攜帶PD-L1阻斷劑的嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞制造技術

本發明專利技術涉及攜帶PD-L1阻斷劑的嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞。本發明專利技術還提供了一種利用嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞作為載體來分泌表達程序性死亡配體1(PD-L1)的阻斷劑的方法，以提高嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞的抗腫瘤作用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于免疫治療領域，更具體地，本專利技術設及攜帶PD-L1阻斷劑的嵌合抗原 受體修飾的免疫效應細胞。
技術介紹
免疫效應細胞（如T淋己細胞）在腫瘤免疫應答中的作用日益受到重視。目前， 基于T淋己細胞的過繼性免疫治療在部分腫瘤中取得了一定的效果，并且該種免疫治療方 法可W克服抗體治療的缺陷，但在大多數腫瘤的療效仍不能令人滿意。近年來，根據CTL對 祀細胞的識別特異性依賴于T淋己細胞受體燈CellReceptor,TCR)的發現，將針對腫瘤 細胞相關抗原的抗體的scFv與T淋己細胞受體的CD3ζ或FcεRI丫等胞內信號激活基序 融合成嵌合抗原受體煙limericantigenreceiptor,CAR),并將其通過如慢病毒感染等方 式基因修飾在T淋己細胞表面。運種CART淋己細胞能夠W主要組織相容性復合物（Major HistocompatibilityComplex,MHC)非限制性方式選擇性地將T淋己細胞定向到腫瘤細胞 并特異性地殺傷腫瘤。 嵌合抗原受體包括胞外結合區，跨膜區和胞內信號區。通常胞外區包含能夠識別 腫瘤相關抗原的scFv，跨膜區采用CD8，CD28等分子的跨膜區，胞內信號區采用免疫受體酪 氨酸活化基序（ITAM)CD3ζ或化εRI丫及共刺激信號分子CD28、CD27、CD137、CD134等的 胞內信號區。 胞內信號區僅包含ΙΤΑΜ的為第一代CARΤ淋己細胞，其中嵌合抗原受體各部分按 如下形式連接：scFv-TM-ITAM。該種CART可W激發抗腫瘤的細胞毒性效應，但是細胞因子 分泌比較少，并且在體內不能激發持久的抗腫瘤效應。 隨后發展的第二代CART淋己細胞加入了CD28或CD137(又名4-1BB)的胞內 信號區，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：SCFV-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-/ CD137-ITAM。胞內信號區發生的B7/CD28或4-1B化/CD137共刺激作用引起T淋己細胞的 持續增殖，并能夠提高T淋己細胞分泌IL-2和IFN- 丫等細胞因子的水平，同時提高CART 在體內的存活周期和抗腫瘤效果。 近些年發展的第Ξ代CART淋己細胞，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接： scFv-TM-CD28-CD137-ITAM或scFv-TM-CD28-CD134-ITAM，進一步提高了CART在體內的存 活周期和其抗腫瘤效果。 盡管免疫效應細胞在腫瘤免疫治療中具有誘人的前景，但是其在實體瘤中的療效 仍不顯著，免疫效應細胞在腫瘤組織內的存活率較差、活性不高。因此，本領域仍然需要進 行進一步的研究，W期進一步提高免疫效應細胞對于腫瘤免疫治療的療效。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供攜帶PD-L1阻斷劑的嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞。 在本專利技術的第一方面，提供一種嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞，它攜帶或表 達PD-Ll(程序性死亡配體1)阻斷劑度locker)。 在一個優選例中，所述的PD-L1阻斷劑包括（但不限于）：可溶性PD-l(sPD-l); 可溶性PD-1與hIgG4el-Fc的C冊結構域的融合膚； 可溶性PD-1與hIgG4el-Fc的融合膚；或 特異性抗PD-L1抗體。 