本發明專利技術公開了一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布的方法，包括以下步驟：（a）標準品溶液配制：精密稱定不同分子量的標準品，置容量瓶中，加入稀釋劑定容，搖勻，進液相相分析；(b)供試品溶液配制：精密稱取聚烯丙胺鹽酸鹽，置于容量瓶中，稀釋劑定容稀釋，搖勻，進液相相分析；(c)根據軟件擬合線性標準曲線方程，并計算出聚烯丙胺鹽酸鹽的數均分子量及重均分子量。本發明專利技術測定方法操作簡單，快速，準確度高，回收率好，靈敏度高，重現性好。對聚合物反應監控有重要的現實意義。聚合物反應監控有重要的現實意義。聚合物反應監控有重要的現實意義。
【技術實現步驟摘要】
一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布的方法
[0001]本專利技術涉及化學分析領域，具體涉及一種凝膠色譜測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布。
技術介紹
[0002]聚烯丙胺鹽酸鹽為藥物碳酸司維拉姆的重要中間體，碳酸司維拉姆是一種新穎的磷酸根結合劑，不含鈣和鋁是其突出的優點，并且不會被身體吸收，長期使用安全性好。適用于正在透析治療的腎病晚期患者或高磷血癥患者，降低血清磷水平而不引起高鈣血癥。而聚烯丙胺的聚合反應程度對后續交聯反應有較大影響。
[0003]聚烯丙胺鹽酸鹽的合成為烯丙基鹽酸鹽在偶氮化合物的催化下，發生聚合反應，形成聚丙烯胺鹽酸鹽聚合物。反應過程如下圖
[0004][0005]由于聚合反應過程復雜，聚烯丙胺鹽酸鹽的聚合程度直接影響下一步交聯反應的空間結構，從而影響到最終藥物的藥效。
[0006]聚烯丙胺鹽酸鹽分子量及分子分布研究較少，至今沒有聚烯丙胺鹽酸鹽分子量及分子分布的標準物質及檢測方法，也沒有公開的專利，滿足不了企業對大生產中中間體檢測放行的要求。
技術實現思路
[0007]聚烯丙胺鹽酸鹽在聚合反應過程中，其分子量范圍跨越幾個數量級，凝膠色譜法是理想的分析方法之一。本專利技術提供了一種串聯凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽分子量及分子分布的方法，不同類型對照品的選擇有效的擴大了分子量測定范圍，提高了聚烯丙胺鹽酸鹽分子量及分子分布檢測的準確度和便捷性。
[0008]為達到上述目的，本專利技術提供的技術方案如下：
[0009]一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽分子量及分子分布的方法，包括以下步驟：
[0010](a)標準品溶液配制：
[0011]精密稱定不同分子量的標準品，置容量瓶中，加入稀釋劑定容，搖勻，進液相相分析；
[0012](b)繪制標準曲線
[0013]將不同分子量的標準品溶液進行色譜分析，記錄保留時間，繪制線性曲線方程，計算r值；
[0014](c)供試品溶液配制：
[0015]精密稱取聚烯丙胺鹽酸鹽，置于容量瓶中，稀釋劑定容稀釋，搖勻，進液相相分析；
[0016](d)樣品溶液測定：
[0017]將樣品溶液進行色譜分析，得到色譜圖，通過標準曲線計算不同保留時間下的聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量，得到聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布。
[0018]所述色譜分析條件為：
[0019]色譜柱：Shodex OHpak SB
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804HQ2支串聯；
[0020]檢測器：示差折光檢測器；
[0021]流動相：0.4～0.6mol/L氯化鈉水溶液；
[0022]流速：0.6～1mL/min；
[0023]柱溫：25～40℃；
[0024]檢測器溫度：30～45℃；
[0025]進樣量：5～10μL。
[0026]所述凝膠色譜的標準曲線是采用取分子量108、590、3070、10300、21600的聚乙二醇標樣33600、101200、246600的聚氧化乙烯標樣，配成標準溶液；再利用標準溶液繪制標準曲線。為了保證擬合度好，可以采取更多的標準點來測試方法的邊界，具體實際應用時，可以根據檢測對象的分子量范圍，以及成本和時間的考慮，選擇其中一部分分子量分布來繪制標準曲線。
[0027]例如，本專利技術的兩個實施例中采用取分子量590、3070、10300、21600的聚乙二醇標樣、33600、10120的聚氧化乙烯標樣，配成標準溶液；再利用標準溶液繪制標準曲線。
[0028]所述稀釋劑為0.2～1.0mol/L氯化鈉水溶液，氯化鈉水溶液中含1％乙酸。優選為：0.3～0.6mol/L氯化鈉水溶液(含1％乙酸)，更優選地為0.3～0.5mol/L氯化鈉水溶液(含1％乙酸)；進一步優選為0.5mol/L氯化鈉水溶液，含1％乙酸。
[0029]所述標準曲線是以標準品線性溶液中主峰的保留時間為橫坐標，以分子量對照品的Mp值為縱坐標，進行擬合而得。
[0030]作為優選，樣品進行凝膠色譜測試時，待測溶液濃度為5
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10mg/mL。
[0031]作為優選，凝膠色譜條件中色譜流動相優選為0.5mol/L氯化鈉水溶液(含1％乙酸)；流動相流速為1mL/min。
[0032]作為優選，凝膠色譜條件中凝膠色譜柱溫為30℃；檢測器溫度為35℃。
[0033]作為優選，凝膠色譜條件中樣品進樣量為10μL。
[0034]本專利技術通過Shodex OHpak SB
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804HQ2支串聯以及流動相的選擇，實現了聚烯丙胺分子量及分子量分布的測定，當采用不同pH乙酸鈉水溶液作為流動相時，方法的重現性不佳，可能由于環境變化(室溫等)或者流動相離子強度不足導致。而采用氯化鈉水溶液(含1％乙酸)時方法重現性好。本專利技術可檢測分子量檢測范圍為108～246600。
[0035]有益效果：
[0036]本專利技術通過Shodex OHpak SB
?
