本發(fā)明專利技術(shù)涉及神經(jīng)精神疾病診斷標(biāo)志物以及診斷方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于診斷兒童青少年抑郁癥的尿液生物標(biāo)志物組合以及應(yīng)用。生物標(biāo)志物組合由肉堿類化合物、尼古丁、胍基乙酸、六酰甘氨酸、丙烯酸、黃尿酸和十二酸組成，可通過對尿液中的上述7種代謝物進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對兒童青少年抑郁癥的診斷。發(fā)明專利技術(shù)人通過對大量兒童青少年抑郁癥患者和正常個(gè)體進(jìn)行代謝組學(xué)研究，選取了患抑郁癥未用藥組和患抑郁癥用藥組的共同代謝差異物，可作為生物標(biāo)志物組合實(shí)現(xiàn)對抑郁癥的準(zhǔn)確診斷，經(jīng)過分析，AUC值可達(dá)0.8左右。本技術(shù)方案解決了缺少針對兒童青少年抑郁癥的容易取樣和處理的生物標(biāo)志物的技術(shù)問題，具有廣闊的引用前景和理想的應(yīng)用價(jià)值。應(yīng)用價(jià)值。應(yīng)用價(jià)值。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種用于診斷兒童青少年抑郁癥的尿液生物標(biāo)志物組合以及應(yīng)用
[0001]本專利技術(shù)涉及神經(jīng)精神疾病診斷標(biāo)志物以及診斷方法
，具體涉及一種用于診斷兒童青少年抑郁癥的尿液生物標(biāo)志物組合以及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
[0002]抑郁癥(Major Depressive Disorder)是一種以顯著而持續(xù)的情緒低落、思維遲緩和意志活動(dòng)下降為主要癥狀的情感障礙。流行病學(xué)調(diào)查表明，抑郁癥在兒童期(13歲以下)的患病率為4.3％，而青少年(13
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18歲)為5.0％。2014年WHO報(bào)告指出，抑郁癥是導(dǎo)致青少年疾病和殘疾的首要原因，超過一半的自殺受害者在死亡時(shí)符合抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，增加了這個(gè)年齡段的疾病負(fù)擔(dān)。此外，兒童青少年抑郁癥可能會(huì)與焦慮障礙、睡眠障礙、注意缺陷與多動(dòng)障礙等共病，導(dǎo)致容易漏診和誤診。
[0003]生物標(biāo)志物(Biomarker)是指可以標(biāo)記系統(tǒng)、器官、組織、細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)或功能的改變或可能發(fā)生的改變的生化指標(biāo)，具有非常廣泛的用途。生物標(biāo)志物可用于疾病診斷、判斷疾病分期或者用來評價(jià)新藥或新療法在目標(biāo)人群中的安全性及有效性。尿液就是一個(gè)很好的生物標(biāo)志物的載體，不僅因?yàn)槠涫欠乔秩胄允占模€因?yàn)榱看蟆㈩A(yù)處理少、收集方便。基于成人尿液的研究發(fā)現(xiàn)成人抑郁癥患者代謝物的改變主要集中在葡萄糖代謝、犬尿氨酸代謝和酪氨酸
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苯丙氨酸代謝等，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)了關(guān)于成人抑郁癥的各種標(biāo)志物。申請人在文獻(xiàn)中報(bào)道了(A novel urinary metabolite signature for diagnosing major depressive disorder，J Proteome Res.2013Dec 6；12(12):5904
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11.doi:10.1021/pr400939q.Epub2013Nov 26.)：通過GC
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MS研究，在成人尿液中發(fā)現(xiàn)了山梨醇(sorbitol)、尿酸(uric acid)、壬二酸(azelaic acid)、喹啉酸(quinolinic acid)、馬尿酸(hippuric acid)和酪氨酸(tyrosine)可以作為診斷成年人抑郁癥的生物標(biāo)志物。然而，現(xiàn)有技術(shù)有報(bào)道稱兒童青少年抑郁癥與成人抑郁癥的代謝途徑并不完全相同。根據(jù)這些研究結(jié)果推測，兒童青少年抑郁癥的尿液代謝特征可能與成人不同，涉及的反映兒童青少年抑郁癥的生物標(biāo)志物也應(yīng)與成人抑郁癥的各種標(biāo)志物存在差異，現(xiàn)有技術(shù)中尚未見能夠準(zhǔn)確反應(yīng)兒童青少年抑郁癥的以尿液為載體的生物標(biāo)記物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
