一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用。其中，所述NTDs胎兒為孕母低葉酸致NTD胎兒。所述孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物用于檢測甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群或/和甘油磷脂合成相關(guān)代謝物；所述甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群包括厚壁菌門和/或擬桿菌屬；甘油磷脂合成相關(guān)代謝物包括甘油磷脂合成原料，所述甘油磷脂合成原料包括不飽和脂肪酸。本發(fā)明專利技術(shù)可以通過對母體的甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群包括厚壁菌門和/或擬桿菌屬，或者甘油磷脂合成相關(guān)代謝物進行檢測，進而用于預(yù)測胎兒NTD的發(fā)生。進而用于預(yù)測胎兒NTD的發(fā)生。進而用于預(yù)測胎兒NTD的發(fā)生。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用


[0001]本專利技術(shù)涉及檢測領(lǐng)域，具體涉及一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用。

技術(shù)介紹

[0002]妊娠期孕母葉酸缺乏以及代謝紊亂會導(dǎo)致胎兒神經(jīng)管缺陷(NTDs)。然而，既往研究主要集中在葉酸缺乏引起的胎兒腦基因表達的改變中，而未關(guān)注腦代謝物的變化。因此，常規(guī)針對NTDs的檢測方法包括母血及羊水甲胎蛋白(AFP)檢查、AChE酶活性檢測等，這些檢測方法都存在其優(yōu)勢及劣勢，例如：AChE酶活性檢測中，其他病證或者血樣污染也可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。基于現(xiàn)有檢測情況，擴展NTDs的檢測方法十分有必要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

