一種非O157產志賀毒素大腸桿菌的高效檢測方法技術

本發明專利技術涉及一種非O157產志賀毒素大腸桿菌的高效檢測方法。該方法包括樣品的采集、樣品的前增菌、二重PCR的鑒定、非O157STEC分離、多重PCR鑒定以及O抗原、H抗原的測定步驟。本發明專利技術大大提高了前增菌的初篩率，并且大大減少了檢測時間，簡化了繁瑣的操作步驟，節省了大量的人力物力，同時減少了因繁瑣操作帶來的人為因素而造成的偏差。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種非O157產志賀毒素大腸桿菌的高效檢測方法，包括以下步驟：(1)樣品的采集(2)樣品的前增菌：將采集的樣品進行前增培養；(3)二重PCR的鑒定：取培養物以煮沸法制得的DNA為模板，進行毒力基因stx1和stx2的二重PCR檢測，剩余的培養物放置4℃冰箱保存；(4)非O157STEC分離：將步驟3中stx1和/或stx2陽性的樣品進行非O157STEC分離；(5)多重PCR鑒定：步驟(4)中PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳，stx1和/或stx2陽性的樣品再進行毒力基因stx1、stx2、eaeA、ehxA的四重PCR檢測；(6)O抗原的測定：步驟(5)中四重PCR檢測的陽性樣品于121℃，2h高壓破壞莢膜，暴露O抗原；取1ml菌液離心12000r/min，5min，棄上清，加5％石炭酸生理鹽水重懸；利用玻板、試管凝集試驗測定O抗原。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：高崧，陳先亮，高清清，吳瑤瑤，李甜甜，姜海清，
申請(專利權)人：揚州大學，
類型：發明
國別省市：江蘇;32