長效降糖調(diào)脂多肽及其用途制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及長效降糖調(diào)脂多肽及其用途。該多肽的氨基酸序列為HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGPGVLGGGCRCIPALDSLTPANED。該多肽的用途為制備治療或預(yù)防1型糖尿病、2型糖尿病藥物或藥物組合物，制備免疫調(diào)節(jié)藥物或藥物組合物。本發(fā)明專利技術(shù)的長效降糖調(diào)脂多肽可實現(xiàn)長達(dá)10小時的藥效持續(xù)時間。該多肽為雙功能多肽：既能與GLP?1類似物一樣，降低1型糖尿病病人的血糖并降低糖化血紅蛋白，降低2型糖尿病病人的血糖、抑制進(jìn)食并降低糖化血紅蛋白，又能與VP肽一樣，調(diào)節(jié)免疫，抑制病理性的免疫攻擊。

Long-acting hypoglycemic and lipid-regulating polypeptide and its application

The invention relates to a long-term hypoglycemic and lipid-regulating polypeptide and its use. The amino acid sequence of the polypeptide is HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGPGVLGGCRCIPALDSLTPANED. The purpose of the polypeptide is to prepare drugs or pharmaceutical compositions for the treatment or prevention of type 1 diabetes mellitus and type 2 diabetes mellitus, and to prepare immunoregulatory drugs or pharmaceutical compositions. The long-acting hypoglycemic and lipid-regulating polypeptide of the invention can achieve a pharmacodynamic duration of up to 10 hours. The polypeptide is a bifunctional polypeptide: it can not only reduce blood sugar and glycosylated hemoglobin in type 1 diabetic patients, reduce blood sugar in type 2 diabetic patients, inhibit eating and reduce glycosylated hemoglobin, but also regulate immunity and inhibit pathological immune attack like VP peptide.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
長效降糖調(diào)脂多肽及其用途
本專利技術(shù)涉及一種長效降糖調(diào)脂多肽，具有更長的藥效持續(xù)時間，同時兼具免疫調(diào)節(jié)功能，屬于生化藥學(xué)

技術(shù)介紹
據(jù)專利技術(shù)人所知，1型糖尿病(T1DM)是一種由于胰腺β細(xì)胞被破壞而導(dǎo)致胰島素絕對缺乏的疾病。目前，1型糖尿病的研究主要分為前期診斷和預(yù)防階段，以及中后期的治療階段。其中，診斷和預(yù)防主要針對糖尿病的發(fā)病機(jī)理而研究相應(yīng)的診斷方法和預(yù)防措施。1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制涉及T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫攻擊以及在易感個體中B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生針對β細(xì)胞的抗體反應(yīng)，因此患者在出現(xiàn)臨床癥狀前的較長一段時間內(nèi)，體內(nèi)就有針對胰島β細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)存在，這就為疾病的診斷和預(yù)防提供了基礎(chǔ)。