本發明專利技術屬于生物技術領域，具體涉及一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽及其制備方法。其首先在無水無氧條件下制備聚酯-NHS酯，然后與次血紅素混合以DMSO為溶劑反應；反應結束后在水中將聚合物沉出，離心，收集沉出物，純化干燥后，即得聚酯連接的次血紅素六肽。本發明專利技術所使用的次血紅素六肽屬于小分子肽類，不存在二、三級結構，反應過程中造成的空間構型的改變不會造成酶的失活；此法固定化的酶大部分裸露在載體以外，所以有利于酶與底物的接觸；選用羧端基的聚羥基乙酸，聚乳酸或聚乳酸羥基乙酸共聚物作為固定化材料；共價偶聯的固定化酶的優點在于便于回收和重復利用；固定化后的酶的活力相當于裸酶活力的92.2％，活力基本保持。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物
，具體涉及一種。
技術介紹
過氧化物酶通常存在于植物(辣根、大豆種皮)、微生物(白腐菌)和動物體(牛奶中的乳過氧化物酶)內，以血紅素為輔基，具有多種生物功能，主要通過催化H2O2對其他物質產生氧化作用。過氧化物酶現已廣泛用于食品加工、醫學檢測、木質素降解、農副產品儲存、生物催化及污水處理等方面。 天然的過氧化物酶通常具有提取和加工困難，穩定性差，應用成本高等缺點，限制了其應用。次血紅素六妝(deuterohaemin-β -Ala-His-Thr-Val-Glu-Lys,DhHP-6)是以微酶和天然抗壞血酸過氧化物酶結構為依據，設計的一種含亞血紅素的短肽，是一種較好的過氧化物酶模擬物；擁有同過氧化物酶相同的活性中心，已經證實對白內障、二型糖尿病、心肌缺血再灌注損傷等有一定的療效；該短肽模擬酶分子量小于3000，可發展成高效的抗氧化藥物；與同類的過氧化物酶一樣具有很強的催化活性，但其酶穩定性則因為其簡單的結構而提高了多個數量級，同時由于其結構相對簡單生產成本低廉，使其可能成為現在過氧化物酶的重要替代品之一。共價偶聯固定化酶是載體和酶通過化學鍵相互連接在一起，同其他方法相比，共價鍵偶聯方法固定化酶是酶和載體之間結合力最強的一種方法。通常是將酶表面上殘留的氨基同載體上的某些官能團進行重氮化、烷基化、氨基化和二硫化等化學反應，將酶固定在載體上。此法固定化的酶大部分裸露在載體以外，所以有利于酶與底物的接觸，但是由于固定化所使用的溶劑，反應條件的影響，可能會對改變酶的空間構型，進而造成酶的失活。我們所使用的DhHP-6屬于小分子肽類，不存在二、三級結構，即空間構型的改變不會造成酶的失活，所以我們選擇將DhHP-6固定在聚酯分子上。聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物等聚酯分子均為合成的生物可降解材料，為了提高DhHP-6的應用性能，我們采用共價偶連的方法將DhHP-6固定在上述聚酯分子上。通過酶活性測試發現固定化后的酶的活力相當于裸酶活力的92. 0%，活力基本保持。
技術實現思路
本專利技術的目的之一在于提供一種具有良好的生物相容性和生物降解性的聚酯連接的次血紅素六肽，其是以可生物降解的聚羥基乙酸(PGA)、聚乳酸(PLA)或聚乳酸一羥基乙酸共聚物(PLGA)作為聚酯連接材料(上述材料的相對分子質量為5000 50000g/mol，分子量分布I. 2 2. 0)，采用N-羥基琥珀酰亞胺活化酯法，將PLGA、PGA或PLA的端羧基同DhHP-6賴氨酸上的端氨基反應形成酰胺鍵，從而將DhHP-6引入到PLGA、PGA或PLA上。本專利技術中涉及的聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽具有如式I所示的結構通式權利要求1.一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽，其結構式如(I)所示 CH3 OOH-^—OCHCOOCHC ) (-OCH2COOCH2—C-^-N-R CH3( I ) 其中聚乳酸、聚羥基乙酸或聚乳酸一羥基乙酸共聚物的相對分子質量為5000 50000g/mol，-R代表去除一個氨基的三價亞鐵次血紅素六肽，其結構式如(II)所示，A H3 h3c Yn^VS /"NvN >CH2 V CH2II H 9 H H 9 H H I HH9HH9HH CH2HoC-C-N-CH-C-N-C-C-N-C-C-N-C-C-N-C-C-N-C-COOH Ii TI I I I IIA CH, CHo HC-OH HC-CH3 CH2 CH2COOHu u 3,2 II 3 II z C=CH CH3 CH3 CH2 CH2b LC00H VCH2 H 0 (in2.