一種新的多肽——人鋅指蛋白46和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術

本發明專利技術公開了一種新的多肽－人鋅指蛋白４６，編碼此多肽的多核苷酸和經ＤＮＡ重組技術產生這種多肽的方法。本發明專利技術還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發明專利技術還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發明專利技術還公開了編碼這種新的人鋅指蛋白４６的多核苷酸的用途。（*該技術在2019年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，具體地說，本專利技術描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白46，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。真核基因的轉錄調控對于基因的正常表達及發揮生物學功能是十分重要的，通常由轉錄調控因子來完成這一過程。轉錄調控因子在生物體內參與決定基因在何種組織及何種發育階段開始轉錄，編碼這類蛋白的基因如發生突變，不但該基因自身不能正常表達，而且受其調節的許多基因也不能正常的進行轉錄與表達。轉錄因子對基因表達的調控主要通過轉錄因子與特定的DNA序列結合、轉錄因子間的相互作用及轉錄因子與常規轉錄機構的相互作用在完成。根據結構基序的不同，已知的DNA結合蛋白可主要分為兩類含有螺旋-轉角-螺旋基序的蛋白及鋅指蛋白。鋅指蛋白為編碼鋅離子介導的核苷酸結合蛋白多基因家族中的成員，鋅指蛋白按其結構特征又可分為各種不同的家族。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種類型的鋅指蛋白。果蠅Kruppel基因類似的鋅指蛋白分布最為廣泛，且在生物體內有著重要的生物學功能。這些基因均含有鋅指蛋白的特征性連續重復的C2-H2鋅指蛋白結構域。研究發現，這些蛋白與基因的轉錄活化及抑制有關，這些蛋白的表達異常將引發各種發育紊亂性疾病、各種腫瘤的發生、各種遺傳性疾病及免疫系統疾病。所有的鋅指蛋白Kruppel家族的成員均含有28-30個氨基酸長的保守的指重復序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個拷貝，其拷貝數不同(鋅指個數不同)則功能也不同。鋅指蛋白與不同長度的DNA的結合依賴于指結構的數量，多指結構可能與復合物的結合穩定性有關，而復合物是RNA聚合酶轉錄的作用位點。研究發現，許多鋅指蛋白的鋅指結構域相互連接區域也是高度保守的，這一區域通常含有下列序列His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中組氨酸與半胱氨酸為金屬離子的結合位點，而X為可變氨基酸殘基。這一區域對于鋅指結構的形成是必需的，指結構的數量將直接影響鋅指蛋白與不同長度的DNA結合，且多指結構與復合物的結合穩定性有關。1991年，Rosati M等人克隆得到了多個人結構相關的鋅指蛋白亞家族的成員，該亞家族的成員的C末端均含有一Kruppel型鋅指基序，且其N末端含有兩個保守的氨基酸模式，即FPB-A及FPB-B。其中，FPB-B在所有的家族成員中均存在，而FPB-A在有些成員中存在，在有些成員中不存在。這兩個結構模式是在前體mRNA的選擇性剪切過程中形成的。本專利技術的新的人鋅指蛋白與已知的人鋅指蛋白41在蛋白水平上有55％的同一性及68％的相似性。且兩者的氨基酸序列均含有人鋅指蛋白Kruppel家族的特征性連續指重復序列及指結構相連區域。因而，本專利技術的新人鋅指蛋白與人鋅指蛋白41相似，同為人鋅指蛋白Kruppel家族的成員，并具有相似的生物學功能。其在生物體內與可用于診斷及治療各種相關的惡性腫瘤、癌癥及發育、代謝紊亂癥等。由于如上所述人鋅指蛋白46蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白46蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白46蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術的一個目的是提供分離的新的多肽——人鋅指蛋白46以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白46的多核苷酸的重組載體。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白46的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。本專利技術的另一個目的是提供生產人鋅指蛋白46的方法。本專利技術的另一個目的是提供針對本專利技術的多肽——人鋅指蛋白46的抗體。本專利技術的另一個目的是提供了針對本專利技術多肽——人鋅指蛋白46的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本專利技術的另一個目的是提供診斷治療與人鋅指蛋白46異常相關的疾病的方法。本專利技術涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本專利技術還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO1中167-1429位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-3703位的序列。本專利技術另外涉及一種含有本專利技術多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本專利技術多肽的方法。本專利技術還涉及一種能與本專利技術多肽特異性結合的抗體。本專利技術還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人鋅指蛋白46蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術的多肽。本專利技術還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術還涉及一種體外檢測與人鋅指蛋白46蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本專利技術多肽的量或生物活性。本專利技術也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。本專利技術還涉及本專利技術的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發育性疾病或免疫性疾病或其它由于人鋅指蛋白46表達異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。本說明書和權利要求書中使用的下列術語除非特別說明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術語“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質序列及其片段或部分。當本專利技術中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質分子的氨基酸序列時，這種“多肽”或“蛋白質”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質分子相關的完整的天然氨基酸。蛋白質或多核苷酸“變體”是指一種具有一個或多個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結構或化學性質，如用亮氨酸替換異亮氨酸。變體也可具有非保守性改變，如用色氨酸替換甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一個或多個氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改變導致與天然存在的分子相比，一個或多個氨基酸或核苷酸的增加。“替換”是指由不同的氨基酸或核苷酸替換一個或多個氨基酸或核苷酸。“生本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離的多肽－人鋅指蛋白４６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：毛裕民，謝毅，顧葉平，林盛蔭，王勇，
申請(專利權)人：上海博容基因開發有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]