一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法技術

本發明專利技術提供了一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法，包括以下步驟：挑選生長健康的大田甘蔗植株尾梢為外植體；剝去外層葉鞘，切取莖尖；放入MS培養液內浸泡10~30min；置于配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L+抗壞血酸5~15mg/L+核黃素10~20mg/L并墊有濾紙的培養基上培養；每天搖動培養瓶一次，使甘蔗莖尖改變位置；每星期更換一次培養基。這個方法增強了莖尖的生長活力，降低酚害物質的影響，縮短莖尖萌發時間，顯著的提高甘蔗莖尖培養成活率。

Method for improving survival rate of sugarcane stem tip culture

The present invention provides a method for improving the survival rate of sugarcane shoot tip culture, comprising the following steps: selecting healthy growth of sugarcane field tip as explants; the peeling of the outer sheath, cut tip; in MS medium soaked in 10~30min; in MS+BA1.0mg/L+ NAA0.1mg/L+ formula for sugar 30g/L+ ascorbic acid 5~15mg/L+ riboflavin 10~20mg/L and pad with filter paper the culture medium every day; a shake flask, to change the position of sugarcane; every week to replace a medium. This method enhanced the vigor of stem tip, decreased the influence of phenolic substances, shortened the time of shoot tip germination, and significantly improved the survival rate of sugarcane shoot tip culture.

