一種羊絨織物的分子鑒定方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種羊絨織物的分子鑒定方法，包括以下步驟：從羊絨織物中提取線粒體DNA(mtDNA)；進行cytB基因的PCR擴增；將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察結(jié)果，如果出現(xiàn)暗條帶，則鑒定含有羊絨成分。羊絨織物包括純羊絨織物和非純羊絨織物，非純羊絨織物包括含有部分量羊絨的織物和不含有羊絨的織物。優(yōu)選方案中，從羊絨織物中提取線粒體mtDNA采用Biomega試劑盒法。本發(fā)明專利技術(shù)用不同的方法從純羊絨及羊絨織物中提取到mtDNA，利用根據(jù)設(shè)計出的cytB基因的特異性引物進行PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))擴增，然后進行瓊脂糖凝膠電泳，可以定性對羊絨分子進行鑒定。

Molecular identification method of cashmere fabric

The invention discloses a molecular identification method of cashmere fabrics, which comprises the following steps: extraction of mitochondrial DNA from cashmere fabric (mtDNA); cytB gene was amplified by PCR; the amplified products were analyzed by agarose gel electrophoresis, observe the results, if there are dark bands, identification of cashmere contain ingredients. Cashmere fabric consists of pure cashmere fabric and non pure cashmere fabric, and non pure cashmere fabric consists of fabric containing part of cashmere and fabric without cashmere. In the optimization scheme, mitochondrial mtDNA was extracted from cashmere fabric and Biomega kit was used. The present invention from pure cashmere and cashmere fabrics with different methods to extract mtDNA by PCR according to the cytB gene specific primers designed for the amplification (polymerase chain reaction), followed by agarose gel electrophoresis, qualitative identification of cashmere molecules.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種羊絨織物的分子鑒定方法
本專利技術(shù)涉及羊絨鑒定方法領(lǐng)域，具體涉及一種羊絨織物的分子鑒定方法。
技術(shù)介紹
我國是世界上主要生產(chǎn)山羊絨(簡稱羊絨)的國家之一，每年的年產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的70％以上，居于世界第一位，同時羊絨質(zhì)量也居于世界第一位。羊絨纖維是紡織工業(yè)中的高級原料，有著“軟黃金”的美稱，交易以克論價。近幾年來，人們的生活水平都普遍提高，對于高質(zhì)量的羊絨制品更加青睞，對羊絨市場的需求也更大了。但由于羊絨價格昂貴，附加利潤特別高，受利益驅(qū)使，一些不法商販以次充好，導致市場上的摻假現(xiàn)象嚴重。例如，用羊毛、兔毛等價格較低的動物纖維冒充羊絨作為填充物。由于這些動物纖維在結(jié)構(gòu)、外觀形態(tài)、理化性能上與羊絨較為接近，但價格上卻相差很大，從而賺取巨額差價來牟取暴利。一般這類以次充好的產(chǎn)品保暖性能都達不到標準，從而給消費者帶來損失。因此，對羊絨織物進行鑒定，加以區(qū)分有助于杜絕市場上這種現(xiàn)象的出現(xiàn)，保證羊絨的質(zhì)量以及消費者的利益。山羊?qū)儆诓溉轭惖募倚螅话闵钤跉夂蜃兓瘎×业那鹆昱c高山地區(qū)。