一種肝素鈉的提取方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開的是一種肝素鈉提取方法，其特點在于解決傳統(tǒng)酶解工藝存在樹脂吸附效果差的問題，由于酶解工藝會分解出油脂，而肝素鈉生產(chǎn)用大孔徑樹脂易被油脂堵塞而降低吸附效果減少收率，本發(fā)明專利技術(shù)通過樹脂與酶解液分離的辦法，酶解罐恒溫加熱酶解液，然后再循環(huán)裝置中循環(huán)，使油脂不接近樹脂從而無法使其堵塞，這樣既提高了樹脂吸附增加收率，也避免了樹脂污染減少樹脂修復(fù)處理的難度，一舉兩得。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)方法涉及的是ー種以豬小腸粘膜為材料的提取肝素鈉技術(shù)，方法通過生物酶解技術(shù)、層析技術(shù)提高了現(xiàn)有技術(shù)水平，從而提高了肝素鈉產(chǎn)量的一種提取方法。
技術(shù)介紹
心腦血管疾病是人類的頭號疾病殺手。隨著人們生活水平提高帶來的營養(yǎng)過剰、全球環(huán)境的惡化、生活節(jié)奏加快、人口老齡化加劇，致使全球心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率正逐年增高，肝素的出現(xiàn)為眾多心腦血管疾病患者創(chuàng)造了生命的奇跡。目前肝素是世界上最有效和臨床用量最大的抗凝血藥物，主要應(yīng)用于心腦血管疾病和血液透析治療，其中，其在血液透析治療中是唯一有效的特效藥物。臨床應(yīng)用及研究顯示，肝素除具有抗凝血作 用外，還具有其他多種生物活性和臨床用途，包括降血脂作用、抗中膜平滑肌細胞(SMC)增生、促進纖維蛋白溶解等作用。此外，低分子肝素是由肝素原料藥作為原料進ー步加工成的一大類抗血栓的藥物，具有更為廣泛的臨床醫(yī)學(xué)用途，成為治療急性靜脈血栓和急性冠脈綜合癥(心絞痛、心肌梗塞)等疾病的首選藥物。肝素是世界上迄今為止已知的分子結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的化合物，短期內(nèi)無法人工化學(xué)合成，目前只有來源于豬小腸粘膜的肝素能夠用于臨床治療。肝素原料藥的原料是肝素粗品，其提取只能源自健康生豬的小腸粘膜，由于含有大量雜質(zhì)蛋白、雜質(zhì)核酸、微生物等雜質(zhì)，需經(jīng)過物理和化學(xué)提取分離過程，定向獲取天然結(jié)構(gòu)基團完整的肝素，從而制成肝素原料藥。肝素鈉原料藥是標(biāo)準肝素制劑的唯一有效成分和低分子肝素原料的生產(chǎn)起點，目前肝素制劑只有按照注射給藥方式用于臨床，這使得肝素原料藥需要有很高的純度，方可保證制劑的用藥安全。有報道稱采用超聲波輔助酶解和鹽解過程可提高收率，如“黑龍江八ー農(nóng)墾大學(xué)，宋大魏畢業(yè)論文，《肝素的高效提取和分離純化技術(shù)研究》，通過研究發(fā)現(xiàn)，超聲波通過高壓強空化效應(yīng)確實可以幫助細胞破裂，釋放更多的肝素，游離于酶解液中，但是該方法采用超聲波能耗巨大，硬件投入高，不宣量產(chǎn)，目前未見エ業(yè)化報道。研究傳統(tǒng)方法發(fā)現(xiàn)，采用樹脂吸附方式提取肝素鈉的方法都存在一個問題，樹脂投入吸附罐后，并不是所有樹脂都得到了充分利用，在樹脂攪拌吸附時，酶解液在罐內(nèi)形成旋渦，底部樹脂密度大于上部，恰恰底部肝素濃度低，上部濃度高，且底部有雜質(zhì)沉淀，另外漂浮在吸附罐內(nèi)上部樹脂易被酶解液中的油脂成分堵塞，堵塞后的樹脂吸附能力大大下降，這些問題影響了樹脂吸附，本專利技術(shù)是針對上述問題采用層析方法解決這ー難題，目前未發(fā)現(xiàn)在肝素鈉粗品生產(chǎn)中采用層析方法的相關(guān)報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供ー種肝素鈉的提取方法，其成本低、收率高、能耗低、污染小。