804HQ2支串聯以及流動相的選擇，實現了聚烯丙胺分子量及分子量分布的測定，在該色譜條件下能夠便捷、快速的實現不同分子量的聚烯丙胺鹽酸鹽的分離，經實驗驗證，本專利技術方法峰形好、分子量檢測范圍108～246600，范圍廣，在600～104700分子量區間內重現性高、分離度好、準確度高。
附圖說明
[0037]圖1為本專利技術實例2中聚烯丙胺鹽酸鹽標準液相圖譜。
[0038]圖2為本專利技術實例中2中對照品擬合標準曲線譜圖。
[0039]圖3為本專利技術對實施例1中流動相改變pH的對比圖譜。
[0040]圖4為本專利技術對比方案1中圖譜。
[0041]圖5為本專利技術對比方案2中對照品和供試品重疊圖譜。
[0042]圖6為本專利技術對比方案3中對照品擬合標準曲線譜圖。
[0043]圖7為本專利技術對實施例1中流動相改變鹽濃度的對比圖譜。
具體實施方式
[0044]以下各實施例中所使用試劑均為購買，直接使用。
[0045]實施例1
[0046]考察流動相鹽濃度、pH對供試品溶液中主峰峰形的影響
[0047]溶液配制
[0048]稀釋劑1：0.12mol/L乙酸鈉水溶液(加乙酸調pH至4.5)
[0049]取聚烯丙胺鹽酸鹽6.63mg，置進樣小瓶，加1.5ml稀釋劑1溶解，混勻，配制成終濃度為5mg/ml的供試品溶液；
[0050]稀釋劑2：0.2mol/L乙酸鈉水溶液(加乙酸調pH至4.5)
[0051]取聚烯丙胺鹽酸鹽4.58mg，置進樣小瓶，加1.0ml稀釋劑2溶解，混勻，配制成終濃度為5mg/ml的供試品溶液；
[0052]稀釋劑3：0.3mol/L乙酸鈉水溶液(加乙酸調pH至4.5)
[0053]取聚烯丙胺鹽酸鹽5.59mg，置進樣小瓶，加1.0ml稀釋劑3溶解，混勻，配制成終濃度為5mg/ml的供試品溶本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布的方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）配制標準品溶液將不同分子量的標準品用稀釋劑溶解，得標準品溶液，標準品濃度為5~10mg/mL；（2）繪制標準曲線將不同分子量的標準品溶液進行色譜分析，記錄保留時間，繪制線性曲線方程，計算r值；（3）配制樣品溶液將聚烯丙胺鹽酸鹽用稀釋劑溶解，配置成濃度為5~10mg/mL的樣品溶液；（4）樣品溶液測定：將樣品溶液進行色譜分析，得到色譜圖，通過標準曲線計算不同保留時間下的聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量，得到聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布。2.根據權利要求1所述的一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布的方法，其特征在于：步驟1）中所述不同分子量的標準品分別為分子量108、590、3070、10300、21600的聚乙二醇標樣，分子量33600、101200、246600的聚氧化乙烯中的任意幾種組合。3.根據權利要求1所述的一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布的方法，其特征在于：所述稀釋劑為0.2~1.0 mol/L氯化鈉水溶液，氯化鈉水溶液中含1%乙酸。4.根據權利要求1所述的一種凝膠色譜法測定聚烯丙胺鹽酸鹽的分子量及分子分布的方法，其特征在于：所述色譜柱為Shodex OHpak SB
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804HQ2支串聯。...
【專利技術屬性】
技術研發人員：顧霞，胡振宇，向威，
申請(專利權)人：江蘇恒盛藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：
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