本發(fā)明專利技術(shù)提供一種ICAM?1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，由：辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N,N’?二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM?1單克隆抗體所組成。本發(fā)明專利技術(shù)以辛伐他汀為藥物，以水性溶劑擴(kuò)散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，通過對其表面進(jìn)行ICAM?1單克隆抗體的修飾，構(gòu)建特異性靶向ALI肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的ICAM?1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。本發(fā)明專利技術(shù)的脂質(zhì)載體可靶向ALI肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、延緩辛伐他汀的釋放，提高肺部病灶的藥物濃集量從而提高藥物治療效率，減少辛伐他汀的肝毒性、肌毒性。從逆轉(zhuǎn)ALI肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的發(fā)病機(jī)制出發(fā)，有效改善ALI病癥。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于藥物新型給藥系統(tǒng)的制備，具體為對血管內(nèi)皮細(xì)胞的ICAM-1受體具有特異性結(jié)合能力的ICAM-1單克隆抗體修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體及其制備方法，以及其在急性肺損傷的治療藥物制備中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是一種常見臨床綜合癥，其惡化階段即為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)，具有較高的發(fā)病率及死亡率，迄今為止嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。ALI的病理表征體現(xiàn)為大量彌漫性炎癥細(xì)胞肺內(nèi)浸潤、肺泡和肺實質(zhì)內(nèi)高度水腫、肺泡透明膜形成以及后期的肺間質(zhì)纖維化。在過去的十多年里，對于ALI的改善仍主要基于幾種支持治療技術(shù)，如小潮氣量通氣、給予PEEP、肺液體管理、抗菌療法等。在此期間一系列的藥物療法也被應(yīng)用于ALI的改善，如血管舒張劑(一氧化氮、前列環(huán)素等)的吸入治療、腎上腺糖皮質(zhì)激素、酮康唑、抗氧化劑等，但迄今尚無可觀的臨床治療效果。這種令人不甚滿意的藥物治療結(jié)果，一定程度上可歸因于誘發(fā)ALI病因的多樣異質(zhì)性以及在ALI病發(fā)過程中肺泡持續(xù)的病理生理改變。因此從ALI的復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制出發(fā)，解決ALI發(fā)病的根本原因，從而探求一個新的ALI治療途徑已得到越來越多的關(guān)注。相對于諸如過度的炎癥級聯(lián)反應(yīng)、氧化應(yīng)激失衡、凝血纖溶異常等發(fā)病機(jī)理，肺血管損傷被廣泛視為ALI病發(fā)最起初的主導(dǎo)原因。有研究報道由ALI引起的血管內(nèi)皮改變在ALI發(fā)病中起著重要的調(diào)控作用。而中性粒細(xì)胞依賴途徑被廣泛視為肺內(nèi)皮損傷的主要途徑。由于固有免疫而積累于肺微血管系統(tǒng)的中性粒細(xì)胞伴隨其相應(yīng)的激活，通過脫顆粒及釋放前炎性因子、活性氧物質(zhì)、蛋白酶以及促凝血分子等導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷、肺血管通透性增強(qiáng)，進(jìn)而誘發(fā)肺水腫發(fā)生。肺內(nèi)皮功能紊亂會進(jìn)一步導(dǎo)致肺內(nèi)炎性細(xì)胞粘附及遷移增強(qiáng)、炎癥因子及促凝抗凝調(diào)節(jié)失衡的惡性循環(huán)。此外，基于肺血管內(nèi)皮細(xì)胞作為調(diào)節(jié)肺部及全身血管平衡的主要代謝器官，所以從逆轉(zhuǎn)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷入手，尋找一種有效的治療ALI的手段具有十分重要的研究價值與臨床意義。他汀類藥物作為傳統(tǒng)性的用于降低血脂的羥甲基戊二酸輔酶A還原酶抑制劑，現(xiàn)階段在ALI保護(hù)的研究中已得到越來越多的應(yīng)用。這基于其所具有的多向的藥物特性，包括保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞骨架、降低超氧化物的產(chǎn)生、促使NO合成、上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥衰減物質(zhì)integrin-β4以及與細(xì)胞間緊密連接相關(guān)的claudin-5。他汀類藥物對ALI保護(hù)的臨床前研究同樣取得了顯著進(jìn)展，包括對氣管內(nèi)滴注LPS、機(jī)械通氣、輻射等方式引發(fā)的ALI的改善，以及對其通常的初始階段肺炎病癥同樣起到了積極的藥物療效。盡管迄今為止他汀類藥物尚未在臨床上應(yīng)用于ALI的治療，然而近年來的一些對人體ALI的改善研究取得了積極的成果。有研究顯示，預(yù)先進(jìn)行他汀類藥物預(yù)防或治療的患者，可顯著降低ICU患者住院前4天膿毒癥及ALI/ARDS的發(fā)生率，充分證明了他汀類藥物用于預(yù)防或治療急性肺損傷的潛在臨床價值，從而使他汀類藥物有可能成為通過逆轉(zhuǎn)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷過程而治療ALI的新一代藥物。然而他汀類在真正成為ALI的治療藥物之前尚需克服下列問題：①療效不確定，2010年在愛爾蘭進(jìn)行的一項隨機(jī)對照研究顯示：80mg辛伐他汀用于治療ALI機(jī)械通氣患者，盡管第14天治療組患者具有更好的氧合指數(shù)和通氣參數(shù)，但與空白組相比無顯著性差異；②不良反應(yīng)多，主要表現(xiàn)為肌肉溶解以及由于氧化應(yīng)激及線粒體功能紊亂導(dǎo)致的肝毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性等。基于脂溶性他汀藥物可以通過被動擴(kuò)散的方式被細(xì)胞攝取從而更易于作用于細(xì)胞發(fā)揮藥效，故本專利技術(shù)選用他汀類藥物中親脂性最強(qiáng)的辛伐他汀為研究藥物。然而，同樣由于較高的組織滲透性，相對于水溶性他汀而言，脂溶性他汀具有更高的藥物副作用發(fā)生率。為克服他汀類藥物用于治療ALI的上述不足，本專利將他汀類藥物包裹于納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體中，通過納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體將藥物靶向輸送到ALI血管內(nèi)皮細(xì)胞，增強(qiáng)病灶部位的藥物積累，顯著提高藥物治療效率。在從ALI的發(fā)病機(jī)制出發(fā)逆轉(zhuǎn)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的同時，減少他汀類藥物的不良反應(yīng)。研究報道ALI可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生各類生物標(biāo)記物，包括von Willebrand因子、Ang-2以及細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)。