一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒及其制備方法和用途。本發(fā)明專利技術(shù)提供一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物采用膠體金標(biāo)記。本發(fā)明專利技術(shù)所提供的腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒兼具靈敏性和特異性，具有操作快速簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒及其制備方法和用途。
技術(shù)介紹
腦膜炎奈瑟菌簡(jiǎn)稱腦膜炎球菌，是引起流行性腦脊髓膜炎的病原體。人類是其唯一的宿主，可定植在人類的鼻咽部粘膜上,主要通過飛沫直接從空氣中通過呼吸道傳播所引起，在冬末春初季節(jié)最為流行。流行性腦脊髓膜炎主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、嘔吐、皮膚粘膜瘀點(diǎn)、瘀斑及腦膜刺激征。重者可有敗血癥性休克和腦膜腦炎。腦脊液可呈化膿性改變。無論是在發(fā)展中國家或是發(fā)達(dá)國家均可以引起較高的流腦發(fā)病率和死亡率。流行性腦脊髓膜炎，尤其是暴發(fā)型流腦病情進(jìn)展迅速，主要死因?yàn)閿⊙Y導(dǎo)致的休克、DIC和腦水腫腦疝。因此，及早的診斷、嚴(yán)密的病情觀察是本病治療的基礎(chǔ)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本專利技術(shù)的目的在于提供一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒及其制備方法和用途，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本專利技術(shù)采用以下技術(shù)方案：本專利技術(shù)的第一方面，提供一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物采用膠體金標(biāo)記。優(yōu)選的，所述底板為PVC底板。優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測(cè)線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣端較遠(yuǎn)一側(cè)。優(yōu)選的，所述檢測(cè)線上包被有腦膜炎重組抗原。優(yōu)選的，質(zhì)控線上包被羊抗兔IgG多克隆抗體。優(yōu)選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為50-100mM。優(yōu)選的，本專利技術(shù)所述的金標(biāo)墊還經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為10-40mM。優(yōu)選的，所述緩沖液還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10～50g/L。優(yōu)選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN20、S-20TWEEN80、S-13TRITONX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRITONX305中的任意一種或多種的組合，所述表面活性劑的濃度為20～40g/L。優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本專利技術(shù)所述的金標(biāo)墊在預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液包括下列組分：果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鈉和甘氨酸，且果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鉀和甘氨酸的總濃度為4.5－6.5g/L，緩沖液的pH值為7.3－7.5。優(yōu)選的，各組分在緩沖液中的濃度為：果糖1.0-2.0g/L；氫氧化鋁0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化鈉0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。所述預(yù)處理緩沖液的溶劑為水。所述預(yù)處理的具體步驟為：將金標(biāo)墊在預(yù)處理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述預(yù)處理緩沖液可使用本領(lǐng)域各種常用的pH調(diào)節(jié)劑進(jìn)行pH值的調(diào)節(jié)。優(yōu)選的，所述試劑盒還包括卡殼，所述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設(shè)有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于所述試紙卡卡槽內(nèi)，所述上蓋設(shè)有測(cè)試窗和加樣孔，所述測(cè)試窗的位置與所述檢測(cè)線和質(zhì)控線的位置相配合，所述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。更優(yōu)選的，所述卡殼為塑料卡殼。優(yōu)選的，所述檢測(cè)試劑盒用于定性檢測(cè)人血清/血漿中腦膜炎菌。本專利技術(shù)第二方面提供所述腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括如下步驟：1)用膠體金標(biāo)記的腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物溶液噴涂金標(biāo)墊，制得包含腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物的金標(biāo)墊；2)在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線和質(zhì)控線上分別噴涂腦膜炎重組抗原及羊抗兔IgG多克隆抗體，制得包被后的硝酸纖維素膜；3)將樣品墊、步驟1)制備金標(biāo)墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在底板上，切裁制得檢測(cè)試紙卡；最后將檢測(cè)試紙卡裝入卡殼制得檢測(cè)試劑盒。優(yōu)選的，本專利技術(shù)所述的金標(biāo)墊還經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為10-40mM。優(yōu)選的，所述緩沖液還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10～50g/L。優(yōu)選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN20、S-20TWEEN80、S-13TRITONX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRITONX305中的任意一種或多種的組合，所述表面活性劑的濃度為20～40g/L。優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本專利技術(shù)所述的金標(biāo)墊在預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液包括下列組分：果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鈉和甘氨酸，且果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鉀和甘氨酸的總濃度為4.5－6.5g/L，緩沖液的pH值為7.3－7.5。優(yōu)選的，各組分在緩沖液中的濃度為：果糖1.0-2.0g/L；氫氧化鋁0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化鈉0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。所述預(yù)處理緩沖液的溶劑為水。所述預(yù)處理的具體步驟為：將金標(biāo)墊在預(yù)處理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述預(yù)處理緩沖液可使用本領(lǐng)域各種常用的pH調(diào)節(jié)劑進(jìn)行pH值的調(diào)節(jié)。本專利技術(shù)第三方面提供所述腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒在腦膜炎菌檢測(cè)領(lǐng)域的用途。本專利技術(shù)的有益效果為：本專利技術(shù)所提供的腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒兼具高靈敏性和高特異性，能夠快速檢測(cè)腦膜炎菌。此外，所述檢測(cè)試劑盒具有操作快速簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式以下通過特定的具體實(shí)例說明本專利技術(shù)的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本專利技術(shù)的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本專利技術(shù)還可以通過另外不同的具體實(shí)施方式加以實(shí)施或應(yīng)用，本說明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒有背離本專利技術(shù)的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。在進(jìn)一步描述本專利技術(shù)具體實(shí)施方式之前，應(yīng)理解，本專利技術(shù)的保護(hù)范圍不局限于下述特定的具體實(shí)施方案；還應(yīng)當(dāng)理解，本專利技術(shù)實(shí)施例中使用的術(shù)語是為了描述特定的具體實(shí)施方案，而不是為了限制本專利技術(shù)的保護(hù)范圍；在本專利技術(shù)說明書和權(quán)利要求書中，除非文中另外明確指出，單數(shù)形式“一個(gè)”、“一”和“這個(gè)”包括復(fù)數(shù)形式。當(dāng)實(shí)施例給出數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)理解，除非本專利技術(shù)另有說明，每個(gè)數(shù)值范圍的兩個(gè)端點(diǎn)以及兩個(gè)端點(diǎn)之間任何一個(gè)數(shù)值均可選用。除非另外定義，本專利技術(shù)中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本
技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實(shí)施例中使用的具體方法、設(shè)備、材料外，根據(jù)本
的技術(shù)人員對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本專利技術(shù)的記載，還可以使用與本專利技術(shù)實(shí)施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物采用膠體金標(biāo)記。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種腦膜炎菌膠體金檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的腦膜炎重組抗原、兔IgG多克隆抗體復(fù)合物采用膠體金標(biāo)記。2.如權(quán)利要求1所述的膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上，檢測(cè)線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣端較遠(yuǎn)一側(cè)。3.如權(quán)利要求1所述的膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)線上包被有腦膜炎重組抗原。4.如權(quán)利要求1所述的膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，質(zhì)控線上包被羊抗兔IgG多克隆抗體。5.如權(quán)利要求1所述的膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為50～100mM。6.如權(quán)利要求1所述的膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述金標(biāo)墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為10～40mM。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的膠...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張國華，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海凱創(chuàng)生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31