因此，山羊為了能夠適應(yīng)寒冷的氣候變化，在其粗長的根部，有一層薄薄的細軟絨毛，即山羊絨(Cashmere)。山羊絨是一種稀有的動物纖維，一般在冬天較寒冷時長出，可以抵御風寒。春天氣溫回升之后脫落，使山羊能夠自然的適應(yīng)氣候。羊絨的來源非常豐富，可以直接從活體上獲得所要的樣品。羊絨纖維柔軟纖細、光澤柔和，在紡織工業(yè)中屬于高檔原料，用其作為原料的制品手感非常柔軟，并且保暖舒適，華麗高雅。羊絨由鱗片和皮質(zhì)層組成，沒有髓質(zhì)層。鱗片較薄，表面及邊緣光滑，緊貼毛干。皮質(zhì)層是纖維的主體，它是由細而長的紡錘體角質(zhì)細胞順著纖維縱軸緊密排列而成，纖維的性能主要取決于皮質(zhì)層，鱗片層與皮質(zhì)層共同決定了纖維的縱向和橫截面的形態(tài)特征。山羊絨的強伸度、彈性變化都很好,少卷曲，勻直光滑，具有細、輕、柔軟、保暖性好等優(yōu)良特性。目前主要的鑒別方法有光學投影顯微鏡法、計算機圖形分析法(掃描電子顯微鏡法)、染色法、溶液鑒別法、基因分析法等，具體如下：一、光學投影顯微鏡法光學投影顯微鏡法是目前最常用的方法。在紡織中，毛類纖維使用量最大的就是羊毛，羊毛纖維可分為三個組成部分：包覆在毛干外部的鱗片層。組成羊毛實體主要部分的皮質(zhì)層，在毛干中心由不透明毛髓組成的髓質(zhì)層。山羊絨與羊毛纖維相似,也由鱗片層和皮質(zhì)層構(gòu)成。光學投影顯微鏡由于放大倍數(shù)和景深的限制,圖像分辨率較低,受樣品顏色影響較大，因此，無法區(qū)分鱗片的細微結(jié)構(gòu),不能測量鱗片的邊緣厚度、邊緣高度,特別是對纖維表面進行了化學處理后的樣品。所以，在鑒定時主觀性比較強，容易產(chǎn)生誤判。二、計算機圖形分析法計算機圖形分析法是通過掃描電子顯微鏡對羊絨和羊毛纖維實時成像，然后采集圖像，將其傳送到計算機系統(tǒng)里，并對圖像進行一系列處理和計算，從而對羊絨和羊毛纖維進行識別。這種檢測方法提高了客觀性和準確性,也減少了對檢測人員水平、經(jīng)驗的依賴性，但是效率比較低、速度也比較慢、反而成本比較高。三、染色法由于山羊絨具有某些特定的物理性質(zhì)，例如較細、表面能高，所以其對某一類染料的吸附能力比較強。利用這一特點可以對羊絨與羊毛纖維進行鑒定。一般情況下，選擇相同的處方和染料，通過觀察是否出現(xiàn)顏色以及顏色的深淺和上色率的不同來鑒別羊絨和羊毛纖維。四、溶液鑒別法因為羊絨的鱗片層比羊毛鱗片層的薄，所以溶液更容易滲透到羊絨的纖維皮質(zhì)層中。與此同時，羊絨纖維的細度比羊毛更細，使得溶液能夠把整根纖維都滲透。故如果用同一種溶液對兩種纖維進行處理，兩種纖維的卷曲變化會有差異。然后可以借助光學顯微鏡觀察這種差異。但是這種方法只適合對纖維的宏觀形態(tài)差異進行鑒別,準確度有限。五、基因分析法首先提取樣品的DNA，然后對各個樣品的DNA序列的差異進行分析。在羊絨織物的分子鑒定中的應(yīng)用包括分子標記法、探針雜交法以及特異性引物擴增法。這種方法的準確度很高，靈敏度好，同時客觀性比較強。但是目前最大的難點就是怎樣從羊絨中獲得高質(zhì)量的DNA。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對目前市場上羊絨產(chǎn)品造假嚴重的現(xiàn)象，本專利技術(shù)提供了一種羊絨織物的分子鑒定方法，用不同的方法從純羊絨及羊絨織物中提取到線粒體DNA(mtDNA)，利用根據(jù)設(shè)計出的cytB基因的特異性引物進行PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))擴增，然后進行瓊脂糖凝膠電泳，可以定性對羊絨分子進行鑒定。一種羊絨織物的分子鑒定方法，包括以下步驟：(1)從羊絨織物中提取線粒體DNA(mtDNA)；(2)進行cytB基因的PCR擴增；(3)將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察結(jié)果，如果出現(xiàn)暗條帶，則鑒定含有羊絨成分。羊絨織物包括純羊絨織物和非純羊絨織物，非純羊絨織物包括含有部分量羊絨的織物和不含有羊絨的織物。步驟(1)中，從羊絨織物中提取線粒體DNA(mtDNA)采用Biomega試劑盒法，Biomiga試劑盒包括DNA吸附柱、收集管、BL緩沖液、TL緩沖液、KB緩沖液、DNA洗滌液、洗脫緩沖液、蛋白酶K緩沖液，DNA洗滌緩沖液由DNA洗滌液經(jīng)乙醇稀釋得到；該方法具體包括：a.將羊絨織物樣品剪碎；b.加入TL緩沖液，蛋白酶K緩沖液，DTT(二硫蘇糖醇)，混勻均勻，然后溫育；步驟b中，所述的溫育的條件為：45℃～55℃溫育20～40min。進一步優(yōu)選，所述的溫育的條件為：50℃溫育30min。c.加入BL緩沖液，混合均勻，再加入無水乙醇，混合均勻；d.將樣品移至DNA吸附柱中，包括沉淀，然后離心，倒掉液體；步驟d中，所述的離心的條件為：在9000～11000rpm條件下離心0.5～3min。