【技術實現步驟摘要】
一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法
本專利技術屬于植物組織培養
，具體涉及一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法。
技術介紹
甘蔗屬無性系繁殖作物，利用自身的蔗莖作為種源繁殖，連續種植多年后容易感染或者積累病菌。巴西李增生（Lee.TSC）博士報道，所有甘蔗品種的健康良種在生產上使用5年后，100％感染宿根矮化病。因此，一個優良的甘蔗品種，在連續種植多年之后，由于病蟲害的侵染，種性嚴重退化，造成甘蔗品質改變，產量減少等問題。通過熱處理結合莖尖分生組織培養是現在生產上培養甘蔗脫毒健康種苗的一個主要的技術。研究結果表明:這個方法可以把蔗株上的花葉病、宿根矮化病等用常規方法難以防治的病害根除，生產無病、無毒的健康種苗。很多國家如巴西、澳大利亞、古巴等都應用此技術建立工廠化生產脫毒苗。但是目前此技術還存在些許問題，如程序繁多，培養周期時間長、酚污染嚴重，莖尖培養成活率不高，培養成本偏高等，這極大的限制了甘蔗脫毒健康種苗的生產數量和速度。
技術實現思路
針對上述問題，本專利技術公開了一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法，簡潔有效的解決了甘蔗莖尖培養酚污染嚴重、培養成活率不高的技術問題。對此，本專利技術的技術方案為：一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法，包含以下步驟：步驟S1：外植體挑選，挑選生長健康的大田甘蔗植株尾梢為外植體；步驟S2：前處理，將甘蔗尾梢表面消毒，剝去外層葉鞘；步驟S3：培養基配置，配置配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L+抗壞血酸5~15mg/L+核黃素10~20mg/L的培養基溶液放入培養瓶，培養瓶內放置濾紙；步驟S4：接種，切取甘蔗莖尖，放入MS培養液內浸泡，取出后接種到步驟S3所述培養瓶內的濾紙上進行培養；步驟S5：培養管理，每天搖動培養瓶一次，使甘蔗莖尖改變在濾紙上了位置。優選的，所述步驟S1中，挑選生長期為4-6個月，健康、無病蟲害的大田甘蔗植株尾梢為外植體。優選的，所述步驟S3中，培養瓶內墊上4層大小為4cm*4cm的濾紙，培養基溶液不淹沒濾紙。優選的，所述步驟S4中，在超凈工作臺上剝去外層的葉鞘，直至露出甘蔗莖尖生長點為止，切取包含1-2個芽原基的甘蔗莖尖，切割點位于生長點下方2-3mm。優選的，所述步驟S4中，將切取的甘蔗莖尖放入MS培養液內浸泡10~30min，取出后接種在培養瓶內的濾紙墊上進行培養。優選的，所述步驟S5中，甘蔗莖尖每星期轉接一次新的培養基。與現有技術相比，本專利技術的有益效果為：1、外植體獲取材料方便，不需要沙床培養，節省時間，莖尖生長活力強，培養易成活。2、在培養基內添加抗壞血酸和核黃素，抗壞血酸具有抗氧化作用，核黃素具有促進發育和細胞再生的作用。因此，此配方具有降低莖尖酚害，促進莖尖生長的作用。3、在液體培養基內放濾紙，相比傳統的固體培養，莖尖可以移動位置，濾紙可以吸附酚害物質，液體可以稀釋莖尖切割產生的酚類物質，有助于降低酚類物質對莖尖的傷害。4、切取的甘蔗莖尖先浸泡后接種，這樣可以清洗莖尖被切割所破壞的細胞質液，同時使表面細胞吸附營養，有助于減少酚害物質的產生以及莖尖的生長。5、這個方法相比傳統的固體培養相比，莖尖成活率提高40-55%，培養周期縮短20-30天。具體實施方式下面對本專利技術的較優的實施例作進一步的詳細說明。實施例1（1）外植體的挑選：挑選生長期為4個月的健康、生長旺盛、無病蟲害的甘蔗植株尾梢作為外植體。（2）前處理：將甘蔗尾梢表面使用75%的酒精消毒，剝去外層葉鞘。（3）培養基的配置：培養基配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+抗壞血酸5mg/L+核黃素10mg/L+白糖30g/L；先按照配方量取各個成分的母液，稱量白糖，將其混合溶解在總體積1/3的蒸餾水內，加入白糖，充分攪拌溶解后加入蒸餾水定容至所需的體積；然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調節pH值至5.8；在每個培養瓶內放入一張折成4層，大小為4cm*4cm的濾紙；用移液器量取10ml配好的培養液分裝到各個培養瓶內；最后在1.1kg/cm2壓力下滅菌30分鐘，出鍋冷卻后即為莖尖培養基。（4）莖尖接種：在超凈工作臺上將甘蔗尾梢一層層地剝去外部葉鞘，直至露出生長點，切取生長點下2-3mm的位置，放入經過滅菌的MS培養液內浸泡10分鐘；撈出后接種到莖尖培養基的濾紙墊上進行培養。（5）培養管理：每天搖動培養瓶一次，使莖尖改變在濾紙上了位置。每星期轉接一次新的培養基，直至莖尖長出新的側芽為止。