目前研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在出現(xiàn)高血糖臨床癥狀之前，自身免疫抗原可在數(shù)月或數(shù)年之前就可以被檢測到。針對這些抗原，目前已經(jīng)研制了多種疫苗，其靶點(diǎn)主要集中在自身免疫性T細(xì)胞；這些疫苗能夠誘導(dǎo)保護(hù)性免疫耐受，改善病理性的自身免疫；免疫耐受通過抑制效應(yīng)T細(xì)胞，并激活調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)，起到改善病理性自身免疫的效果，延緩糖尿病發(fā)展。已經(jīng)確診為高血糖的1型糖尿病患者主要以治療為主，胰島素仍然是臨床治療的主要藥物，加強(qiáng)的胰島素治療也是目前臨床上控制1型糖尿病的主要的治療手段，而胰島移植、干細(xì)胞移植等方法也逐漸出現(xiàn)，但是都處于研究階段，離應(yīng)用還存在一定的距離。因此靶向T1DM其他缺陷的治療也成為一種良好的治療方式，特別是T1DM患者常見的治療副作用，如體重增加，胰島素劑量的增加，注射次數(shù)的和低血糖等。由于缺乏新的治療方式，導(dǎo)致T1DM患者要不斷地努力控制血糖。胰高血糖素樣肽-1受體激動劑(GLP-1RA)已被認(rèn)為是T1DM患者胰島素的伴隨療法，因為它們能夠保持或減輕體重、降低低血糖風(fēng)險以及降低胰高血糖素水平等。GLP-1RA能夠保護(hù)β細(xì)胞，因此GLP-1RA可以通過停止自身免疫破壞或增加β細(xì)胞再生來增加T1DM患者的β細(xì)胞量。在診斷時，大多數(shù)1型糖尿病患者仍然具有分泌胰島素的能力，相當(dāng)于非糖尿病個體的20-30％，因此，存在保持和增加β細(xì)胞量的機(jī)會，這可以通過GLP-1RA的治療來實現(xiàn)，這也將改善低血糖的風(fēng)險，因為功能性β細(xì)胞的參與更有利于胰高血糖素的反應(yīng)。專利技術(shù)人于2016.12.20申請了申請?zhí)枮镃N201611222521.7、申請公布號為CN106519016A、名稱為《降糖調(diào)脂肽——Progly肽的設(shè)計及其用途》的中國專利技術(shù)專利申請，其中涉及的Progly肽為GLP-1類似物，能夠有效降低1型糖尿病小鼠的空腹血糖，改善體重等，可以作為1型糖尿病的輔助治療藥物。熱休克蛋白60(Hsp60)是一種主要的自身抗原，在1型糖尿病患者體內(nèi)已經(jīng)檢測到高水平的抗Hsp60抗體，抗體的滴度與疾病嚴(yán)重程度正相關(guān)。其中Hsp60上437位～460位的一段特異性多肽P277肽，其序列為VLGGGCALLRCIPALDSLTPANED，是一種抗原決定簇，能特異地與效應(yīng)T細(xì)胞反應(yīng)。P277肽與Hsp60一樣具有引起血管內(nèi)皮損傷的副作用，P227肽免疫的C57BL/6小鼠，能夠引起嚴(yán)重的血管內(nèi)皮損傷，在高脂飼養(yǎng)新西蘭大白兔模型上，P277肽免疫誘發(fā)了嚴(yán)重動脈粥樣硬化，并且發(fā)現(xiàn)大量P277抗體聚集在動脈硬化斑塊周圍，說明P277肽不僅存在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的T表位，還存在致動脈粥樣硬化的B表位。專利技術(shù)人于2016.10.28申請了申請?zhí)枮镃N201610949156.3、申請公布號為CN106518987A、名稱為《新型糖尿病免疫調(diào)節(jié)肽-VP肽的設(shè)計及其用途》的中國專利技術(shù)專利申請，其中，通過表位掃描技術(shù)，精確掃描到P277肽的B表位，在最大程度保證T表位完整性和B表位空間結(jié)構(gòu)的前提下，通過氨基酸突變來改造B表位，得到VP肽，能夠保持免疫調(diào)節(jié)作用的同時，消除血管內(nèi)皮損傷的副作用。在上述已有成果的基礎(chǔ)上，專利技術(shù)人在進(jìn)一步地實踐研究中發(fā)現(xiàn)，雖然Progly肽的藥效持續(xù)時間不短，可達(dá)2小時，但是如果能通過進(jìn)一步改進(jìn)使其藥效持續(xù)時間大幅延長，形成長效藥物，則更加有利于該藥物的市場推廣。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是：克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種長效降糖調(diào)脂多肽，能大幅延長Progly肽的藥效持續(xù)時間。本專利技術(shù)的主要研究過程如下：專利技術(shù)人在實踐研究中想要通過融合肽的方式來延長Progly肽的藥效持續(xù)時間，然而在選擇融合哪種肽時則頗費(fèi)一番周折。