青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用制造技術

本發明專利技術提供了青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用。本發明專利技術通過實驗表明，本發明專利技術的青藤堿對人源性膠質瘤U87MG和SF767細胞株具有抑制作用，并隨劑量和時間的遞增而提高。并且，本發明專利技術的青藤堿能夠誘導自噬體的增加，能夠增加自噬囊泡的數量，促進人膠質瘤細胞LC3B?Ⅱ的表達增加，能夠誘導人膠質瘤細胞自噬性死亡，能夠抑制U87MG細胞異種移植瘤生長。本發明專利技術的青藤堿是一種很有潛力的新型、有效的抗膠質瘤新藥，可用于制備治療人腦部腫瘤藥物，為人腦部腫瘤的內科治療開辟一條新途徑，也拓寬了青藤堿的醫藥應用。

Application of sinomenine in preparing medicine for treating human brain glioma

The present invention provides the application of sinomenine in preparing medicine for treating human brain glioma. The experiment shows that the sinomenine has inhibitory effect on human glioblastoma U87MG and SF767 cell lines, and increases with the increase of dose and time. Moreover, the increase of sinomenine can induce autophagy, can increase the number of autophagic vesicles, promote the expression of human glioma cells LC3B II, can induce autophagy in tumor cells of human glioma death, can inhibit the growth of U87MG cell xenograft tumor. The invention of sinomenine is a new and promising effective anti glioma drugs, can be used for the treatment of brain cancer drugs, open up a new way for the medical treatment of brain tumors, but also broaden the medical application of sinomenine.

