于感染性與惡性疾病的治療中提升免疫反應的方法技術

本發(fā)明專利技術涉及一種治療感染性及惡性疾病的新穎方法。本發(fā)明專利技術提供新穎DNA及蛋白疫苗，通過提升免疫反應，以治療感染性及惡性疾病。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及一種治療感染性與惡性疾病的新穎方法。
技術介紹
細胞毒T 淋巴細胞抗原 4 (Cytotoxic T-Iymphocyte antigen-4,CTLA-4)于 1987年被發(fā)現(xiàn)為免疫球蛋白超家族中的一新成員，其特征在于其亦具有變異(V)或恒定(C)免疫球蛋白區(qū)的重要結構性特征(Brunet et al. , Nature 328,267-270)。報導指出CTLA-4對于調節(jié)免疫系統(tǒng)亦扮演一重要的角色(Keilholz, U.，J Immunother 31,431-439)。CTLA-4被報導可通過與⑶28競爭⑶80/⑶86的結合位置以降低T細胞的活化(Rudd etal. , Immunol Rev 229,12-26)。雖然CTLA-4可保護個體免于罹患自體免疫性疾病，但它 亦會抑制抗癌的免疫力。為了避免CTLA-4于癌癥治療中可能造成的不良的免疫反應，已有許多方法在探討如何操控T細胞的共刺激路徑，以提升抗癌免疫反應。標靶CTLA-4療法為眾多先進的方法中的一種，且此方法已于后期的臨床試驗中顯示出具潛力的結果(Hodi et al. ,N Engl J Med 363, 711-723;Hodi, F. S. ,Asia Pac J Clin Oncol 6 SupplI, S16-23;ffeber, J. , Oncologist 13 Suppl 4，16-25;及 Ribas, A.，Oncologist 13 Suppl4，10-15)。抗CTLA-4的一種單株抗體，ipilimumab，已于2011年三月被FDA核準用以治療轉移性黑色素瘤。除了轉移性黑色素瘤外，目前CTLA-4抗體于眾多的臨床試驗中用于治療惡性腫瘤，包括胰臟癌、大腸直腸癌、肝細胞癌、淋巴癌、激素抗拒性前列腺癌、卵巢癌、及急性骨髓性白血病。計劃性死亡-I (Program death-1, PD-1)為0)28超家族中的一員，當與其的配體，計劃性死亡配體I及2 (PD-L1及PD-L2)，結合時可觸發(fā)負向的訊號路徑(Riley，J.L. ,Immunol Rev 229,114-125)。I3D-I與其配體間的交互作用會抑制增生、細胞激素的生成、及T細胞的細胞溶解功能，從而耗盡T細胞，并抑制其免疫反應。PD-1/PD-L路徑對于耐受性及免疫力十分重要。此路徑保護組織及器官免受免疫調控的傷害。然而，此路徑已知會被慢性感染的病原菌及腫瘤所利用，以抑制抗微生物性及抗癌的免疫力。為了調控ro-i/ro-L路徑的免疫調控活性，已有標靶此路徑的療法被發(fā)展，以用于治療包含感染、自體免疫、乃至癌癥等疾病(Weber, J.，Semin Oncol 37,430-439)。雖然已有許多方法可通過標靶CTLA-4、ro-l/PD-L 1/TO-L2、及其它免疫調控蛋白，以調控免疫反應來對抗感染性及惡性疾?。蝗欢孕枰环N可通過提升免疫力且同時避免抑制免疫反應的新穎方法，以用于抗癌及抗感染的治療中。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術提供一種醫(yī)藥組合物，可于治療感染性或惡性疾病時，提升受治療個體的免疫反應，該醫(yī)藥組合物包含一與表達載體結合的DNA構筑體，及醫(yī)藥可接受的載劑，其中該DNA構筑體包含一多核苷酸序列，該多核苷酸編碼選自由細胞毒T淋巴細胞抗原4(CTLA-4)、計劃性死亡-I (PD-I)、計劃性細胞死亡I配體I (H)-Ll)、其片段或其功能性變異體、及其組合所組成的群組中任一者。在另一方面中，本專利技術提供一種醫(yī)藥組合物，可于治療感染性或惡性疾病時，提升受治療個體的免疫反應，該醫(yī)藥組合物包含一重組多勝肽及一醫(yī)藥可接受的載劑，其中該重組多勝肽包含一多勝肽序列，該多勝肽序列選自由CTLA-4、PD-l、ro-Ll、其片段或其功能性變異體、及其組合的多勝肽序列所組成的群組。附圖說明于附圖所示的具體實施例，其目的用于闡述本專利技術。然而，應明了的是，本專利技術并不局限于所示的較佳具體實施例。于附圖中圖Ia 提供 pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4_PLAP 的 DNA 及氨基酸序列。 圖Ib 提供 pVAC-l-IL2ss-mCTLA4-PLAP 的 DNA 及氨基酸序列。圖2a顯示經(jīng)pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠，其產生的抗人類及鼠的CTLA-4抗體的結果。圖2b 提供經(jīng) pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP 免疫的小鼠，于稀釋 1:50、1:100、1:200、1:400、及1:800倍時，所產生的抗體的效價標準曲線。圖3顯示經(jīng)以pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠，小鼠的B16黑色素瘤(B16F10腫瘤細胞)生長被抑制的結果。