如權利要求I所述的一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽，其特征在于m=34 347，n=0時表示聚乳酸連接的次血紅素六肽。3.如權利要求I所述的一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽，其特征在于m=0，n=43 431時表示聚羥基乙酸連接的次血紅素六肽。4.如權利要求I所述的一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽，其特征在于m=3 312，n=4 387時表示聚乳酸一羥基乙酸共聚物連接的次血紅素六肽。5.如權利要求I所述的一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽，其特征在于聚乳酸一羥基乙酸共聚物中乳酸占乳酸和羥基乙酸鏈段總摩爾數和的10 90%。6.權利要求I所述的一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽制備方法，具體步驟如下 (1)將聚乳酸、聚羥基乙酸或聚乳酸-羥基乙酸共聚物，二環己基碳二亞胺，N-羥基琥珀酰亞胺NHS按照摩爾比I :2 2的比例混合，然后加入到無水二氯甲烷溶液中，控制溶液中聚酯的濃度范圍為20mg/ml 200mg/ml，反應體系溫度20 39°C，攪拌反應0. 5 24h ；反應結束用0. 45 y m的油相微孔濾膜過濾除去副產物二環己基脲得到澄清溶液； (2)將所得澄清溶液在冷乙醚中沉出，離心處理后棄去上清液，沉出物用無水二氯甲烷溶解；冷乙醚沉出，重復上述沉出、離心、溶解過程3 5次； (3)將步驟(2)最后一次離心分離后的沉出物在10 35°C條件下真空干燥0. 5 24h，得到 聚乳酸-NHS、聚羥基乙酸-NHS或聚乳酸-羥基乙酸-NHS活化酯； (4)將0.4 4g的聚乳酸-NHS、聚羥基乙酸-NHS或聚乳酸-羥基乙酸-NHS活化酯加入到5 500ml的二甲基亞砜溶液中，再加入I 200 ii L三乙胺和0. Ig的次血紅素六肽，10 30°C反應 0. 5 24h ; (5)反應結束后在水中將聚合物沉出，離心，收集沉出物，再用水洗3 5次，最后于10 35°C條件下真空干燥0. 5 24h，即得到聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽。全文摘要本專利技術屬于生物
，具體涉及一種。其首先在無水無氧條件下制備聚酯-NHS酯，然后與次血紅素混合以DMSO為溶劑反應；反應結束后在水中將聚合物沉出，離心，收集沉出物，純化干燥后，即得聚酯連接的次血紅素六肽。本專利技術所使用的次血紅素六肽屬于小分子肽類，不存在二、三級結構，反應過程中造成的空間構型的改變不會造成酶的失活；此法固定化的酶大部分裸露在載體以外，所以有利于酶與底物的接觸；選用羧端基的聚羥基乙酸，聚乳酸或聚乳酸羥基乙酸共聚物作為固定化材料；共價偶聯的固定化酶的優點在于便于回收和重復利用；固定化后的酶的活力相當于裸酶活力的92.2％，活力基本保持。文檔編號C07K17/08GK102796196SQ20121031623公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月30日 優先權日2012年8月30日專利技術者湯鈞, 周行, 趙東旭, 王敏楠, 王麗萍, 李維 申請人:長春泰鑫生物技術有限公司本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種聚酯連接的三價鐵次血紅素六肽，其結構式如（Ⅰ）所示：其中聚乳酸、聚羥基乙酸或聚乳酸－羥基乙酸共聚物的相對分子質量為5000～50000g/mol，？R代表去除一個氨基的三價亞鐵次血紅素六肽，其結構式如（Ⅱ）所示，FDA00002080621000011.jpg,FDA00002080621000012.jpg
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：湯鈞，周行，趙東旭，王敏楠，王麗萍，李維，
申請(專利權)人：長春泰鑫生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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