本實施例所述培養方法中，莖尖成活率為60%，培養周期為55天。實施例2（1）外植體的挑選：挑選生長期為5個月的甘蔗健康、生長旺盛、無病蟲害的植株尾梢作為外植體。（2）前處理：將甘蔗尾梢表面使用75%的酒精消毒，剝去外層葉鞘。（3）培養基的配置：培養基配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+抗壞血酸10mg/L+核黃素15mg/L+30g/L白糖；先按照配方量取各個成分的母液，稱量白糖，將其混合溶解在總體積1/3的蒸餾水內，加入白糖，充分攪拌溶解后加入蒸餾水定容至所需的體積；然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調節pH值至5.8；在每個培養瓶內放入一張折成4層，大小為4cm*4cm的濾紙；用移液器量取10ml配好的培養液分裝到各個培養瓶內；最后在1.1kg/cm2壓力下滅菌30分鐘，出鍋冷卻后即為莖尖培養基。（4）莖尖接種：在超凈工作臺上將甘蔗尾梢一層層地剝去外部葉鞘，直至露出生長點，切取生長點下2-3mm的位置，放入經過滅菌的MS培養液內浸泡20分鐘；撈出后接種到莖尖培養基的濾紙墊上進行培養。（5）培養管理：每天搖動培養瓶一次，使莖尖改變在濾紙上了位置。每星期轉接一次新的培養基，直至莖尖長出新的側芽為止。本實施例所述培養方法中，莖尖成活率為75%，培養周期為40天。實施例3（1）外植體的挑選：挑選生長期為6個月的甘蔗健康、生長旺盛、無病蟲害的植株尾梢作為外植體。（2）前處理：將甘蔗尾梢表面使用75%的酒精消毒，剝去外層葉鞘。（3）培養基的配置：培養基配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+抗壞血酸15mg/L+核黃素20mg/L+30g/L白糖；先按照配方量取各個成分的母液，稱量白糖，將其混合溶解在總體積1/3的蒸餾水內，加入白糖，充分攪拌溶解后加入蒸餾水定容至所需的體積；然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調節pH值至5.8；在每個培養瓶內放入一張折成4層，大小為4cm*4cm的濾紙；用移液器量取10ml配好的培養液分裝到各個培養瓶內；最后在1.1kg/cm2壓力下滅菌30分鐘，出鍋冷卻后即為莖尖培養基。（4）莖尖接種：在超凈工作臺上將甘蔗尾梢一層層地剝去外部葉鞘，直至露出生長點，切取生長點下2-3mm的位置，放入經過滅菌的MS培養液內浸泡30分鐘；撈出后接種到莖尖培養基的濾紙墊上進行培養。（5）培養管理：每天搖動培養瓶一次，使莖尖改變在濾紙上了位置。每星期轉接一次新的培養基，直至莖尖長出新的側芽為止。本實施例所述培養方法中，莖尖成活率為65%，培養周期為50天。由實施例1～3可知，本專利技術所述的培養方法方法可使甘蔗莖尖培養成活率達到60-75%，培養周期為40-55天。對比例（1）外植體的挑選和準本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法，其特征在于，包含以下步驟：步驟S1：外植體挑選，挑選生長健康的大田甘蔗植株尾梢為外植體；步驟S2：前處理，將甘蔗尾梢表面消毒，剝去外層葉鞘；步驟S3：培養基配置，配置配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L+抗壞血酸5~15mg/L?+核黃素10~20mg/L的培養基溶液放入培養瓶，培養瓶內放置濾紙；步驟S4：接種，切取甘蔗莖尖，放入MS培養液內浸泡，取出后接種到步驟S3所述培養瓶內的濾紙上進行培養；步驟S5：培養管理，每天搖動培養瓶一次，使甘蔗莖尖改變在濾紙上的位置。

【技術特征摘要】
1.一種提高甘蔗莖尖培養成活率的方法，其特征在于，包含以下步驟：步驟S1：外植體挑選，挑選生長健康的大田甘蔗植株尾梢為外植體；步驟S2：前處理，將甘蔗尾梢表面消毒，剝去外層葉鞘；步驟S3：培養基配置，配置配方為MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L+抗壞血酸5~15mg/L+核黃素10~20mg/L的培養基溶液放入培養瓶，培養瓶內放置濾紙；步驟S4：接種，切取甘蔗莖尖，放入MS培養液內浸泡，取出后接種到步驟S3所述培養瓶內的濾紙上進行培養；步驟S5：培養管理，每天搖動培養瓶一次，使甘蔗莖尖改變在濾紙上的位置。2.根據權利要求1所述的提高甘蔗莖尖培養成活率的方法，其特征在于：所述步驟S1中，挑選生長期為4-6個月，健康、無病蟲害的大田...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉麗敏，黃永才，余坤興，劉俊仙，劉紅堅，李松，何為中，翁夢苓，盧曼曼，何毅波，劉欣，游建華，張偉珍，
申請(專利權)人：廣西壯族自治區農業科學院甘蔗研究所，
類型：發明
國別省市：廣西,45