本發(fā)明專利技術(shù)提供了CIKs細胞的培養(yǎng)體系，在CIKs細胞培養(yǎng)體系中加入PD-1抑制劑(PD-1IN)，強化了CIKs細胞的擴增數(shù)量和功能，并進一步通過建立DC-CIKs共培養(yǎng)體系，并加入PD-1IN大大增加所培養(yǎng)的CIKs或DC-效應(yīng)細胞的數(shù)量，減少了培養(yǎng)天數(shù)，而且對腫瘤細胞的殺傷活性也較沒有PD-1抑制劑(PD-1IN)強(p<0.01)。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞（巧tokine-in化cedkillers,CIKs)技術(shù)領(lǐng) 域，具體地，涉及一種CIKs細胞的培養(yǎng)體系及DC-CIKs細胞共培養(yǎng)體系及其在制備在腫瘤 的細胞免疫治療中藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
癌癥問題日趨嚴峻，癌癥的預(yù)防與控制面臨巨大挑戰(zhàn)。世界衛(wèi)生組織國際癌癥研 究中必認為，未來癌癥發(fā)病人數(shù)年均將會W3%~5%的速度遞增，預(yù)計2020年全球?qū)⒂?2000萬癌癥新發(fā)病例，死亡病例將達1200萬。從發(fā)病率來看，中低收入國家癌癥發(fā)病率遠 高于發(fā)達國家。目前我國癌癥呈明顯高發(fā)態(tài)勢，城市中癌癥已經(jīng)占到死亡總數(shù)的25%，農(nóng) 村為21%，已出現(xiàn)癌癥鄉(xiāng)和癌癥村。癌癥患者呈年輕化趨勢。據(jù)《2012年中國腫瘤登記年 報》報告，我國腫瘤發(fā)病率和死亡率的概況為：每10萬人有286人患癌，一生中有22%的 概率患癌癥；每10萬人有181人患癌死亡，一生中有13%的概率患癌死亡。男女腫瘤發(fā) 病率之比為1. 3 ;1，腫瘤死亡率之比為1. 65 ;1。腫瘤發(fā)病率隨人群年齡逐漸上升，特別是 50歲W上隨年齡增加而大幅上升，50歲W上占全部發(fā)病的80%W上，每年腫瘤死亡人數(shù)為 140-150 萬。 常規(guī)的腫瘤治療手段，即手術(shù)、放療和化療，對于進展性的或晚期腫瘤仍然束手無 策。許多腫瘤患者最終死于腫瘤的轉(zhuǎn)移和耐藥。中科院曾益新院±領(lǐng)導(dǎo)的團隊發(fā)現(xiàn)放化療 可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，腫瘤細胞轉(zhuǎn)化成腫瘤干細胞（Cancerstemcells,CSCs),即產(chǎn)生 新的腫瘤"種子"，送可能是腫瘤放化療后復(fù)發(fā)的一個重要機制。腫瘤治療的目的是殺傷手 術(shù)不能完全切除的殘留腫瘤，然而腫瘤細胞固有的特性和腫瘤微環(huán)境限制了已經(jīng)成熟的或 正在研究中的治療方案的療效。腫瘤細胞來自于宿主，攜帶有宿主的特性，因此各種副作用 會限制治療窗，難W獲得對腫瘤有效的治療效果。而且，由于腫瘤變異的特性，腫瘤對常規(guī) 放射和化學(xué)治療有明顯的反彈效應(yīng)。例如，當(dāng)細胞毒性化療藥物將大部分腫瘤細胞摧毀后， 少量對送種藥物有抗性的細胞仍有能力成為新的腫瘤灶。更糟的是，送種腫瘤對先前有效 的治療不再產(chǎn)生反應(yīng)，因為腫瘤細胞在細胞毒性藥物的選擇壓力下會產(chǎn)生抗性。即在正常 條件下存活而被選擇出來的郝部分腫瘤細胞導(dǎo)致了腫瘤的復(fù)發(fā)和發(fā)展、轉(zhuǎn)移。因為腫瘤細 胞具有一種重要的遺傳可塑性，所W對任何致死性壓力的抗性，都可W在腫瘤細胞群體中 被進化選擇出來，送類似HIV的變異和細菌的耐藥性。要成功地治療腫瘤，可能需要多種針 對腫瘤細胞不同存活機制的祀向制劑。但是，與HIV比較，腫瘤細胞有更大的基因組，所W 腫瘤細胞演化中可利用的遺傳空間遠遠大于HIV。現(xiàn)在證明有效地殺滅腫瘤是相當(dāng)具有挑 戰(zhàn)性的，因為腫瘤基因組能夠在對藥物的多種選擇壓力的反應(yīng)中進化出存活機制，即使聯(lián) 合使用藥物時也是如此。腫瘤學(xué)領(lǐng)域中盡可能多地鑒別各種存活機制，并找到抑制送些機 制的方法。 通常有兩種解決方法；攻擊腫瘤細胞本身改變成攻擊維持腫瘤生長和存活的環(huán) 境，或者使免疫系統(tǒng)像對付感染郝樣去殺傷腫瘤細胞。前一種策略，就其本質(zhì)而言是被動 的，因為腫瘤細胞是被間接的途徑所殺傷。例如，抗血管生長治療阻斷腫瘤的血液供應(yīng)，從 而間接地殺傷腫瘤。送種治療不容易誘導(dǎo)產(chǎn)生抗性，因為腫瘤環(huán)境中的基質(zhì)細胞在基因上 相對穩(wěn)定。然而，由于其被動型，送種治療仍然因腫瘤細胞的演化而容易復(fù)發(fā)，例如抗血管 生長治療中，血管又會再現(xiàn)，可能因為營養(yǎng)和低氧環(huán)境導(dǎo)致腫瘤干細胞的產(chǎn)生。