[0004]本專利技術(shù)意在提供一種用于診斷兒童青少年抑郁癥的尿液生物標(biāo)志物組合，以解決現(xiàn)有技術(shù)中缺少針對兒童青少年抑郁癥的容易取樣和處理的生物標(biāo)志物的技術(shù)問題。
[0005]為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
[0006]一種生物標(biāo)志物組合，其由肉堿類化合物、尼古丁、胍基乙酸、六酰甘氨酸、丙烯酸、黃尿酸和十二酸組成；所述肉堿類化合物的SMILES分子結(jié)構(gòu)為[O
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]C(CC(OC(/C＝C/CCCCCCCCCCC(O)＝O)＝O)C[N+](C)(C)C)＝O。
[0007]本專利技術(shù)還提供了一種生物標(biāo)志物組合在制備診斷系統(tǒng)中的應(yīng)用，所述診斷系統(tǒng)用
于檢測尿液中肉堿類化合物、尼古丁、胍基乙酸、六酰甘氨酸、丙烯酸、黃尿酸和十二酸的含量；所述肉堿類化合物的SMILES分子結(jié)構(gòu)為[O
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]C(CC(OC(/C＝C/CCCCCCCCCCC(O)＝O)＝O)C[N+](C)(C)C)＝O。
[0008]本方案的原理及優(yōu)點(diǎn)是：
[0009]專利技術(shù)人通過對兒童青少年抑郁癥患者以及正常兒童青少年的大量代謝組學(xué)研究以及比較研究，發(fā)現(xiàn)了尿液中肉堿類化合物、尼古丁、胍基乙酸、六酰甘氨酸、丙烯酸、黃尿酸和十二酸的含量可以客觀反應(yīng)抑郁癥患病與否的情況。并且，同時(shí)使用上述七種代謝物進(jìn)行診斷和評價(jià)，可以更為準(zhǔn)確地反應(yīng)出抑郁癥情況。基于這七種代謝物的相對含量情況，專利技術(shù)人利用二元邏輯回歸(Binary logistic regression analysis)建立診斷模型，再對診斷模型的診斷效力進(jìn)行了接受者操作特性曲線分析(ROC)，由上述七個(gè)自變量建立的診斷模型就有良好的診斷效果，曲線下面積AUC值可達(dá)到近0.8。因此，上述七種代謝物可以作為診斷兒童青少年抑郁癥的生物標(biāo)志物，聯(lián)合其他臨床指標(biāo)進(jìn)行診斷。在后續(xù)應(yīng)用中，我們可以將本技術(shù)方案的研究成果(七種生物標(biāo)志物)在更多生物樣本中進(jìn)行研究。經(jīng)過對更多人群的七種生物標(biāo)志物的檢測，擬合獲得可以更為準(zhǔn)確反映疾病情況的診斷模型，進(jìn)而獲得診斷參考值應(yīng)用于實(shí)際臨床診斷的實(shí)踐中。
[0010]目前，針對成人抑郁癥的研究較多，現(xiàn)有技術(shù)中尚缺乏針對兒童青少年抑郁癥的診斷方法。而成人抑郁癥和兒童青少年抑郁癥的發(fā)病機(jī)制、治療手段均存在差異，成人抑郁癥的研究成果對兒童青少年抑郁癥的指導(dǎo)性不強(qiáng)。本技術(shù)方案首次將兒童青少年抑郁癥中的患抑郁癥未用藥、患抑郁癥用藥和健康對照分組研究，篩選出患抑郁癥未用藥和患抑郁癥用藥的共同差異代謝物，獲得了可以準(zhǔn)確反映兒童青少年抑郁癥的生物標(biāo)志物。不同于現(xiàn)有技術(shù)的將患抑郁癥未用藥和患抑郁癥用藥合并的研究結(jié)果。
[0011]另外，本專利技術(shù)中用于診斷兒童青少年抑郁癥的七種生物標(biāo)志物在臨床應(yīng)用中樣本均來源于尿液，取材簡單且無創(chuàng)，具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值。
[0012]進(jìn)一步，一種生物標(biāo)志物組合，其用于診斷兒童青少年抑郁癥。本技術(shù)方案的生物標(biāo)志物可用于兒童青少年抑郁癥的診斷。兒童青少年抑郁癥與成人抑郁癥的代謝途徑并不完全相同，兒童青少年抑郁癥的尿液代謝特征與成人不同，涉及的反映兒童青少年抑郁癥的生物標(biāo)志物也應(yīng)與成人抑郁癥的各種標(biāo)志物存在差異，現(xiàn)有技術(shù)中尚未見能夠準(zhǔn)確反應(yīng)兒童青少年抑郁癥的以尿液為載體的生物標(biāo)記物。
[0013]進(jìn)一步，一種生物標(biāo)志物組合，其提取自生物體尿液。尿液就是一個(gè)很好的代謝物生物標(biāo)志物的載體，其可以進(jìn)行非侵入性收集、量大、預(yù)處理少。
[0014]進(jìn)一步，所述診斷系統(tǒng)包括預(yù)處理單元和檢測單元，所述檢測單元包括液相色譜設(shè)備和質(zhì)譜設(shè)備。
[0015]通過常規(guī)的氣相色譜、液相色譜、液相色譜