在另一優選例中，所述的可溶性PD-1包括：信號膚和胞外區；較佳地，所述的信 號膚是如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列編碼而成的；較佳地，所述的胞外區是如SEQID N0:2所示的核巧酸序列編碼而成的。 在另一優選例中，所述的hIgG4el-Fc的C冊結構域是如SEQIDN0:2所示的核巧 酸序列編碼而成的；和/或 所述的hIgG4el-Fc的序列是第288位由Ser突變為Pro的。 在另一優選例中，所述的嵌合抗原受體包括：胞外抗原結合區，跨膜區和胞內信號 區，其中所述胞外抗原結合區是特異性結合腫瘤高表達的抗原的抗體。 在另一優選例中，所述的胞內信號區包括（但不限于）：CD3C，FceRI丫，CD27， CD28,4-1BB(CD137)，CD134,CD40的胞內信號區序列或Myd88,或其組合。 在另一優選例中，所述的跨膜區包括（但不限于）：CD8(如CD8α)跨膜區，CD28 跨膜區。 在另一優選例中，所述的胞外抗原結合區和跨膜區之間，還包括較鏈區；較佳地， 該較鏈區包括：CD8(如CD8α)較鏈區。[002引在另一優選例中，所述的腫瘤高表達的抗原包括（但不限于）：EGFR，GPC3,肥R2，E；pM2,ClaudinlS. 1，ClaudinlS. 2,Claudin6,GD2,lipCAM，mesothelin，CD19,CD20,ASGPR1， EGFRvIII，de4EGFR，CD19,CD33,IL13R，LMPl，PLACl，NY-ESO-1，MAGE4,MUCl，MUC16,LeY， CEA，CAIX，CD123。 在另一優選例中，所述的特異性結合腫瘤高表達的抗原的抗體是：單鏈抗體或結 構域抗體。 在另一優選例中，所述的免疫效應細胞包括：Τ淋己細胞，NK細胞或NKT細胞，Treg 細胞。在本專利技術的另一方面，提供一種核酸構建物，其編碼用于修飾免疫效應細胞的融 合多膚，所述的核酸構建物包括順序連接的：PD-L1阻斷劑編碼序列，胞外抗原結合區編碼 序列，跨膜區和胞內信號區編碼序列；其中所述胞外抗原結合區是特異性結合腫瘤高表達 的抗原的抗體。 在一個優選例中，所述的PD-L1阻斷劑編碼序列和胞外抗原結合區編碼序列之 間，W連接膚編碼序列連接；和/或。 所述的PD-L1阻斷劑編碼序列和胞外抗原結合區編碼序列之間，還包括核糖體跳 躍序列（F2A)。 在另一優選例中，所述的連接膚是（GlyGlyGlyGlySe;r)3。 在本專利技術的另一方面，提供一種表達載體，其包含編碼所述的核酸構建物。 在本專利技術的另一方面，提供一種病毒，所述的病毒包含所述的表達載體。 在本專利技術的另一方面，提供所述的核酸構建物、或包含該核酸構建物的表達載體 或病毒的用途，用于制備祀向腫瘤的嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞。 在一個優選例中，所述的免疫效應細胞是表達PD-1的免疫效應細胞。 在本專利技術的另一方面，提供所述的嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞的用途，用 于制備抑制腫瘤的藥物組合物。 在本專利技術的另一方面，提供一種用于抑制腫瘤的藥物組合物，其包括：所述的嵌合 受體修飾的免疫效應細胞。 在本專利技術的另一方面，提供PD-L1阻斷劑的用途，用于制備嵌合抗原受體修飾的 免疫效應細胞，增加免疫效應細胞的抗腫瘤作用。 在一個優選例中，所述的PD-L1阻斷劑包括（但不限于）：可溶性PD-1;[003引可溶性PD-1與hIgG4el-Fc的C冊結構域的融合膚； 特異性抗PD-L1抗體。[00川在另一優選例中，所述的腫瘤是表達（或高表達）PD-L1的腫瘤。 在本專利技術的另一方面，提供一種制備嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞的方法， 所述的方法包括：將所述的核酸構建物轉入免疫效應細胞中。 本專利技術的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見 的。【附圖說明】圖1、人源可溶性PD-1 (sPD-1)、sPD-1-C冊、sPD-1-Fc融合蛋白示意圖。 圖2、sPD-1-Fc與M27-CAR本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種嵌合抗原受體修飾的免疫效應細胞，其攜帶PD?L1阻斷劑。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李宗海，潘澤雁，石志敏，宋波，王鵬，
申請(專利權)人：科濟生物醫藥上海有限公司，上海市腫瘤研究所，
類型：發明
國別省市：上海;31