進一步優(yōu)選，所述的離心的條件為：在10000rpm條件下離心1min。e.向吸附柱加入KB緩沖液，離心，倒掉液體，并將吸附柱重新放在收集管中；步驟e中，所述的離心的條件為：在9000～11000rpm條件下離心0.5～3min。進一步優(yōu)選，所述的離心的條件為：在10000rpm條件下離心1min。f.加入DNA洗滌緩沖液，離心，倒掉收集管中的液體，將吸附柱重新置于收集管中；步驟f中，所述的離心的條件為：在9000～11000rpm條件下離心0.5～3min。進一步優(yōu)選，所述的離心的條件為：在10000rpm條件下離心1min。g.加入DNA洗滌緩沖液，離心，倒掉收集管中的液體并丟棄收集管，打開吸附柱的蓋子，將其放置在新的收集管中；步驟g中，所述的離心的條件為：在9000～11000rpm條件下離心05～3min。進一步優(yōu)選，所述的離心的條件為：在10000rpm條件下離心1min。h.離心，使吸附柱中的液體蒸發(fā)；步驟h中，所述的離心的條件為：11000～15000rpm離心2-7min，進一步優(yōu)選，所述的離心的條件為：13000rpm離心4-5min注意：這一步要求吸附柱中的無水乙醇全部蒸發(fā)，以防其干擾DNA的含量和純度。i.將吸附柱放置在滅菌環(huán)境中，然后加入洗脫緩沖液，然后溫育；步驟i中，所述的洗脫緩沖液為60℃～80℃預(yù)熱的洗脫緩沖液。所述的溫育的條件為：60℃～80℃溫育1～5min。進一步優(yōu)選，所述的洗脫緩沖液為70℃預(yù)熱的洗脫緩沖液。所述的溫育的條件為：70℃溫育3min。j.離心洗脫DNA，即為所得，得到線粒體DNA。步驟j中，所述的離心的條件為：9000～11000rpm離心0.本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種羊絨織物的分子鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)從羊絨織物中提取線粒體DNA；(2)進行cytB基因的PCR擴增；(3)將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察結(jié)果，如果出現(xiàn)暗條帶，則鑒定含有羊絨成分。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種羊絨織物的分子鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)從羊絨織物中提取線粒體DNA；(2)進行cytB基因的PCR擴增；(3)將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察結(jié)果，如果出現(xiàn)暗條帶，則鑒定含有羊絨成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊絨織物的分子鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，從羊絨織物中提取線粒體DNA采用Biomega試劑盒法，型號為GD2512-01的Biomiga試劑盒包括DNA吸附柱、收集管、BL緩沖液、TL緩沖液、KB緩沖液、DNA洗滌液、洗脫緩沖液、蛋白酶K緩沖液，DNA洗滌緩沖液由DNA洗滌液經(jīng)乙醇稀釋得到；該方法具體包括：a.將羊絨織物樣品剪碎；b.加入TL緩沖液、蛋白酶K緩沖液、二硫蘇糖醇，混勻均勻，然后溫育；c.加入BL緩沖液，混合均勻，再加入無水乙醇，混合均勻；d.將樣品移至DNA吸附柱中，包括沉淀，然后離心，倒掉液體；e.向吸附柱加入KB緩沖液，離心，倒掉液體，并將吸附柱重新放在收集管中；f.加入DNA洗滌緩沖液，離心，倒掉收集管中的液體，將吸附柱重新置于收集管中；g.加入DNA洗滌緩沖液，離心，倒掉收集管中的液體并丟棄收集管，打開吸附柱的蓋子，將其放置在新的收集管中；h.離心，使吸附柱中的液體蒸發(fā)；i.將吸附柱放置在滅菌環(huán)境中，然后加入洗脫緩沖液，然后溫育；j.離心洗脫DNA，得到線粒體DNA。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羊絨織物的分子鑒定方法，其特征在于，步驟b中，所述的溫育的條件為：45℃～55℃溫育20～40m...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫世元，劉曉俠，周宇東，魏曉英，尤忠毓，王玉潔，吳建中，付春紅，張娜，石剛，
申請(專利權(quán))人：嘉興市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測院，嘉興學院，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江,33