一種新的多肽——人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種新的多肽－人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白９５，編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)ＤＮＡ重組技術(shù)產(chǎn)生這種多肽的方法。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了編碼這種新的人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白９５的多核苷酸的用途。（*該技術(shù)在2019年保護(hù)過期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生物
，具體地說，本專利技術(shù)描述了一種新的多肽——人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術(shù)還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。在生物體內(nèi)存在著一類蛋白，這類蛋白均含有溴基結(jié)構(gòu)域，這類蛋白構(gòu)成了一獨(dú)立的蛋白家族。該家族的成員在生物體內(nèi)與DNA的正確結(jié)合及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)，尤其在生物體生長(zhǎng)發(fā)育過程中調(diào)節(jié)蛋白與蛋白間的相互作用。它們通常通過對(duì)下游調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)來調(diào)節(jié)各種蛋白的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。其表達(dá)異常可能會(huì)導(dǎo)致蛋白功能異常，從而導(dǎo)致全身各部分的發(fā)育異常，引發(fā)各種相關(guān)的發(fā)育紊亂性疾病、免疫紊亂性疾病甚至各種腫瘤及癌癥等。溴基結(jié)構(gòu)域由以下保守的序列組成-X(2)-F-X(4)--X(5，7)--Y--X(2)--X(3)--X(4)--X(6，8)-Y-X(12，13)--X(2)-N--X(2)-。該結(jié)構(gòu)域是一由77個(gè)氨基酸殘基組成的結(jié)構(gòu)基序，這一結(jié)構(gòu)基序在酵母及人的各種調(diào)控蛋白中也有存在，其組成了一新的調(diào)控蛋白家族。該結(jié)構(gòu)基序在生物體內(nèi)參與蛋白與蛋白的相互作用，其可能對(duì)參與轉(zhuǎn)錄活性的多成分復(fù)合物的活性及聚集起重要的調(diào)節(jié)作用。若該結(jié)構(gòu)域或含有該結(jié)構(gòu)域的蛋白表達(dá)異常將導(dǎo)致一些DNA轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控蛋白的功能異常，從而從轉(zhuǎn)錄水平影響各種蛋白的表達(dá)，如無法正常而正確地形成各種同源異構(gòu)蛋白，從而引發(fā)各組織及器官與蛋白表達(dá)異常相關(guān)的疾病。1997年，Jones MH等人從人中克隆得到了該家族的成員---RING3蛋白，該蛋白為一促細(xì)胞核分裂素活性蛋白，在增殖細(xì)胞包括白血病中均有表達(dá)。該蛋白含有絲氨酸，蘇氨酸激酶及自發(fā)磷酸化活性位點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，該基因與果蠅的發(fā)育基因fsh及D26232基因均有較高的同源性。這些蛋白均含有溴基結(jié)構(gòu)域基序及PEST序列，且在睪丸組織中特異表達(dá)，因而，該類蛋白在生物的發(fā)育調(diào)控過程中起著重要的作用。本專利技術(shù)的新的人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白與已知的人RING3蛋白在蛋白水平上有24％的同一性和42％的相似性，且兩者相似均含有溴基結(jié)構(gòu)域及PEST序列片段，因而兩者同為一蛋白家族的成員，且具有相似的生物學(xué)功能。其表達(dá)異常可能會(huì)導(dǎo)致蛋白功能異常，從而導(dǎo)致全身各部分的發(fā)育異常，引發(fā)各種相關(guān)的發(fā)育紊亂性疾病、免疫紊亂性疾病甚至各種腫瘤及癌癥等。由于如上所述人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術(shù)的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供含有編碼人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的多核苷酸的重組載體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供含有編碼人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的方法。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本專利技術(shù)的多肽——人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的抗體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本專利技術(shù)多肽——人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95異常相關(guān)的疾病的方法。本專利技術(shù)涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本專利技術(shù)還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO1中120-2708位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2826位的序列。本專利技術(shù)另外涉及一種含有本專利技術(shù)多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本專利技術(shù)多肽的方法。本專利技術(shù)還涉及一種能與本專利技術(shù)多肽特異性結(jié)合的抗體。本專利技術(shù)還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術(shù)的多肽。本專利技術(shù)還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術(shù)還涉及一種體外檢測(cè)與人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95蛋白異常表達(dá)相關(guān)的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測(cè)生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測(cè)生物樣品中本專利技術(shù)多肽的量或生物活性。本專利技術(shù)也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術(shù)多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學(xué)上可接受的載體。本專利技術(shù)還涉及本專利技術(shù)的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發(fā)育性疾病或免疫性疾病或其它由于人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95表達(dá)異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術(shù)的其它方面由于本文的技術(shù)的公開，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。本說明書和權(quán)利要求書中使用的下列術(shù)語除非特別說明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術(shù)語“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質(zhì)序列及其片段或部分。當(dāng)本專利技術(shù)中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質(zhì)分子的氨基酸序列時(shí)，這種“多肽”或“蛋白質(zhì)”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質(zhì)分子相關(guān)的完整的天然氨基酸。蛋白質(zhì)或多核苷酸“變體”是指一種具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)，如用亮氨酸替換異亮氨酸。變體也可具有非保守性改變，如用色氨酸替換甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改變導(dǎo)致與天然存在的分子相比，一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸的增加。“替換”是指由不同的氨基酸或核苷酸替換一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的結(jié)構(gòu)、調(diào)控或生物化學(xué)功能的蛋白質(zhì)。類似地，術(shù)語“免疫學(xué)活性”是指天然的、重組的或合成蛋白質(zhì)及其片段在合適的動(dòng)物或細(xì)胞中誘導(dǎo)特定免疫反應(yīng)以及與特異性抗體結(jié)合的能力。“激動(dòng)劑”是指當(dāng)與人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95結(jié)合時(shí)，一種可引起該蛋白質(zhì)改變從而調(diào)節(jié)該蛋白質(zhì)活性的分子。激動(dòng)劑可以包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或任何其它可結(jié)合人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的分子。“拮抗劑”或“抑制物”是指當(dāng)與人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95結(jié)合時(shí)，一種可封閉或調(diào)節(jié)人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白95的生物學(xué)活性或免疫學(xué)活性的分子。拮抗劑和抑制物可以包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或任何其它可結(jié)合本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種分離的多肽－人含溴基結(jié)構(gòu)域的蛋白９５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：毛裕民，謝毅，江廣平，戴建涼，顧葉平，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海博容基因開發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：31[中國(guó)|上海]