與此相反， 一種主動的、更具吸引力的策略是，在腫瘤患者中"喚醒"主動免疫反應(yīng)，使其參與抗腫瘤治 療。送種策略的主要作用是規(guī)避腫瘤的異質(zhì)性，而送種異質(zhì)性是腫瘤細胞對選擇壓力反應(yīng) 的結(jié)果。在送點上，免疫系統(tǒng)特別適合于清除少量殘存的腫瘤細胞，尤其是郝種放療和化療 很難殺滅的靜止期細胞或腫瘤干細胞，送有助于延長無瘤生存期。事實上，即使送種治療 沒有治愈腫瘤，而只是將腫瘤細胞逆轉(zhuǎn)為類似于HIV感染郝樣的亞臨床狀態(tài)，能讓腫瘤在 能夠逃脫激活的免疫系統(tǒng)的監(jiān)控的情況下向免疫系統(tǒng)傾斜，使腫瘤生長進展緩慢或逆轉(zhuǎn)消 退。目前國內(nèi)外非常關(guān)注免疫細胞治療腫瘤。2010年FDA批準DC細胞疫苗治療前 列腺癌具有里程碑意義，世界各國已有200多項治療各種不同腫瘤的DC疫苗進入臨床I、 II期。近年來除了DC細胞疫苗外，其他免疫細胞也用于腫瘤的細胞免疫治療，主要有：細 胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞（巧tokine-imluced1^116'3，(：11(3)、腫瘤侵潤淋己細胞燈比）、 自然殺傷細胞（化化ralkiller,NK)、Capri細胞（也稱鏈式激活的CIK)和Y6T細胞 等，W及不同免疫細胞的組合，主要是DC細胞激活的效應(yīng)細胞（如DC-CIK，DC-CTL)和多 種免疫細胞的聯(lián)合治療，W發(fā)揮送些免疫細胞不同的功能。送些免疫細胞已在臨床上使 用，其中CIK應(yīng)用較為廣泛，DC-CIKs或CTL較單純的效應(yīng)細胞對腫瘤的治療效果好，主要 由于DC和效應(yīng)細胞CIKs和CD8+T之間的相互作用，增加了效應(yīng)細胞對腫瘤的特異殺傷 和效應(yīng)細胞的活化。但DC細胞和效應(yīng)細胞的相互作用非常復(fù)雜，不僅存在MHC-I-表位 多膚復(fù)合物和T細胞受體（TCR)作用的第一信號（Signal-I)和共刺激分子和其受體之 間的作用的第二信號（signal-2)，W及細胞因子刺激的第H信號（signal-3)(圖1)。效 應(yīng)細胞激活后產(chǎn)生共抑制性信號，W減弱因效應(yīng)細胞過度激活對機體產(chǎn)生的傷害，送種抑 制性受體被稱為"免疫檢查點（immunecheckpoint)"。主要有PD-I和共抑制性受體， 如CTLA-4,B和T淋己細胞減弱因子度andTLympho巧teAttenuator,BTLA或CD272)， Tim-3(TcellImmunoglobulinandMucindomain-3),LAG-3(LymphocyteActivation Gene-3)等。其中PD-l/PD-Ll信號途徑是最重要的途徑之一，大量證據(jù)表明PD-I是一個 共抑制受體，在活化的T細胞表達，負調(diào)節(jié)T細胞功能【DrewEPardoll.Theblockade ofimmunecheckpointsincancerimmunotherapy.NATUREREVIEWS|CANCER. 2012, 12(2 53) : 252-264.】。例如，PD-I在抗原-激活的CD8巧細胞高水平表達和CD8巧細胞耗損燈 cellexhausion)相關(guān)。被耗損的CD8巧細胞漸漸失去效應(yīng)功能，包括增殖能力、表達如 比-2、TNF-a和IFN-Y等細胞因子的能力，最終導(dǎo)致細胞調(diào)亡。耗損的PD-1+CD8巧細胞 在腫瘤的腫瘤侵潤淋己細胞（tumor-infiltratingIympho巧tes，TILs)和慢性病毒性感染 得至Iji正明【BadouaC,HansS,MerillonN,etal.PD-1 -Expressin邑Tumor-In円Itratin邑 TCellsAreaFavorablePrognosticBiomarkerinHPV-AssociatedHeadandNeck Cancer.CancerRes. 2013 ;73 (I)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種CIKs細胞的培養(yǎng)體系，其特征在于，在CIKs細胞培養(yǎng)體系中加入PD?1IN[MDX?1106(BMS?936558/ONO?4538,a?fully?human?IgG4anti?PD?1mAb)]。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：都會，鄭義，李智龍，肖艷歸，
申請(專利權(quán))人：深圳市金佳禾生物醫(yī)藥有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44
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