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質(zhì)譜/質(zhì)譜等手段，均可實(shí)現(xiàn)對上述七種差異代謝物的檢測。本技術(shù)方案選用了液相色譜設(shè)備和質(zhì)譜設(shè)備進(jìn)行檢測，不但可以實(shí)現(xiàn)對標(biāo)志物的篩選和可以實(shí)現(xiàn)對這些物質(zhì)相對含量的表征，最終達(dá)到評價(jià)或者診斷疾病的目的。
[0016]進(jìn)一步，所述液相色譜設(shè)備使用的色譜柱包括酰胺柱和C18柱；使用酰胺柱時(shí)，流動(dòng)相A為含有25mM氫氧化銨和25mM乙酸銨的水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；使用C18柱時(shí)，流動(dòng)相A為含有0.01％乙酸的水溶液，B為體積比為1：1的異丙醇和乙腈的混合溶液。
[0017]進(jìn)一步，所述液相色譜設(shè)備的參數(shù)設(shè)置為：柱溫為25℃，樣品注射量為4μL，流速為0.5mL/min；
[0018]對于酰胺柱，梯度設(shè)定如下：0
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【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種生物標(biāo)志物組合，其特征在于，其由肉堿類化合物、尼古丁、胍基乙酸、六酰甘氨酸、丙烯酸、黃尿酸和十二酸組成；所述肉堿類化合物的SMILES分子結(jié)構(gòu)為[O
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]C(CC(OC(/C＝C/CCCCCCCCCCC(O)＝O)＝O)C[N+](C)(C)C)＝O。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物標(biāo)志物組合，其特征在于，其用于診斷兒童或青少年抑郁癥。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種生物標(biāo)志物組合，其特征在于，其提取自尿液。4.根據(jù)權(quán)利要求1
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3中任一項(xiàng)所述的一種生物標(biāo)志物組合在制備診斷系統(tǒng)中的應(yīng)用，其特征在于，所述診斷系統(tǒng)用于檢測尿液中肉堿類化合物、尼古丁、胍基乙酸、六酰甘氨酸、丙烯酸、黃尿酸和十二酸的含量；所述肉堿類化合物的SMILES分子結(jié)構(gòu)為[O
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]C(CC(OC(/C＝C/CCCCCCCCCCC(O)＝O)＝O)C[N+](C)(C)C)＝O。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種生物標(biāo)志物組合在制備診斷系統(tǒng)中的應(yīng)用，其特征在于，所述診斷系統(tǒng)包括預(yù)處理單元和檢測單元，所述檢測單元包括液相色譜設(shè)備和質(zhì)譜設(shè)備。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種生物標(biāo)志物組合在制備診斷系統(tǒng)中的應(yīng)用，其特征在于，所述液相色譜設(shè)備使用的色譜柱包括酰胺柱和C18柱；使用酰胺柱時(shí)，流動(dòng)相A為含有25mM氫氧化銨和25mM乙酸銨的水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；使用C18柱時(shí)，流動(dòng)相A為含有0.01％乙酸的水溶液，B為體積比為1：1的異丙醇和乙腈的混合溶液。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種生物標(biāo)志物組合在制備診斷系統(tǒng)中的應(yīng)用，其特征在于，所述液相色譜設(shè)備的參數(shù)設(shè)置為：柱溫為25℃，樣品注射量為4μL，流速為0.5mL/min；對于酰胺柱，梯度設(shè)定如下：0
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0.5分鐘為95％流動(dòng)相B；0.5
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7分鐘為95％流動(dòng)相B到65％流動(dòng)相B；7
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：權(quán)利要求書一頁說明書一二頁附圖六頁，
申請(專利權(quán))人：重慶醫(yī)科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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