本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案，其特征包括如下步驟A采用常規(guī)酶解法鹽解法制得豬小腸酶解液；B采用常規(guī)法加熱酶解液讓蛋白酶失活；C采用常規(guī)法過濾雜質(zhì)；D采用帶有循環(huán)裝置的層析設(shè)備進行吸附；E采用常規(guī)法洗脫樹脂ボ采用常規(guī)法沉淀肝素鈉而采用常規(guī)法純化肝素鈉；H最后采用常規(guī)法干燥得到肝素鈉。本專利技術(shù)所用方法是針對肝素鈉制備過程中的兩大難題即“I、不能充分分解粘膜2、未能很好吸附”，本專利技術(shù)解決的是2、未能很好吸附的技術(shù)難題，采用D方法的好處是，改以往動態(tài)吸附為靜態(tài)吸附、親和力理想、樹脂不易被堵塞、樹脂能充分與酶解液接觸、杜絕外部生物污染的可能、密閉環(huán)境可保持壓カ常態(tài)(樹脂吸附需要在一定壓カ下完成，我國地緣遼闊，海抜高低不一，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)采用D描述方法可以確保吸附時壓力恒定并且可調(diào)節(jié)，研究還發(fā)現(xiàn)方法D吸附最佳壓カ為I. 025MPa)。本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點I.エ藝簡單，操作簡便，投資少，對現(xiàn)有設(shè)備改變不大，適合大規(guī)模エ業(yè)化生產(chǎn)。2.肝素鈉收率提高，質(zhì)量穩(wěn)定。以本方法生產(chǎn)的肝素鈉純度可達105_120IU/mg，肝素鈉收率可達I億IU/1500-1700根重量在1200克-1400克豬小腸粘膜，較現(xiàn)有技術(shù)提 高 20-30%。3.減少污染，降低成本。本專利技術(shù)方法可以杜絕在吸附罐的樹脂在洗脫時流入排水系統(tǒng)進而對水源造成長期污染。4.降低能耗，減少生產(chǎn)成本。本專利技術(shù)方法采用循環(huán)水系統(tǒng)，較傳統(tǒng)エ藝節(jié)電カ30%。具體實施例方式實施例I，包括以下步驟A酶解鹽解混合提取采用傳統(tǒng)エ藝酶水解，用100條健康豬小腸粘膜為原料，カロ入水、蛋白酶、腸衣鹽、氫氧化鈉，其比例分別為I : 5 O. 03 O. 15 0.1，一起投入反應(yīng)罐中，攪拌均勻后，調(diào)PH至8. 0-9. O,升溫至55-60°C，恒溫攪拌酶解3H，酶解過程中PH值應(yīng)保持 PH8. 0-9. O。B蛋白酶失活過程將酶解液快速加溫至85_90°C，保溫10_30分鐘，開始過濾。C過濾待蛋白酶失活過程結(jié)束，開始過濾，用100-120目濾網(wǎng)過濾上部雜質(zhì)，收集濾液。D吸附將酶解液降溫后，通過自循環(huán)裝置，把酶解液循環(huán)通過預(yù)裝好樹脂的層析柱，循環(huán)為封閉式循環(huán)，隔絕了與空氣的接觸，柱高為樹脂高度的3倍，循環(huán)8H，同時保持溫度60°C，壓カ表顯示I. OlMPa，流速表顯示3L/m。E洗脫將吸附后的樹脂用15% -19%氯化鈉溶液(樹脂量的I倍)攪拌洗脫2-4H2次，收集洗脫液，然后再用20%氯化鈉溶液(樹脂量的I倍)洗脫I次，收集洗脫液。F肝素鈉沉淀將步驟E中洗脫液合并，加入85% -95%こ醇攪拌，直到沉淀液こ醇濃度達到45-50度，停止攪拌，靜置12H，將上部酒精回收待下次使用，收集下部肝素鈉沉淀物。G肝素鈉純化將步驟F所得肝素鈉沉淀用3%氯化鈉溶液溶解，用200-300目濾網(wǎng)過濾，除去雜質(zhì)，在加入85% -95%こ醇攪拌，直到溶液濃度達到45% -50%，靜置沉淀8H，回收上部酒精，收集下部肝素鈉沉淀，然后加入85% -95%こ醇脫水，收集肝素鈉沉淀。