【技術實現步驟摘要】
青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用
本專利技術是關于一種青藤堿在醫藥領域的新用途，更具體地說，是關于一種鹽酸青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的用途。
技術介紹
顱內腫瘤中以膠質瘤最常見，膠質瘤約占所有顱內腫瘤的45％～50％，此類腫瘤以惡性者多見，而且由于腫瘤的侵潤性生長，利用傳統的手術治療難以徹底切除，是目前嚴重威脅人類健康的一大疾病。近年來惡性腫瘤的治療有了明顯的進步，抗腫瘤藥物研究經過40余年的努力已發展到一個新的階段，其研究領域已遠遠超過傳統的以核酸及其組成成分為靶點的細胞毒類藥物。為尋找有新的作用機理及獨特化學結構的細胞毒類藥物，人們一直在做著努力，最近人們認為治療惡性腫瘤的藥物應該是通過刺激腫瘤細胞凋亡來使其死亡，而細胞毒性自噬途徑同樣引起了人們的關注。青藤堿是植物藥青風藤中所提純的生物堿，具有抗炎、鎮痛及免疫調控的作用，其片劑和針劑已經成為國家正式批準使用的藥物。現已經用于風濕性關節炎的治療，并取得了滿意效果。近年來，隨著對青藤堿研究的深入，發現了一些新的藥理作用及作用機制，尤其是抗腫瘤方面的作用越來越受到國內外學者的重視。關于青藤堿在抗膠質瘤方面的作用目前僅見對鼠源性膠質瘤C6細胞株抑制作用的報道，例如CN101002773A以鼠源性膠質瘤C6細胞株為靶細胞，發現經堿溶并重結晶后得到的鹽酸青藤堿單晶對于鼠源性膠質瘤C6細胞株具有抑制作用，抑制率隨劑量的增加而提高。然而，C6細胞是經硝基甲脲誘發Wistar種系大鼠獲得的腦膠質瘤細胞，與人腦膠質瘤存在種屬差異。關于藥物的抗腫瘤機制比較復雜，通常與腫瘤細胞的種類有關，甚至在不同的腫瘤細胞中的作用機制也有很大的不同，對不同腫瘤細胞的影響作用不同。例如，Curicumin能夠抑制C6膠質瘤細胞增殖，但卻不能明顯抑制缺乏野生型PTEN基因的U87MG膠質瘤細胞的分裂增殖。目前，并未見關于青藤堿在抗人腦膠質瘤方面的報道。
技術實現思路
本專利技術的一個目的在于提供一種青藤堿在醫藥領域的新應用，特別是鹽酸青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用。本專利技術中所述的青藤堿包括其鹽的形式，例如鹽酸青藤堿。本案專利技術人在研究中意外地發現，市售普通的青藤堿(無需經堿溶并重結晶處理)對人源性膠質瘤U87MG和SF767細胞株具有抑制作用，并隨劑量和時間的遞增而提高。并且，本專利技術的青藤堿能夠誘導自噬體的增加，能夠增加自噬囊泡的數量，促進人膠質瘤細胞LC3B-Ⅱ的表達增加，能夠誘導人膠質瘤細胞自噬性死亡，能夠抑制U87MG細胞異種移植瘤生長。從而，本專利技術提供了青藤堿的新應用。具體而言，本專利技術提供了青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用。本專利技術還提供了所述的青藤堿在制備對人源性膠質瘤U87MG和SF767細胞株具有抑制作用的抑制劑中的應用。根據本專利技術的具體實施方案，所述抑制作用隨青藤堿劑量和作用時間的增加而提高。本專利技術還提供了所述的青藤堿在制備誘導自噬體的增加的制劑中的應用。本專利技術還提供了所述的青藤堿在制備增加自噬囊泡的數量的制劑中的應用。本專利技術還提供了所述的青藤堿在制備促進人膠質瘤細胞LC3B-Ⅱ的表達的制劑中的應用。本專利技術還提供了所述的青藤堿在制備誘導人膠質瘤細胞自噬性死亡的制劑中的應用。本專利技術還提供了所述的青藤堿在制備抑制U87MG細胞異種移植瘤生長的制劑中的應用。綜上所述，本專利技術所述的青藤堿是一種很有潛力的新型、有效的抗膠質瘤新藥，可用于制備治療人腦部腫瘤藥物，為人腦部腫瘤的內科治療開辟一條新途徑，也拓寬了青藤堿的醫藥應用。附圖說明圖1A顯示本專利技術的鹽酸青藤堿對人源性膠質瘤U87MG細胞株的抑制作用。圖1B顯示本專利技術的鹽酸青藤堿對人源性膠質瘤SF767細胞株的抑制作用。圖2顯示本專利技術的鹽酸青藤堿誘導自噬體的實驗中的透射電鏡觀察結果。圖3顯示本專利技術的鹽酸青藤堿對自噬囊泡影響實驗中的MDC染色觀察結果。圖4顯示本專利技術的鹽酸青藤堿影響人膠質瘤細胞LC3B-Ⅱ表達水平的實驗結果。圖5A顯示本專利技術的鹽酸青藤堿誘導人源性膠質瘤U87MG細胞株的自噬性死亡實驗結果。圖5B顯示本專利技術的鹽酸青藤堿誘導人源性膠質瘤SF767細胞株的自噬性死亡實驗結果。圖6A～圖6D顯示本專利技術的鹽酸青藤堿對U87MG細胞異種移植瘤裸鼠體重及腫瘤組織重量及體積的影響。具體實施方式以下通過具體實施例詳細說明本專利技術的實施過程和產生的有益效果，旨在幫助閱讀者更好地理解本專利技術的實質和特點，不作為對本案可實施范圍的限定。各實施例中未詳細注明的實驗方法，按照所屬領域的常規操作進行。各實施例中所用的本專利技術的鹽酸青藤堿為市售普通產品，商購品即直接用于本專利技術，未經堿溶、重結晶等處理。實施例1、以人源性膠質瘤U87MG和SF767細胞株為靶細胞進行鹽酸青藤堿對于人膠質瘤細胞株的抑制作用的實驗實驗方法為：將由中國醫學科學院細胞資源中心提供的人源膠質瘤細胞株U87MG和SF767用胰酶消化后，懸浮于含10％胎牛血清的培養液中，利用玻璃滴管輕輕吹打成細胞懸液，顯微鏡下用細胞計數板計數活細胞。將腫瘤細胞接種于無菌的96孔培養板，每孔加腫瘤細胞懸液100μl。將細胞置于37℃、體積百分比為5％的CO2培養箱中24小時后，棄去上清液，然后加入不同濃度的鹽酸青藤堿溶液。在37℃、體積百分比5％的CO2培養箱中分別孵育24小時、48小時、72小時，轉移上清液，在每孔中加入10微升CCK8，同等條件孵育1小時，在酶標儀上以波長為450nm，測定各孔吸光度，計算細胞生存率。實驗結果參見圖1A與圖1B。結果表明，不同濃度的本專利技術的鹽酸青藤堿對人源性膠質瘤U87MG和SF767細胞株具有不同程度的抑制。實施例2、鹽酸青藤堿能夠誘導自噬體的增加實驗方法：細胞經處理后，2000轉/分，離心10min，去除上層培養基，并用冷的PBS洗滌3次，離心后保留下層細胞，輕輕的加入2.5％的戊二醛固定液，固定24小時，2％鋨酸固定2小時，梯度脫水：50％、70％、90％、100％的丙酮酸脫水，每級10分鐘，60℃包埋24小時，使細胞成塊，切片，透射電鏡觀察。觀察結果請參見圖2所示，與其中的圖片A對照組比較，經0.5mM鹽酸青藤堿處理后人膠質瘤U87MG和SF767細胞胞漿內均觀察到多個雙層膜性結構，即自噬體，其中圖片C為圖片B的局部放大。結果表明，鹽酸青藤堿能夠誘導自噬體的增加。實施例3、鹽酸青藤堿能夠增加自噬囊泡的數量實驗方法：單丹磺酰戊二胺(MDC)染色，其能夠選擇性地聚集于自噬體，溶酶體和自噬溶酶體等酸性囊泡中，當MDC在激發光下，呈藍綠色或黃綠色顆粒狀結構，可用熒光顯微鏡進行觀察，是檢測自噬的一種常用方法。將細胞接種于共聚焦單孔培養皿內，5×104個細胞/孔，3復孔，加入100μmol/LMDC工作液，重新置于37度溫箱內孵育30min，PBS洗細胞兩遍，加入4％多聚甲醛1ml固定15min，PBS清洗細胞2次，上機檢測。實驗結果請參見圖3所示。結果顯示，對照組細胞中少見酸性囊泡，而0.5mM鹽酸青藤堿處理后的細胞中酸性囊泡數量顯著提高，與自噬抑制劑3MA共同作用后則明顯減少。表明，鹽酸青藤堿能夠增加人膠質瘤U87MG和SF767細胞中酸性囊泡的數量，且其作用可被自噬抑制劑部分阻斷。實施例4、鹽酸青藤堿能夠促進人膠質瘤細胞LC本文檔來自技高網...

【技術保護點】
青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用。

【技術特征摘要】
1.青藤堿在制備用于治療人腦膠質瘤的藥物中的應用。2.青藤堿在制備對人源性膠質瘤U87MG和/或SF767細胞株具有抑制作用的抑制劑中的應用。3.青藤堿在制備誘導自噬體的增加的制劑中的應用。4.青藤堿在制備增加自噬囊泡的數量的制劑中的應用。5.青藤堿在制備促進人膠質瘤細胞LC3B-Ⅱ...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王丹巧，李連達，焦玥，姜宇懋，王志國，李濤，
申請(專利權)人：中國中醫科學院醫學實驗中心，
類型：發明
國別省市：北京,11