[0003]因此，本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題在于，如何進一步擴展NTDs的檢測方法，從而提供另一種檢測思路下的一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用。
[0004]一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用。
[0005]所述NTDs胎兒為孕母低葉酸致NTDs胎兒。
[0006]所述孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物用于檢測甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群或/和甘油磷脂合成相關(guān)代謝物。
[0007]所述甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群包括厚壁菌門和/或擬桿菌屬。
[0008]甘油磷脂合成相關(guān)代謝物包括甘油磷脂合成原料，所述甘油磷脂合成原料包括不飽和脂肪酸。
[0009]所述不飽和脂肪酸至少包括硬脂酸、油酸、軟脂酸和順
?<br/>二十碳烯酸中的至少一種。
[0010]本專利技術(shù)技術(shù)方案，具有如下優(yōu)點：
[0011]1.本專利技術(shù)提供了一種檢測NTDs胎兒的新思路，具體的，提供了一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用；通過專利技術(shù)人研究首次發(fā)現(xiàn)，葉酸缺乏導(dǎo)致孕期母體腸道菌群代謝紊亂與NTDs胎兒腦代謝物之間存在代際間關(guān)聯(lián)的關(guān)系，因此可以通過檢測孕期母體腸道菌群代謝紊亂情況判斷NTDs胎兒腦代謝物的情況，進而判斷胎兒是否存在NTDs的情況。本專利技術(shù)可以為NTDs胎兒檢測提供另一種檢測手段，有效達到了擴展NTDs檢測方式的目的。
[0012]2.本專利技術(shù)提供的一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物，通過對孕期母體的甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群或/和甘油磷脂合成相關(guān)代謝物進行檢測，根據(jù)相關(guān)指標的變化情況，即可用于預(yù)期母體內(nèi)胎兒是否存在NTDs的情況。
附圖說明
[0013]為了更清楚地說明本專利技術(shù)具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本專利技術(shù)的一些實施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0014]圖1是本專利技術(shù)中NTDs胎鼠相較于正常胎鼠腦組織差異代謝物與人NTDs胎兒相較于正常胎兒腦組織差異代謝物的對比圖；
[0015]圖2是本專利技術(shù)中兩組孕鼠糞便的差異代謝物代謝譜圖；
[0016]圖3是本專利技術(shù)中兩組孕鼠腸道差異菌群及差異代謝物相關(guān)性圖譜；
[0017]圖4是本專利技術(shù)中兩組孕鼠腸道差異菌群與胎鼠腦甘油磷脂相關(guān)代謝物的關(guān)聯(lián)圖。
具體實施方式
[0018]實施例
[0019]獲取30名低葉酸致NTDs引產(chǎn)胎兒和30名非病理性引產(chǎn)的健康胎兒腦組織，采用獲取的腦組織對腦代謝物進行檢測，檢測方式為常規(guī)液相色譜
?
質(zhì)譜聯(lián)用(LC
?
MS)，具體檢測條件如下：
[0020]分析儀器為超高效液相色譜(UPLC)：ACQUITY UPLC I
?
Class，沃特世科技有限公司(Waters)，
[0021]高分辨質(zhì)譜：VION IMS QTof，沃特世科技有限公司(Waters)，
[0022]色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18(100mm
×
2.1mm,1.7um)，沃特世科技有限公司(Waters)。
[0023]樣本前處理過程：
[0024]1.精確稱取30mg組織樣本到1.5ml EP管中，依次加入20μL內(nèi)標(L
?2?
氯
?
苯丙氨酸，0.3mg/mL，甲醇配置)，530μL甲醇水溶液(CH3OH:H2Ov:v＝4:1)；
[0025]2.加入兩個小鋼珠，在
?
80℃冰箱中放置5min后，放入研磨機中研磨(60Hz，2min)；
[0026]3.超聲提取10min，
?
20℃靜置30min；
[0027]4.低溫離心10min(13000rpm，4℃)，將上清轉(zhuǎn)移到帶內(nèi)襯管的LC
?
MS進樣小瓶中。
[0028]5.質(zhì)控樣本(QC)由所有樣本的提取液等體積混合制備而成，每個QC的體積與樣本相同。
[0029]色譜條件如下：
[0030]色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18(100mm
×
2.1mm,1.7um)；
[0031]柱溫：45℃；
[0032]流動相：A—水(含0.1％甲酸)，B—乙腈(含0.1％甲酸)；A與B的洗脫程序為0
?
2分鐘(5
?
20％B)，2
?
4分鐘(20
?
60％B)，4
?
11分鐘(60
?
100％B)，11
?
13分鐘(100％ B)，13
?
13.5分鐘(100％
?
5％B)，13.5
?
14.5分鐘(5％ B)。
[0033]流速：0.4mL/min；
[0034]進樣體積：3μL。
[0035]通過對NTDs胎兒和健康胎兒的腦組織代謝物的檢測結(jié)果對比可知，孕母低葉酸致NTDs引產(chǎn)胎兒與健康胎兒的腦代謝產(chǎn)物中，甘油磷脂代謝及不飽和脂肪酸合成代謝通路相
關(guān)代謝物在NTDs胎兒腦中明顯降低(p&lt;0.05)。
[0036]本實施例中通過低葉酸飲食結(jié)合MTX誘導(dǎo)建立了NTD小鼠模型，小鼠模型的構(gòu)建過程如下：
[0037]低葉酸飼喂聯(lián)合甲氨蝶玲注射致胎鼠神經(jīng)管畸形模型，實驗組雌鼠低葉酸飼料喂養(yǎng)4周(對照組正常飼料喂養(yǎng))，雌鼠:雄鼠于按2:1交配，合籠過夜(12小時)后早上8：00見陰道栓定為孕0.5天(E0.5)，在孕7.5天(E7.5)給予甲氨蝶呤1.5mg/kg腹腔注射(對照組腹腔注射同等量無菌注射用水)，于孕13.5天解剖取NTDs胚胎腦組織。
[0038]獲取孕鼠低葉酸致NTDs胎鼠與健康胎鼠的腦組織，采用獲取的腦組織對腦代謝物進行檢測，并由上海鹿明生物科技有限公司提供GC/MS及LC/MS非靶向代謝組分析，對胎鼠腦組織代謝物的檢測結(jié)果對比可知，孕鼠低葉酸本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物在制備檢測NTDs胎兒試劑中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述NTDs胎兒為孕母低葉酸致NTDs胎兒。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述孕期腸道菌群代謝紊亂檢測物用于檢測甘油磷脂代謝相關(guān)腸道菌群或/和甘油磷脂合成相關(guān)代謝物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王珊，張敏，何學(xué)佳，
申請(專利權(quán))人：首都兒科研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：