按以往研究經(jīng)驗來看，選擇半衰期(或藥效持續(xù)時間)較長的肽進(jìn)行融合，應(yīng)當(dāng)能延長Progly肽的藥效持續(xù)時間，然而在嘗試多個這樣的肽進(jìn)行融合后，發(fā)現(xiàn)它們反而不利于Progly肽發(fā)揮藥效。于是，專利技術(shù)人擴(kuò)大了選擇范圍，嘗試一些半衰期(或藥效持續(xù)時間)不太長的肽進(jìn)行融合，終于從中篩選出VP肽(其藥效持續(xù)時間僅達(dá)3-4小時)，VP肽與Progly肽的融合肽不但能正常發(fā)揮Progly肽的藥效，而且藥效持續(xù)時間長達(dá)10小時，是符合專利技術(shù)人預(yù)期的長效降糖調(diào)脂多肽，同時兼具免疫調(diào)節(jié)功能。本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：一種長效降糖調(diào)脂多肽，其特征是，所述多肽的氨基酸序列為：HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGPGVLGGGCRCIPALDSLTPANED。上述長效降糖調(diào)脂多肽用于制備治療或預(yù)防1型糖尿病藥物或藥物組合物的用途。上述長效降糖調(diào)脂多肽用于制備治療或預(yù)防2型糖尿病藥物或藥物組合物的用途。上述長效降糖調(diào)脂多肽用于制備免疫調(diào)節(jié)藥物或藥物組合物的用途。上述用途中，所述藥物組合物包括藥物載體和/或藥物活性物質(zhì)。本專利技術(shù)的長效降糖調(diào)脂多肽可實現(xiàn)長達(dá)10小時的藥效持續(xù)時間。該多肽為雙功能多肽：既能與GLP-1類似物一樣，降低1型糖尿病病人的血糖并降低糖化血紅蛋白，降低2型糖尿病病人的血糖、抑制進(jìn)食并降低糖化血紅蛋白，又能與VP肽一樣，調(diào)節(jié)免疫，抑制病理性的免疫攻擊。附圖說明圖1為本專利技術(shù)實施例1的PGLP-1肽實驗結(jié)果示意圖。圖中，PGLP-1組與對照組相比時，*表示P<0.05，***表示P<0.001；GLP-1組與對照組相比時，^^^表示P<0.001；PGLP-1組與GLP-1組相比時，$表示P<0.05，$$表示P<0.01，$$$表示P<0.001；GTT指糖耐量實驗；AUC指曲線下面積。圖2為本專利技術(shù)實施例1的VP肽實驗結(jié)果示意圖。圖3為本專利技術(shù)實施例1的P15肽實驗結(jié)果示意圖。圖中，PGLP-1-VP即指P15肽；PGLP-1組與對照組相比時，***表示P<0.001；GLP-1組與對照組相比時，^^^表示P<0.001；GTT指糖耐量實驗；AUC指曲線下面積。圖4為本專利技術(shù)實施例2的累計進(jìn)食影響結(jié)果示意圖。圖5為本專利技術(shù)實施例2的血糖影響結(jié)果示意圖。圖6為本專利技術(shù)實施例2的甘油三酯和游離脂肪酸影響結(jié)果示意圖。圖7為本專利技術(shù)實施例2的NOD小鼠發(fā)病率和死亡率影響結(jié)果示意圖。圖8為本專利技術(shù)實施例2的NOD小鼠空腹血糖影響結(jié)果示意圖。圖9為本專利技術(shù)實施例2的NOD小鼠胰腺重量和胰腺炎影響結(jié)果示意圖。圖10為本專利技術(shù)實施例2的NOD小鼠免疫調(diào)節(jié)因子Th1/Th2影響結(jié)果示意圖。具體實施方式下面參照附圖并結(jié)合實施例對本專利技術(shù)作進(jìn)一步詳細(xì)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種長效降糖調(diào)脂多肽，其特征是，所述多肽的氨基酸序列為：HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGPGVLGGGCRCIPALDSLTPANED。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種長效降糖調(diào)脂多肽，其特征是，所述多肽的氨基酸序列為：HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGPGVLGGGCRCIPALDSLTPANED。2.權(quán)利要求1述及長效降糖調(diào)脂多肽用于制備治療或預(yù)防1型糖尿病藥物或藥物組合物的用途...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：金亮，高華山，趙茜，張艷峰，盧世平，
申請(專利權(quán))人：中國藥科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇,32