圖4提供經(jīng)以pVAC-l-IL2ss-hCTLA_4免疫的小鼠及施以pVAC_l載體的對照組小鼠的體重比較結果，結果顯示兩組的間無差異。圖5a提供B16F10細胞數(shù)目與熒光酵素活性的關連性；其中該B16F10細胞可穩(wěn)定表達熒光酵素(B16F10-luc)。圖5b結果顯示源自pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠的脾細胞，其細胞毒殺能力被提升，使得B16F10-1UC細胞存活率減少(于效應因子(脾細胞)腫瘤細胞(B16F10-luc)為 100:1 及 30:1 的比例)。圖6 提供經(jīng)以 pVAC-l-IL2ss-hCTLA-4-PLAP 免疫的小鼠，經(jīng)由 B16F10_luc 的刺激，提升脾細胞的干擾素Y的分泌量。圖7a顯示以未與陽離子微脂體(即”裸露的DNA”)結合的pVAC-l-mCTLA_4-PLAP免疫小鼠，于1:50稀釋的血清中無顯著的抗鼠CTLA-4的抗體效價被誘發(fā)。圖7b及圖7c提供相較于以裸露DNA對照組所免疫的小鼠，以與微脂體結合的pVAC-l-mCTLA-4-PLAP免疫小鼠，可產生抗人類及鼠的CTLA-4抗體的結果。圖8提供以pVAC-l-mCTLA-4DNA-微脂體復合物免疫的小鼠，其抑制RENCA腫瘤生長的結果。圖9a-圖9n提供純化的hCTLA-4及其受器B7. I及B7. 2間的交互作用；該受器B7. I及B7. 2分別穩(wěn)定地在CH0-B7. I及CH0-B7. 2上表達。該交互作用會被經(jīng)以P VAC-1 -1L2 s s-hCTLA-4-PLAP免疫的小鼠的血清抑制。圖10提供標靶免疫調控蛋白的疫苗選殖策略，這些蛋白可為膜連結的蛋白(a)、或分泌的蛋白(b),其可分別具有或不具有胎盤堿性磷酸酶(placental alkalinephosphatase, PLAP)的穿膜區(qū)域序列。于圖10所示的A及B區(qū)域的DNA序列可編碼選自由CTLA-4、PD-1、ro-Ll、其片段或其功能性變異體、及其組合所組成的群組中任一者。圖Ila-圖Ilh提供部分具體實施例的DNA及氨基酸序列，分別標靶根據(jù)本專利技術的人類蛋白，包括以下載體圖 Ila pVACl-IL2ss-hPD-l(21-170aa)-PLAP(4167bp)、圖 IlbpVACl-IL2ss-hPD-l (21_170aa) (4171bp)、圖 llcpVACl-IL2ss-hPD_Ll (19_238aa) -PLAP (4377bp)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種醫(yī)藥組合物，可于治療感染性或惡性疾病時，提升受治療個體的免疫反應，該醫(yī)藥組合物包含一與表達載體結合的DNA構筑體，及醫(yī)藥可接受的載劑，其中該構筑體包含一多核苷酸序列，該多核苷酸編碼選自由細胞毒T淋巴細胞抗原4(CTLA？4)、計劃性死亡？1(PD？1)、計劃性細胞死亡配體1(PD？L1)、其片段或其功能性變異體、及其組合所組成的群組中任一者。

【技術特征摘要】
2011.06.24 US 61/500,8251.一種醫(yī)藥組合物，可于治療感染性或惡性疾病時，提升受治療個體的免疫反應，該醫(yī)藥組合物包含一與表達載體結合的DNA構筑體，及醫(yī)藥可接受的載劑，其中該構筑體包含一多核苷酸序列，該多核苷酸編碼選自由細胞毒T淋巴細胞抗原4(CTLA-4)、計劃性死亡-I (ro-i)、計劃性細胞死亡配體I (ro-Li)、其片段或其功能性變異體、及其組合所組成的群組中任一者。2.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，該DNA構筑體包含編碼CTLA-4、其片段或其功能性變異體的多核苷酸序列。3.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，該DNA構筑體包含編碼(i)CTLA-4、其片段、或其功能性變異體，及(ii)PD-l、其片段、或其功能性變異體結合的多核苷酸序列。4.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，該DNA構筑體包含編碼(i)CTLA-4、其片段、或其功能性變異體，及(ii)ro-Li、其片段、或其功能性變異體的結合的多核苷酸序列。5.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，該表達載體為pVAC-1。6.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，進一步包含佐劑。7.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，該DNA構筑體與微脂體結合。8.如權利要求I所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，該個體罹患感染性或惡性疾病，且以抗感染性或抗癌藥物治療，造成該個體的免疫反應受到刺激。9.如權利要求I所述的醫(yī)藥...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：藍耿立，施易升，藍耿欣，
申請(專利權)人：臺北榮民總醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：