ICAM-1作為表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，其表達(dá)水平與炎癥強(qiáng)度密切相關(guān)。國外多位學(xué)者將其應(yīng)用于納米載體的靶向設(shè)計中，他們的研究成果證實：通過對納米載體表面進(jìn)行ICAM-1單克隆抗體的修飾，利用ICAM-1單抗與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面ICAM-1受體特異性結(jié)合的原理，可實現(xiàn)納米載體對血管內(nèi)皮細(xì)胞的靶向輸送。本專利技術(shù)選用納米給藥系統(tǒng)中的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體作為藥物遞送系統(tǒng)。納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體作為一種新型的給藥系統(tǒng)，具有下列給藥特性：①良好的生物相容性；②藥物緩、控釋釋放；③較低的生物毒性；④易于制備等等。基于納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的上述特性，通過對他汀類藥物的高效包載，并對納米載體表面進(jìn)行ICAM-1單抗修飾，使他汀類藥物靶向輸送到ALI血管內(nèi)皮細(xì)胞的設(shè)想成為現(xiàn)實。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的一個目的是提供一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。該ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體主要由：辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N,N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM-1單克隆抗體所組成。處方成分質(zhì)量百分比為4.98％-14.95％辛伐他汀、83.72％-93.68％的脂質(zhì)材料、0％-9.97％的聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、1.00％的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、0.22％N,N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯和0.11％的ICAM-1單克隆抗體。所述的脂質(zhì)材料選用單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、油酸、中鏈脂肪酸甘油酯中的一種或兩種。本專利技術(shù)的第二個目的是提供ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備方法，具體通過以下方案實現(xiàn)：1.合成單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯稱取119.8mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽,24.0mg N-羥基琥珀酰亞胺,35.5mg硬脂酸溶于3ml無水二甲基亞砜,400rpm 60℃條件下反應(yīng)30min，將反應(yīng)液緩慢滴加至2ml無水二甲基亞砜溶解的250mg雙氨基終端聚乙二醇溶液中，室溫下400rpm攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至透析袋中(MWCO：7kDa)，純凈水透析48h，除去水溶性副產(chǎn)物，冷凍干燥即得單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯。2.ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備溶劑擴(kuò)散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法：精密稱取5-15mg的辛伐他汀、84-94mg的脂質(zhì)材料、0-10mg的聚乙二醇硬脂酸酯(MW 2000)以及1mg合成的氨基終端的聚乙二醇單硬脂酸酯，共100mg，加入1ml乙醇溶解作為有機(jī)相，水浴60℃加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機(jī)相依次快速注入60℃水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
一種ICAM?1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，所述脂質(zhì)載體由辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯(MW?2000)、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N,N’?二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM?1單克隆抗體組成，質(zhì)量百分比為4.98％?14.95％辛伐他汀、83.72％?93.68％的脂質(zhì)材料、0％?9.97％的聚乙二醇單硬脂酸酯(MW?2000)、1.00％的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、0.22％的N,N’?二琥珀酰亞胺基碳酸酯和0.11％的ICAM?1單克隆抗體。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，所述脂質(zhì)載體由辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N,N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM-1單克隆抗體組成，質(zhì)量百分比為4.98％-14.95％辛伐他汀、83.72％-93.68％的脂質(zhì)材料、0％-9.97％的聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、1.00％的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、0.22％的N,N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯和0.11％的ICAM-1單克隆抗體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，所述的脂質(zhì)材料選用單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、油酸、中鏈脂肪酸甘油酯中的一種或兩種。3.權(quán)利要求1所述的一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)：(1)合成單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯稱取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、硬脂酸溶于無水二甲基亞砜，400rpm 60℃條件下反應(yīng)30min，將反應(yīng)液緩慢滴加至無水二甲基亞砜溶解的雙氨基終端聚乙二醇溶液中，室溫下400rpm攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至透析袋中，純凈水透析48h，除...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：姜賽平，李淑娟，杜永忠，
申請(專利權(quán))人：浙江大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江;33
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