 40g/L，尿素0. 5 3g/L，正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物400 300mL/L, pH 至 7. 5 7. 6。優選的，其發酵過程描述如下取甘油管種子接入種子培養基，在28 31°C培養，搖床轉速200 250rpm，當種子液的0D620達到0. 8以上(水稀釋30倍)時，將種子液接種到裝有發酵培養基的搖瓶中，在28 31°C培養，搖床轉速200 250rpm，發酵周期90 120hours。本專利技術中，培養基中加入的正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物的碳鏈長度需要與所需生產的ニ元酸的碳鏈長度相對應。本專利技術的第四個方面，提供了ー種來源于熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CATN145的pox4基因，其序列如SEQ ID NO 2所示。本專利技術的第五個方面,提供了ー種來源于熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CATN145的fao基因，其序列如SEQ ID NO 4所示。本專利技術的第六個方面,提供了ー種來源于熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CATN145的CYP52A18基因，其序列如SEQ ID NO 6所示。本專利技術的長鏈ニ元酸生產菌株-熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CATN145，對于不同碳鏈長度的正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物都具有很高的轉化性能，適用性非常廣泛，具有非常好的市場應用前景。附圖說明圖I為本專利技術的菌株CAT N145的pox4基因與熱帶假絲酵母ATCC 20336的pox4基因的序列比對示意圖，其中P0X4為ATCC 20336的pox4基因，P0X4-1為本專利技術的菌株CATN145的pox4基因。圖2為本專利技術的菌株CAT N145的fao基因與熱帶假絲酵母ATCC 20336的fao基因的序列比對示意圖，其中，faol為ATCC 20336的faol基因，fao為本專利技術的菌株CATN145的faol基因。圖3為本專利技術的菌株CAT N145的CYP52A18基因與熱帶假絲酵母ATCC 20336的CYP52A18基因的序列比對示意圖，其中，CYP52A18為ATCC 20336的CYP52A18基因，CYP18為本專利技術的菌株CATN145的CYP52A18基因。具體實施例方式以下結合具體實施例，對本專利技術做進ー步詳細說明。應理解，以下實施例僅用于說明本專利技術而非用于限定本專利技術的范圍。本專利技術的熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)CAT N145已于2011年6月9日提交位于武漢大學的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC M 2011192。以下實施例中所使用的培養基如下I、活化培養基/甘油罐培養基YPD培養基配方(w/v本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種長鏈二元酸生產菌株CAT？N145，其特征在于，所述菌株為熱帶假絲酵母(Candida？tropicalis)，其保藏號為CCTCC？M？2011192。
【技術特征摘要】
1.一種長鏈ニ元酸生產菌株CAT N145，其特征在于，所述菌株為熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，其保藏號為 CCTCC M 2011192。2.根據權利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，與熱帶假絲酵母ATCC20336的pox4基因相比，以其ATG起始密碼子開始計算，本菌株的pox4基因在325位、901位和1886位堿基為A。3.根據權利要求2所述的菌株CATN145，其特征在于，所述pox4基因的序列如SEQ IDNO 2所示。4.根據權利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，與熱帶假絲酵母ATCC20336的faol基因相比，以其ATG起始密碼子開始計算，本菌株的fao基因在539位堿基為G。5.根據權利要求4所述的菌株CATN145，其特征在于，所述fao基因的序列如SEQIDNO -A所示。6.根據權利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，與熱帶假絲酵母ATCC20336的CYP52A18基因相比，以其ATG起始密碼子開始計算，本菌株的CYP52A18基因在170位的堿基為T，813位的堿基為C。7.根據權利要求6所述的菌株CATN145，其特征在于，所述CYP52A18基因的序列如SEQ ID NO 6 所示。8.根據權利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，所述長鏈ニ元酸包括9 18碳ニ元酸。9.權利要求I 8中任一項所述的菌株CATN145用于生產長鏈ニ元酸的應用，其特征在于，用于發酵轉化的原料為正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物，生產相應的長鏈ニ元酸。10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述長鏈ニ元酸包括9 18碳ニ元酸。11.一種長鏈ニ元酸的生產方法，其特征在于，通過發酵熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)CAT N145轉化正烷烴、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它們的混合物生成相應的長鏈ニ元酸。12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述長鏈ニ元酸包括9 18碳ニ元酸。13.根據權利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述菌株CATN145的發酵培養基如下 玉米漿 I 5g/L，酵母膏 I 5g/L, KH2PO4 4 12g/L，NaCl 0 3g/L，KN03 4 12g/L，蔗糖10 40g...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉馳，李乃強，廖錦繡，劉文山，汪江林，
申請(專利權)人：上海凱賽生物技術研發中心有限公司，上海凱賽生物科技有限公司，山東凱賽生物科技材料有限公司，
類型：發明
國別省市：
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