H烘干將收集的肝素鈉沉淀至于鼓風(fēng)干燥箱中風(fēng)干，至半干時，加入蒙脫石干燥，可得肝素鈉。實施例2本實施例的步驟同實施例I只是在吸附層析柱的流速和壓カ上作了改變，實施例2改為壓カ表顯示I. 02MPa，流速表顯示5L/m。實施例3本實施例的步驟同實施例I只是在吸附層析柱的流速和壓カ上作了改變，實施例3改為壓カ表顯示I. 025MPa，流速表顯示10L/m。本專利技術(shù)可用其它不違背本專利技術(shù)精神或主要特征的具體形式來概述，在不脫離本專利技術(shù)上述主題范圍的情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出來的各種變更和替 換，均落入本專利技術(shù)保護范圍。專利技術(shù)名稱摘要本專利技術(shù)公開了ー種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟A采用常規(guī)酶解法鹽解法制得豬小腸酶解液出采用常規(guī)法加熱讓蛋白酶失活；C采用常規(guī)法過濾雜質(zhì)；D采用帶有恒溫循環(huán)裝置的層析設(shè)備進行吸附出采用常規(guī)法洗脫樹脂疋采用常規(guī)法沉淀肝素鈉而采用常規(guī)法純化肝素鈉出采用常規(guī)法干燥得到肝素鈉。本專利技術(shù)方法肝素鈉收率提高，質(zhì)量穩(wěn)定。以本方法生產(chǎn)的肝素鈉純度可達105-120IU/mg，肝素鈉收率可達I億IU/1500-1700根重量在1200克-1400克豬小腸粘膜，較現(xiàn)有技術(shù)提高20-30%。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種肝素鈉的提取方法，具體步驟如下：A采用常規(guī)酶解法鹽解法制得豬小腸酶解液；B采用常規(guī)法加熱酶解液讓蛋白酶失活；C采用常規(guī)法過濾雜質(zhì)；D采用帶有恒溫循環(huán)裝置的層析設(shè)備進行吸附；E采用常規(guī)法洗脫樹脂；F采用常規(guī)法沉淀肝素鈉；G采用常規(guī)法純化肝素鈉；H最后采用常規(guī)法干燥得到肝素鈉。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種肝素鈉的提取方法，具體步驟如下 A采用常規(guī)酶解法鹽解法制得豬小腸酶解液出采用常規(guī)法加熱酶解液讓蛋白酶失活；C采用常規(guī)法過濾雜質(zhì)；D采用帶有恒溫循環(huán)裝置的層析設(shè)備進行吸附；E采用常規(guī)法洗脫樹脂ボ采用常規(guī)法沉淀肝素鈉而采用常規(guī)法純化肝素鈉；H最后采用常規(guī)法干燥得到肝素鈉。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種肝素鈉的提取方法，其特征在于所述步驟D中采用的ー種恒溫、循環(huán)、密封、層析的方法。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的ー種肝素鈉的提取方法，其特征包括如下步驟 A酶解鹽解混合提取采用傳統(tǒng)エ藝酶水解，用健康豬小腸粘膜為原料，加入水、蛋白酶、腸衣鹽、氫氧化鈉，其比例分別為I : 5 O. 03 O. 15 O. 1，一起投入反應(yīng)罐中，攪拌均勻后，調(diào)PH至8. 0-9. O,升溫至55-60°C，恒溫攪拌酶解3H，酶解過程中PH值應(yīng)保持PH8. 0-9. O。B蛋白酶失活過程將酶解液快速加溫至85-90°C，保溫10-30分鐘，開始過濾。C過濾待蛋白酶失活過程結(jié)束，開始過濾，用100-120...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：譚科，
申請(專利權(quán))人：譚科，
類型：發(fā)明
國別省市：